蛋白酶激活受体拮抗剂在抗血小板领域的研究进展

蛋白酶激活受体(protease activated receptors,PARs)是G蛋白偶联受体的家族成员之一。研究发现蛋白酶激活受体可经凝血酶激活诱导血小板的聚集,参与血栓形成过程。人类血小板主要表达蛋白酶激活受体-1和蛋白酶激活受体-4两种受体,因此蛋白酶激活受体-1和蛋白酶激活受体-4可作为抗血小板药物的新靶点。本文介绍了凝血酶诱导蛋白酶激活受体-1、蛋白酶激活受体-4活化的作用机制,并对近年来蛋白酶激活受体-1和蛋白酶激活受体-4小分子拮抗剂的结构、药理活性的研究进展进行总结。

张岩/毛春友教授团队揭示蛋白酶激活受体的栓配体结合和激活机制及G蛋白选择性的结构基础

2024年7月12日,浙江大学基础医学院张岩/毛春友教授团队联合上海药物研究所徐华强团队在《细胞研究》(Cell Research)上发表了题为“Structural basis of tethered agonism and G protein coupling of protease-activated receptor”的研究论文(DOI:10.1038/s41422-024-00997-2),报道了人源PAR1独特的栓配体结合激活机制和G蛋白选择性机制,为开发新型靶向蛋白酶激活受体(PAR)1的G蛋白选择性药物提供了结构基础。

血清基质金属蛋白酶-9、可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体及纤溶酶原激活物抑制因子-1联合检测预测老年慢性心力衰竭患者预后的价值

目的 探讨血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体(suPAR)及纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)表达与老年慢性心力衰竭(CHF)患者心功能分级及预后的关系。方法 选取廊坊市中医医院收治的108例CHF患者及同期50例健康体检者分别作为研究组和对照组。采集受试者血液标本,测定血清MMP-9、suPAR及PAI-1水平。比较不同纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级患者及不同预后患者的血清指标差异,并分析各血清指标对不良预后的预测价值。结果 与对照组相比,研究组血清MMP-9、suPAR、PAI-1水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。NYHA分级Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级CHF患者的血清MMP-9、suPAR、PAI-1水平呈逐渐升高趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。随访1年的结果显示,预后良好65例,预后不良43例,预后不良率为39.81%(43/108)。与预后良好患者相比,预后不良患者的年龄更大,合并高血压率更高,左室射血分数(LVEF)更低,左室舒张末期内径(LVEDD)、MMP-9、suPAR及PAI-1水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,年龄、MMP-9、suPAR、PAI-1均是老年CHF患者预后不良的危险因素,LVEF是老年CHF患者预后不良的保护因素(P<0.05)。血清MMP-9、suPAR、PAI-1单独检测及3项联合检测的曲线下面积(AUC)分别为0.711、0.829、0.768和0.840,3项联合检测的敏感度为88.21%,特异度为79.46%。结论 老年慢性CHF患者的血清MMP-9、suPAR、PAI-1表达水平与心功能分级及预后不良密切相关。

蛋白酶激活受体1在甲型流感病毒感染所致炎症中的作用机制

目的:探究蛋白酶激活受体1(PAR1)在甲型流感病毒(IAV)感染所致的炎症中的作用机制。方法:选取10例甲型流感病毒患者及10名健康受试者作为研究对象,比较二者血清PAR1表达水平。按照不同感染复数将人肺癌细胞系A549细胞分为control组、0.05组、0.1组、0.2组及0.4组,使用MTT法检测各组细胞活性;使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组白细胞介素6(IL-6)水平;使用RT-qPCR检测各组PAR1 mRNA水平;Western blot检测PAR1、Toll样受体3(TLR3)及核因子κB(NF-κB) p65蛋白水平。敲低PAR1或过表达TLR3后,使用Western blot检测各组细胞PAR1、TLR3、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达量。结果:PAR1在IAV感染患者血清及IAV感染的A549细胞中表达上调。与control组细胞相比,IAV感染细胞中细胞活性降低,促炎因子IL-6水平升高,且PAR1的mRNA表达水平上调。si-PAR1抑制了IAV诱导的炎症细胞因子IL-6水平的升高。TLR3过表达逆转了由si-PAR1所致的TLR3、p-NF-κB p65蛋白水平降低(P<0.05)。TLR3过表达逆转了si-PAR1所致的细胞活力和炎性因子的水平(P<0.05)。si-PAR1通过介导TLR3/NF-κB信号通路降低IAV感染所致的炎症反应。结论:敲低PAR1可通过抑制TLR3/NF-κB信号通路降低了IAV感染所致的炎症反应,发挥抗病毒作用。

基于胸腺基质淋巴细胞生成素/蛋白酶激活受体2/瞬时电位受体香草酸受体1/活化T细胞的核因子信号通路探讨麻荆止咳颗粒治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制

目的:通过麻荆止咳颗粒调控胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic Stromal Lymphopoietin,TSLP)/蛋白酶激活受体2(Proteinase Activated Receptor-2,PAR2)/瞬时电位感受器香草酸受体1(Transient Receptor Potential Vanilloid 1,TRPV1)/活化T细胞核因子(Nuclear Factor of Activated T cells,NFAT)信号通路的动物实验,探讨其治疗咳嗽变异性哮喘(Cough Variant Asthma,CVA)的疗效机制。方法:将豚鼠随机分为空白对照组、模型组、中药组和地塞米松组,构建CVA豚鼠模型,药物干预10天,采用辣椒素激发各组豚鼠,观察咳嗽情况;苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色法观察各组肺组织病理学变化;酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Method,ELISA)法检测各组血清TSLP含量;免疫组化染色及实时定量聚合酶链反应(quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)法检测肺组织PAR2、TRPV1、NFAT的表达。结果:与模型组对比,中药组和地塞米松组药物干预后咳嗽次数明显减少;血清TSLP含量显著降低;且肺组织病理变化较模型组明显减轻;PAR2、TRPV1和NFAT的蛋白与mRNA表达均下调。结论:麻荆止咳颗粒可通过抑制CVA模型豚鼠TSLP/PAR2/TRPV1/NFAT信号通路表达,降低气道敏感性及改善气道炎症,达到止咳效果。

低pH插入肽-蛋白酶激活受体1复合物抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的实验研究

目的观察低pH插入肽-蛋白酶激活受体1(pHLIP-P1AP)复合物对三阴性乳腺癌(TNBC)MDA-MB-231细胞增殖的影响。方法设计、合成荧光标记的pHLIP-P1AP。观察MDA-MB-231细胞与MCF-10A细胞表面蛋白酶激活受体1(PAR1)的表达情况。分析不同pH值(7.4、6.0)条件下荧光标记的pHLIP-P1AP与MDA-MB-231细胞的结合情况及其对MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果成功合成了pHLIP-P1AP并进行荧光标记。在酸性环境下(pH 6.0),荧光标记的pHLIP-P1AP与表面高表达PAR1的MDA-MB-231细胞有较强的结合能力,可明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖,pHLIP-P1AP为0.5μg、1μg、2μg、4μg、8μg时,细胞的增殖抑制率分别为3.39%,5.27%,14.29%,22.14%、35.69%。结论MDA-MB-231细胞表面表达大量的PAR1。pHLIP-P1AP在酸性环境下能够有效靶向MDA-MB-231细胞,并抑制MDA-MB-231细胞的生长,有望成为治疗TNBC的有价值的新型药物。

蛋白酶激活受体-1拮抗剂对兔心脏骤停后综合征中肾损伤的保护作用及机制

目的:探讨蛋白酶激活受体-1(PAR-1)拮抗剂对心脏骤停后综合征(PCAS)中肾损伤的影响及机制。方法:将日本大耳白兔随机分为假手术组(n=5)、PCAS组(n=10)、PAR-1拮抗剂组(n=10)。采用窒息性心脏骤停法制备兔PCAS模型。PAR-1拮抗剂组于心肺复苏后10 min给予静脉滴注PAR-1拮抗剂SCH79797(25μg/kg),其余各组给予等量生理盐水静脉滴注。72 h后取股静脉血检测血清肌酐和胱抑素C水平;取肾组织制备石蜡切片后行HE染色;采用TUNEL法测定肾脏细胞凋亡情况;应用Western blot测定肾组织半胱天冬酶(casepase)-3、细胞外调节蛋白激酶(ERK)活化情况。结果:与假手术组相比,PCAS组血清肌酐和胱抑素C水平明显上升,肾组织有大量炎性细胞浸润,凋亡细胞数显著增多,有催化活性的caspase-3裂解片段(cleaved caspase-3)表达增高,磷酸化ERK(p-ERK)表达减少(P<0.05)。与PCAS组相比,PAR-1拮抗剂组肾组织损伤减轻,血清肌酐和胱抑素C水平明显下降,凋亡细胞数减少,cleaved caspase-3表达降低,而p-ERK表达显著增高(P<0.05)。结论:PAR-1拮抗剂SCH79797能抑制PCAS兔肾组织的炎症反应和细胞凋亡,可能与ERK信号通路激活有关。

蛋白酶激活受体-1拮抗剂降低心脏骤停后综合征兔血清炎性细胞因子的水平

目的：观察蛋白酶激活受体-1（PAR-1）拮抗剂对心脏骤停后综合征（PCAS）兔血清TNF-α、MCP-1和IL-8的影响。方法大耳白兔30只，随机分为假手术组、PCAS组、PAR-1拮抗剂组。采用窒息性心脏骤停制备兔PCAS模型。 PAR-1拮抗剂组在自主循环恢复后15 min给予PAR-1拮抗剂SCH79797（25μg／kg）静脉滴注，每天一次，其余各组给予等量生理盐水。48 h取股静脉血测定血清 ALT、cTnT、Cys -C 及 NSE，以监测器官功能的变化。采用ELISA测定血清TNF-α、MCP-1及IL-8水平。结果 PAR-1拮抗剂SCH79797可明显减轻心、脑、肝、肾功能障碍。 PCAS组血清TNF-α、MCP-1和IL-8水平均明显高于假手术组（ P＜0．01）。 PAR-1拮抗剂组TNF-α、MCP-1和IL-8水平均明显低于PCAS模型组（ P＜0．05）。结论 PAR-1拮抗剂SCH79797可降低PCAS兔血清TNF-α、MCP-1和IL-8水平，改善心肺复苏后多器官功能障碍。

蛋白酶激活受体2经RhoA信号抑制人内皮祖细胞增殖、迁移功能

目的:探究蛋白酶激活受体2(protease-activated receptor 2,PAR2)对人内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)功能的影响。方法:EPC予以PAR2天然激动剂类胰蛋白酶、合成激动剂SLIGKV-NH2、合成抑制剂FSLLRY-NH2处理,EdU、Transwell实验观察EPC增殖、迁移,实时定量PCR、ELISA分析检测相关细胞因子及受体表达,免疫印迹法评估Ras同源家族成员A(Ras homolog family member A,RhoA)水平;同时给予RhoA特异性抑制剂Y-27632,观察PAR2活化效应可否被取消。结果:PAR2激动剂可剂量依赖性抑制EPC增殖及迁移(P<0.05),下调血管内皮生长因子A、血管内皮生长因子受体2、基质细胞衍生因子1及趋化性细胞因子受体4等表达(P<0.05),该效应可被PAR2抑制剂取消;活化PAR2可显著上调EPC RhoA表达(P<0.05),抑制PAR2活性可取消该效应;Y-27632可逆转PAR2激动剂导致的EPC细胞增殖、迁移抑制(P<0.05)。结论:PAR2经RhoA信号抑制EPC增殖、迁移功能,是极具潜力的内皮再生与血管生成调控靶点。

蛋白酶激活受体-1在动脉粥样硬化中的作用及其机制研究

目的分析蛋白酶激活受体-1(PAR-1)在动脉粥样硬化中的作用及其机制研究。方法选取40只ApoE(-/-)小鼠,将40只小鼠随机分为对照组、模型组、PAR-1模拟物组、PAR-1抑制剂组,每组10只。比较各组的PAR-1相对表达量、小鼠斑块泡沫细胞占比、斑块脂质核心面积百分比、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平、MAPKs、NF-κB信号通路蛋白。结果PAR-1抑制剂组的PAR-1相对表达量低于PAR-1模拟物组、模型组,高于对照组,差异均有统计学意义(t分别=10.63、8.49、-8.49,P均<0.05);PAR-1抑制剂组的斑块泡沫细胞占比、斑块脂质核心面积百分比低于PAR-1模拟物组、模型组,差异均有统计学意义(t分别=56.21、42.76;20.65、21.72,P均<0.05);PAR-1抑制剂组的ALT、AST、TC、TG低于PAR-1模拟物组、模型组,高于对照组,差异均有统计学意义(t分别=16.84、5.18、-0.99;11.66、5.24、-1.73;31.30、18.85、-52.98;10.10、2.39、-12.38,P均<0.05);PAR-1抑制剂组的MAPKs、NF-κB蛋白低于PAR-1模拟物组、模型组,高于对照组,差异均有统计学意义(t分别=12.89、8.49、-2.86;8.43、4.79、-3.43,P均<0.05)。结论抑制PAR-1表达,可以使小鼠斑块泡沫细胞占比、斑块脂质核心面积百分比降低,改善小鼠血脂水平,其机制可能与MAPKs/NF-κB信号通路被抑制有关。

血清过氧化物酶体增殖物激活受体和基质金属蛋白酶9水平与支原体肺炎患儿肠道菌群的相关性及其诊断价值

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平与支原体肺炎(MPP)患儿肠道菌群的相关性及其诊断价值,为MMP的诊疗提供新的方向。方法选取2021年1月至2023年1月在河间市人民医院儿科入院治疗的100例MPP患儿为研究对象,根据病程分为急性期组(48例)和恢复期组(52例),并取同期于河间市人民医进行常规体检的健康儿童50例作为对照组,比较三组肠道菌群(大肠埃希菌、双歧杆菌、拟杆菌、肠球菌、乳酸杆菌)数量和血清PPARγ、MMP-9水平。Pearson相关性分析大肠埃希菌、双歧杆菌、拟杆菌、肠球菌、乳酸杆菌与血清PPARγ、MMP-9水平的相关性。Logistic回归分析急性期和恢复期MPP的影响因素;采用ROC曲线分析血清PPARγ、MMP-9及乳酸杆菌水平对急性期MPP的诊断价值。结果急性期组与恢复期组大肠埃希菌、肠球菌数量,以及血清MMP-9水平高于对照组,且急性期组高于恢复期组(P<0.05);急性期组与恢复期组双歧杆菌、拟杆菌、乳酸杆菌数量,以及血清PPARγ水平低于对照组,且急性期组低于恢复期组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,大肠埃希菌、肠球菌数量与血清PPARγ水平呈负相关性(P<0.05),双歧杆菌、拟杆菌、乳酸杆菌数量与血清PPARγ水平呈正相关性(P<0.05);大肠埃希菌、肠球菌数量与血清MMP-9水平呈正相关性(P<0.05),双歧杆菌、拟杆菌、乳酸杆菌数量与血清MMP-9水平呈负相关性(P<0.05)。Logistic回归分析显示,PPARγ是急性期、恢复期MPP发生的保护因素(P<0.05),MMP-9是急性期、恢复期MPP发生的危险因素(P<0.05),乳酸杆菌是急性期MPP发生的保护因素(P<0.05)。血清PPARγ、MMP-9、乳酸杆菌以及两者联合诊断急性期MPP的AUC分别为0.797、0.761、0.839、0.905,联合诊断的敏感度为93.24%,特异度为76.34%,三者联合优于血清PPARγ、MMP-9、乳酸杆菌各自单独诊断(Z三者联合-PPARγ=2.604,P<0.001;Z三者联合-MMP-9=3.310,P=0.007;Z三者联合-乳酸杆菌=2.810,P=0.008)。结论MPP患儿血清PPARγ水平随着大肠埃希菌、肠球菌数量减少及双歧杆菌、拟杆菌、乳酸杆菌数量增加而升高,血清MMP-9水平随着大肠埃希菌、肠球菌数量增加及双歧杆菌、拟杆菌、乳酸杆菌数量减少而升高。血清PPARγ、MMP-9及乳酸杆菌三者对急性期MPP具有一定的诊断价值,三者联合具有更高的效能。

桃红四物汤对蛋白酶激活受体激活诱导血小板释放VEGF和Endostatin的影响

目的考察桃红四物汤对蛋白酶激活受体(PARs)激动剂诱导人血小板聚集、释放血管内皮生长因子(VEGF)和内皮抑素(endostatin)以及释放液对内皮细胞增殖的作用。方法人富血小板血浆和不同质量浓度的桃红四物汤(0.5～2.5 mg/mL)孵育5 min后,加入PAR1选择性激动剂(SFLLRN-NH2,10μmol/L)或PAR4选择性激动剂(AYPGKF-NH2,200μmol/L)或凝血酶(1 U/mL),血小板聚集仪测定血小板聚集,ELISA测定血小板离心后上清中VEGF和endostatin,MTT测定释放液对内皮细胞增殖的作用。结果桃红四物汤在质量浓度0.5～2.5 mg/mL剂量依赖性的抑制凝血酶和PAR1-AP诱导的血小板聚集,但是对PAR4-AP诱导的血小板聚集没有显著的抑制作用;2.5 mg/mL桃红四物汤可抑制PAR1-AP诱导血小板释放VEGF以及PAR4-AP诱导endostatin释放;对PAR1-AP诱导释放液引起内皮细胞的增殖具有抑制作用,而对PAR4-AP诱导的释放液引起内皮细胞增殖减少具有促进作用。结论桃红四物汤抑制PAR1-AP诱导的血小板聚集,调节血小板释放VEGF和endostatin以及内皮细胞增殖可能是其发挥活血化瘀作用的机制之一。

蛋白酶激活受体2(PAR-2)激动剂对肥大细胞释放类胰蛋白酶的影响

研究反肉桂酰 亮 异亮 甘 精 亮 鸟 [酰胺 ](tc LIGRLO) ,一种PAR 2激动剂 ,对肥大细胞类胰蛋白酶释放的影响。结果显示 ,经过 15min的培养 ,tc LIGRLO可引起比基础分泌量增加 1倍以上的类胰蛋白酶释放 ,作用强度超过抗IgE抗体和钙离子导入剂 (calciumionophoreA2 3 187,CI)。而反PAR 2激动剂 反肉桂酰 鸟 亮 精 甘 异亮 亮 [酰胺 ](tc OLRGIL)无此作用。培养时间延长到 3 0min时对tc LIGRLO的作用无明显影响。其时间关系曲线表明 ,tc LIGRLO的作用从 1min开始 ,3min后达高峰。结果表明 ,PAR 2激动剂tc LIGR LO是一种高效类胰蛋白酶释放刺激剂 ,在肥大细胞上可能有PAR

蛋白酶激活受体2激动剂对食管癌EC109细胞侵袭转移的促进作用

目的:探讨人食管癌细胞株EC109蛋白酶激活受体-2(PAR-2)的表达,以及内源性PAR-2激动剂胰蛋白酶和PAR-2激动肽SLIGKV对该细胞侵袭转移的影响及其可能的分子机制.方法:采用RT-PCR法和免疫细胞化学染色法检测EC109细胞中PAR-2mRNA及蛋白的表达情况;胰蛋白酶和SLIGKV对细胞施加干预后,MTT法检测细胞增殖情况,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力的变化,RT-PCR法检测PAR-2、MMP-2/MMP-9mRNA表达的变化,明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9明胶酶活性的变化.结果:食管癌细胞EC109在胰蛋白酶和SLIGKV刺激后,PAR-2mRNA表达较对照组显著上调(0.781±0.045、0.653±0.029vs0.491±0.032,均P<0.01);胰蛋白酶在1-10nmol/L、SLIGKV在1-50μmol/L时可促进细胞增殖(P<0.01或0.05),呈剂量依赖性;Transwell小室实验中胰蛋白酶组及SLIGKV组的细胞侵袭和迁移能力显著高于对照组及反肽组(72.5±9.2、59.4±8.7vs31.6±6.6、36.2±9.8,均P<0.01);胰蛋白酶及PAR-2激动肽作用后细胞MMP-9mRNA的表达量明显高于对照组及反激动肽组(0.719±0.034、0.466±0.042vs0.341±0.032、0.370±0.021,均P<0.01),细胞水解明胶的能力也明显高于对照组及反激动肽组(75.6±6.1、60.4±4.6vs44.9±4.2、39.3±5.2,均P<0.01).而对MMP-2的mRNA表达和水解明胶的能力无明显影响(P>0.05).结论:食管癌EC109细胞表达PAR-2受体,且内源性PAR-2激动剂胰蛋白酶和PAR-2激动肽SLIGKV可能通过激活PAR-2受体上调MMP-9表达,进而促进食管癌细胞侵袭转移.

白三烯受体拮抗剂对哮喘大鼠基质金属蛋白酶-9及其抑制剂表达的影响

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其组织抑制物(TIMP-1)在支气管哮喘发病中的作用,评价白三烯受体拮抗剂对其的调节作用。方法应用ELISA、免疫组织化学、Western-blot及RT-PCR技术对白三烯受体拮抗剂治疗前后大鼠肺组织中MMP-9及TIMP-1表达进行研究。结果①大鼠肺组织MMP-9mRNA表达:哮喘7d组为(2.74±0.41),21d组为(1.69±0.25),白三烯受体拮抗剂治疗组为(0.91±0.20),正常对照组为(0.64±0.13),组间比较差异有统计学意义(F=123.42,P<0.01)。大鼠肺组织TIMP-1mRNA表达:哮喘7d组为(1.53±0.21),21d组为(1.98±0.28),白三烯受体拮抗剂治疗组(1.03±0.17),正常对照组(0.71±0.10),组间比较差异有统计学意义(F=65.59,P<0.01)。②RT-PCR结果与Westernblot结果一致。结论从蛋白质水平及分子水平显示哮喘大鼠模型肺组织MMP-9表达升高,TIMP-1表达亦增强;白三烯受体拮抗剂可能通过下调MMP-9及TIMP-1表达来抑制气道炎症和气道重塑。

蛋白酶激活受体1和2在结肠癌细胞的表达及其作用初探

目的:探讨蛋白酶激活受体1和2(PAR1和PAR2)在结肠癌细胞株SW620和SW480细胞的表达及其作用。方法:采用免疫细胞化学染色及RT-PCR法检测SW620和SW480细胞有无PAR1和PAR2蛋白及其mRNA的表达;利用各自不同的激动剂、拮抗剂及相关抗体,观察对细胞迁移和增殖能力的影响以及对细胞分泌白细胞介素8(IL-8)的影响。结果:结肠癌细胞株SW620和SW480均有PAR1和PAR2 mRNA的表达,但仅见SW620细胞表面具有PAR2蛋白的高表达,PAR1蛋白表达不明显;SW480细胞表面既无PAR1也无PAR2蛋白的表达。SW620细胞的迁移能力明显高于SW480细胞,PAR1和PAR2的激动剂以及因子Ⅶa均可促进SW620细胞的增殖、迁移和IL-8的分泌;PAR2拮抗剂对细胞迁移起抑制作用,抗PAR2抗体对细胞的增殖和迁移均有干预作用。结论:蛋白酶激活受体2在结肠癌细胞表面大量表达,可增强细胞的增殖和迁移能力及IL-8的分泌,表明与肿瘤的转移能力及恶性程度密切相关。

左-甲状腺素诱导的大鼠肥大心肌中基质金属蛋白酶的变化及新内皮素受体拮抗剂CPU-0213的作用

目的 :通过新内皮素受体拮抗剂CPU 0 2 13对左 甲状腺素 (L thy)诱导的大鼠肥大心肌中基质金属蛋白酶 (MMPs)的改变 ,探讨内皮素参与诱导心肌肥大和细胞外基质改变的机制。方法 :雄性SD大鼠随机分成 3组 ,除对照组外 ,大鼠每日给予L thy (sc ,0 .4mg/kg)共 10d ,药物干预组在第 7天时给新型内皮素受体拮抗剂CPU 0 2 13(po ,10 0mg/kg) ,连续 3d。动物处死后取大鼠心脏测定心肌组织中总胶原含量、MDA的含量及SOD活性。大鼠左心室的MMPs的活性由明胶酶谱法测定 ,Ⅰ型胶原基因 (proα2 (Ⅰ )collagen)的基因表达由半定量RT PCR方法确定。结果 :L thy心肌病组大鼠心肌中的总胶原含量减少 ,SOD活性下降 ,MDA含量增多 ,MMPs的活性被抑制。RT PCR结果显示L thy组的大鼠左心室proα2 (Ⅰ )collagen的基因表达下调。给予CPU 0 2 13干预后大鼠心肌总胶原含量及SOD活性上升 ,MDA含量减少 ,大鼠左心室中MMPs活性被抑制 ,左心室中proα2 (Ⅰ )collagen的基因表达上调。结论 :L thy诱导的大鼠心肌肥大是一种缺少纤维化的肥大 ,肥大心肌中自由基增多且脂质膜受损。内皮素 1(ET 1)参与介导心肌MMPs活性的调节 ,新内皮素受体拮抗剂CPU 0 2 13能明显上调proα2(Ⅰ )

肥大细胞及蛋白酶激活受体-2在肠易激综合征中的作用

目的:探讨肥大细胞及蛋白酶激活受体-2(protease activated receptor-2,PAR-2)在肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)中的作用.方法:2012-01/2012-12自南京医科大学附属南京医院消化内科门诊随机选取腹泻型IBS患者60例及正常者30例,采用免疫组织化学检测各组肥大细胞、PAR-2蛋白的表达强度;采用Western blot检测各组Occludin的表达量.结果:免疫组织化学法结果显示IBS-D组与对照组相比,肥大细胞表达明显增多(5.20±2.78vs 1.40±0.55,P<0.05);PAR-2蛋白的表达明显增多(3.20±1.64 vs 1.20±0.45,P<0.05);Western blot结果示IBS-D组Occludin蛋白的表达明显低于正常组(2108.33±59.58 vs 3113.00±77.74,P<0.01).结论:本研究提示IBS-D患者肥大细胞过表达、激活后可刺激PAR-2活化,从而进一步损伤细胞间紧密连接.

蛋白酶激活受体2在溃疡性结肠炎患者肠黏膜中的表达

目的探讨溃疡性结肠炎(UC)患者肠黏膜蛋白酶激活受体2(PAR-2)表达和肥大细胞的变化,以及两者在UC发病机制中的作用。方法32个黏膜标本取自行结肠镜检查的UC患者,对照组肠黏膜取自15名健康成人,半定量RT-PCR检测两组肠黏膜PAR-2的mRNA表达,免疫组化方法检测PAR-2蛋白表达和肥大细胞数量。结果与对照组相比,UC肠黏膜中PAR-2mRNA和蛋白过度表达,PAR-2mRNA表达与疾病严重程度正相关(P<0.01)。UC组肠黏膜肥大细胞数显著高于对照组(P<0.01)。免疫组化结果显示,PAR-2蛋白表达于UC肠黏膜表面上皮、隐窝上皮和固有层炎性细胞。病理分级Ⅲ、Ⅳ级肠黏膜PAR-2蛋白表达及肥大细胞数较病理分级Ⅰ、Ⅱ级组明显增加(P<0.05)。PAR-2与肥大细胞数量之间呈正相关(r=0.78,P<0.01)。结论UC的发生发展与PAR-2的表达、肥大细胞数量变化密切相关,PAR-2可能由肥大细胞分泌的类胰蛋白酶激活而参与UC的发病。

蛋白酶激活受体在炎性肠病大鼠模型迷走神经背侧运动核的表达及作用

目的:研究炎性肠病大鼠模型的迷走神经背侧运动核(DMNV)蛋白酶激活受体(PAR-1,PAR-2)存在的情况,并阐明该受体激活的机制。方法:制备20只炎性肠病的大鼠模型中取DMNV组织检测PAR-1和PAR-2;培养新出生的大鼠DMNV原代细胞,利用钙离子荧光探针Fura-2-AM检测PAR-1和PAR-2及各种影响因素对细胞钙内流的影响。结果:凝血酶和其类似物PARP-1可以分别激活PAR-1出现最大钙离子内流223.3%±23.5%和145.6%±17.2%;胰蛋白酶和其类似物PARP-2分别激活PAR-2出现最大钙离子内流242.7%±28.7%和236.7%±19.8%。使用1μmol/L磷脂酶C抑制剂U73312可以降低PAR-1激活的细胞钙离子内流140.1%±16.5%到20.7%±2.5%;降低PAR-2激活的钙离子内流225.4%±20.5%到45.4%±5.6%。钙离子抑制剂2APB可以降低PAR-1和PAR-2激活钙离子内流149.7%±13.4%和195.1%±21.5%分别到63.2%±4.3%和75.3%±13.5%。结论:在DMNV中存在PAR-1和PAR-2,它们激活后通过磷脂酶C激活和1,4,5-三磷酸肌醇信号通路参与进行调解钙离子内流。