超声收缩期峰值血流速度、阻力指数与乳腺癌组织中Survivin、基质金属蛋白酶-11、人类表皮生长因子受体2关系研究

目的:探讨超声收缩期峰值血流速度(PSV)、阻力指数(RI)与乳腺癌组织中Survivin、基质金属蛋白酶-11(MMP-11)、人类表皮生长因子受体2(HER2)的关系。方法:选取60例乳腺癌患者作为观察组,另选择同期60例乳腺良性病变患者作为对照组。均行手术治疗,术前经超声检测,比较两组患者术前RI值、PSV值,免疫组化法检测术后癌组织中Survivin、MMP-11、HER2的表达,分析Survivin、MMP-11、HER2表达与超声RI、PSV值的关系。结果:观察组RI、PSV值高于对照组(均P<0.05)。观察组癌组织中Survivin、MMP-11、HER2表达阳性率高于对照组(均P<0.05)。不同病灶直径、临床分期患者RI、PSV值,不同病灶直径、临床分期及是否淋巴结转移患者癌组织中Survivin、MMP-11、HER2表达比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。癌组织中Survivin、MMP-11、HER2表达与PSV、RI值呈正相关(均P<0.05)。结论:超声检测RI、PSV值对术前判断乳腺癌有一定价值,RI、PSV值与乳腺癌癌组织Survivin、MMP-11、HER2表达均相关,Survivin、MMP-11、HER2在乳腺癌的发生、发展过程中发挥重要作用。

基于胸腺基质淋巴细胞生成素/蛋白酶激活受体2/瞬时电位受体香草酸受体1/活化T细胞的核因子信号通路探讨麻荆止咳颗粒治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制

目的:通过麻荆止咳颗粒调控胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic Stromal Lymphopoietin,TSLP)/蛋白酶激活受体2(Proteinase Activated Receptor-2,PAR2)/瞬时电位感受器香草酸受体1(Transient Receptor Potential Vanilloid 1,TRPV1)/活化T细胞核因子(Nuclear Factor of Activated T cells,NFAT)信号通路的动物实验,探讨其治疗咳嗽变异性哮喘(Cough Variant Asthma,CVA)的疗效机制。方法:将豚鼠随机分为空白对照组、模型组、中药组和地塞米松组,构建CVA豚鼠模型,药物干预10天,采用辣椒素激发各组豚鼠,观察咳嗽情况;苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色法观察各组肺组织病理学变化;酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Method,ELISA)法检测各组血清TSLP含量;免疫组化染色及实时定量聚合酶链反应(quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)法检测肺组织PAR2、TRPV1、NFAT的表达。结果:与模型组对比,中药组和地塞米松组药物干预后咳嗽次数明显减少;血清TSLP含量显著降低;且肺组织病理变化较模型组明显减轻;PAR2、TRPV1和NFAT的蛋白与mRNA表达均下调。结论:麻荆止咳颗粒可通过抑制CVA模型豚鼠TSLP/PAR2/TRPV1/NFAT信号通路表达,降低气道敏感性及改善气道炎症,达到止咳效果。

蛋白酶激活受体2经RhoA信号抑制人内皮祖细胞增殖、迁移功能

目的:探究蛋白酶激活受体2(protease-activated receptor 2,PAR2)对人内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)功能的影响。方法:EPC予以PAR2天然激动剂类胰蛋白酶、合成激动剂SLIGKV-NH2、合成抑制剂FSLLRY-NH2处理,EdU、Transwell实验观察EPC增殖、迁移,实时定量PCR、ELISA分析检测相关细胞因子及受体表达,免疫印迹法评估Ras同源家族成员A(Ras homolog family member A,RhoA)水平;同时给予RhoA特异性抑制剂Y-27632,观察PAR2活化效应可否被取消。结果:PAR2激动剂可剂量依赖性抑制EPC增殖及迁移(P<0.05),下调血管内皮生长因子A、血管内皮生长因子受体2、基质细胞衍生因子1及趋化性细胞因子受体4等表达(P<0.05),该效应可被PAR2抑制剂取消;活化PAR2可显著上调EPC RhoA表达(P<0.05),抑制PAR2活性可取消该效应;Y-27632可逆转PAR2激动剂导致的EPC细胞增殖、迁移抑制(P<0.05)。结论:PAR2经RhoA信号抑制EPC增殖、迁移功能,是极具潜力的内皮再生与血管生成调控靶点。

蛋白酶激活受体2(PAR-2)激动剂对肥大细胞释放类胰蛋白酶的影响

研究反肉桂酰 亮 异亮 甘 精 亮 鸟 [酰胺 ](tc LIGRLO) ,一种PAR 2激动剂 ,对肥大细胞类胰蛋白酶释放的影响。结果显示 ,经过 15min的培养 ,tc LIGRLO可引起比基础分泌量增加 1倍以上的类胰蛋白酶释放 ,作用强度超过抗IgE抗体和钙离子导入剂 (calciumionophoreA2 3 187,CI)。而反PAR 2激动剂 反肉桂酰 鸟 亮 精 甘 异亮 亮 [酰胺 ](tc OLRGIL)无此作用。培养时间延长到 3 0min时对tc LIGRLO的作用无明显影响。其时间关系曲线表明 ,tc LIGRLO的作用从 1min开始 ,3min后达高峰。结果表明 ,PAR 2激动剂tc LIGR LO是一种高效类胰蛋白酶释放刺激剂 ,在肥大细胞上可能有PAR

内镜下胃癌活检组织中组织蛋白酶D和人类表皮生长因子受体2表达及意义

目的:探讨内镜下胃癌活检组织中组织蛋白酶D(CTSD)和人类表皮生长因子受体2(HER2)表达及意义。方法:选取行内镜活检的胃癌患者81例为研究对象。通过免疫组化法检测胃癌活检组织中CTSD、HER2的表达,并进行随访。分析两者表达与胃癌患者临床病理特征的关系。绘制Kaplan-Meier曲线分析两者表达与胃癌患者预后的关系;采用Cox比例风险回归模型分析胃癌患者预后的影响因素。结果:CTSD和HER2在胃癌活检组织中阳性表达率分别为46.91%、20.99%。CTSD表达与胃癌分化程度、淋巴结转移及临床分期有关(均P<0.05)。HER2表达与胃癌分化程度、Lauren分型、淋巴结转移及临床分期有关(均P<0.05)。CTSD表达阳性患者5年生存率低于CTSD表达阴性患者5年生存率(26.32%与55.81%,P<0.05)。HER2表达阳性患者5年生存率与阴性患者比较,差异无统计学意义(29.41%与45.31%,P>0.05)。Lauren分型、HP感染、淋巴结转移、临床分期及CTSD表达为胃癌患者预后的独立影响因素(均P<0.05)。结论:胃癌活检组织中CTSD和HER2的表达与胃癌分化程度、淋巴结转移等临床病理特征相关,且CTSD表达可作为胃癌患者预后的独立影响因素。

盐酸安罗替尼对晚期肝癌患者肝功能、基质金属蛋白酶、血管内皮生长因子受体2及预后的影响

目的探讨盐酸安罗替尼对晚期肝癌患者肝功能、基质金属蛋白酶(MMP)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)及预后的影响。方法根据治疗方法的不同将102例晚期肝癌患者分为观察组和对照组,每组51例,对照组患者予以经导管动脉栓塞化疗(TACE),观察组患者在对照组的基础上予以盐酸安罗替尼治疗。比较两组患者的肝功能指标[白蛋白(ALB)、丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)]、MMP2、MMP9、MMP11、VEGFR2水平、不良反应发生情况及预后。结果治疗后,两组患者的ALB水平均高于本组治疗前,ALT、TBIL水平均低于本组治疗前,观察组患者的ALB水平高于对照组,ALT、TBIL水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。治疗后,两组患者的血清MMP2、MMP9、MMP11、VEGFR2水平均低于本组治疗前,观察组患者的血清MMP2、MMP9、MMP11、VEGFR2水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。两组患者发热、腹痛、乏力、瘙痒、腹泻、恶心呕吐发生率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。观察组患者3个月、6个月、1年生存率均高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论晚期肝癌患者在TACE的基础上采用盐酸安罗替尼治疗可有效改善肝功能,调节MMP和VEGFR2水平,安全性较高,临床应用效果显著。

蛋白酶激活受体2介导肥大细胞IL-4分泌

目的:探讨蛋白酶激活受体2(Proteinase activated receptor-2,PAR-2)的激活对肥大细胞P815介质分泌的影响。方法:肥大细胞培养后用PAR-2激动肽,胰蛋白酶、类胰蛋白酶、弹性蛋白酶结合PAR-2拮抗肽激发肥大细胞,收集上清并用ELISA方法检测组胺、IL-4和IL-6的水平。结果:PAR-2激动肽、胰蛋白酶、类胰蛋白酶以浓度依赖的方式促进肥大细胞P815分泌IL-4。PAR-2拮抗肽能阻断胰蛋白酶和类胰蛋白酶引起的肥大细胞IL-4分泌(P<0.05)。胰蛋白酶、类胰蛋白酶以及PAR-2激动肽对肥大细胞IL-6的分泌和组胺释放无明显影响。弹性蛋白酶对肥大细胞IL-4、IL-6分泌及组胺释放功能无影响。结论:PAR-2的激活介导肥大细胞P815分泌IL-4;胰蛋白酶和类胰蛋白酶刺激肥大细胞IL-4分泌的发现为肥大细胞激活的自我放大机制提供了新的理论依据。

在食管癌细胞增殖过程中蛋白酶激活受体-2(PAR-2)对细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的调控机制

目的:探讨在食管癌细胞增殖过程中蛋白酶激活受体-2(PAR-2)影响细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的机制。方法:方法:使用食管癌EC109细胞株,实验分为:空白对照组、PAR-2激动组(加入激动剂SLIGKV)、PAR-2反激动组(加入反激动剂VKGILS)、PAR-2 shRNA组(PAR-2shRNA成功转染)和MAPK抑制组(加入阻滞剂PD98059);取对数生长期的细胞,以6×104 cells/ml的密度接种于培养瓶中,置于孵育箱中培养24 h后使用PBS清洗3次,更换为无血清的1640培养基培养24 h,之后各实验组按实验设计分别加入所需试剂,每组设置3个复孔,于孵育箱中继续培养24 h,采用RT-PCR法检测PAR-2、ERK1、CyclinD1的mRNA的表达水平;采用Western blot法检测PAR-2、ERK1、p-ERK1、CyclinD1的蛋白表达水平。结果:与空白对照组相比,PAR-2激动组PAR-2mRNA、ERK1 mRNA、和CyclinD1 mRN表达明显升高(P<0.05),PAR-2、p-ERK1和CyclinD1蛋白表达升高(P<0.05);PAR-2 shRNA组PAR-2mRNA、ERK1 mRNA和CyclinD1 mRNA表达降低(P<0.05),PAR-2、p-ERK1和CyclinD1蛋白表达降低(P<0.05);MAPK抑制组ERK1 mRNA和CyclinD1 mRNA表达明显降低(P<0.05),p-ERK1和CyclinD1表达降低(P<0.05)。结论:PAR-2可通过MAPK通路调节CyclinD1的表达从而促进食管癌细胞EC109的增殖。

蛋白酶激活受体2激动剂对食管癌EC109细胞侵袭转移的促进作用

目的:探讨人食管癌细胞株EC109蛋白酶激活受体-2(PAR-2)的表达,以及内源性PAR-2激动剂胰蛋白酶和PAR-2激动肽SLIGKV对该细胞侵袭转移的影响及其可能的分子机制.方法:采用RT-PCR法和免疫细胞化学染色法检测EC109细胞中PAR-2mRNA及蛋白的表达情况;胰蛋白酶和SLIGKV对细胞施加干预后,MTT法检测细胞增殖情况,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力的变化,RT-PCR法检测PAR-2、MMP-2/MMP-9mRNA表达的变化,明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9明胶酶活性的变化.结果:食管癌细胞EC109在胰蛋白酶和SLIGKV刺激后,PAR-2mRNA表达较对照组显著上调(0.781±0.045、0.653±0.029vs0.491±0.032,均P<0.01);胰蛋白酶在1-10nmol/L、SLIGKV在1-50μmol/L时可促进细胞增殖(P<0.01或0.05),呈剂量依赖性;Transwell小室实验中胰蛋白酶组及SLIGKV组的细胞侵袭和迁移能力显著高于对照组及反肽组(72.5±9.2、59.4±8.7vs31.6±6.6、36.2±9.8,均P<0.01);胰蛋白酶及PAR-2激动肽作用后细胞MMP-9mRNA的表达量明显高于对照组及反激动肽组(0.719±0.034、0.466±0.042vs0.341±0.032、0.370±0.021,均P<0.01),细胞水解明胶的能力也明显高于对照组及反激动肽组(75.6±6.1、60.4±4.6vs44.9±4.2、39.3±5.2,均P<0.01).而对MMP-2的mRNA表达和水解明胶的能力无明显影响(P>0.05).结论:食管癌EC109细胞表达PAR-2受体,且内源性PAR-2激动剂胰蛋白酶和PAR-2激动肽SLIGKV可能通过激活PAR-2受体上调MMP-9表达,进而促进食管癌细胞侵袭转移.

肥大细胞及蛋白酶激活受体-2在肠易激综合征中的作用

目的:探讨肥大细胞及蛋白酶激活受体-2(protease activated receptor-2,PAR-2)在肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)中的作用.方法:2012-01/2012-12自南京医科大学附属南京医院消化内科门诊随机选取腹泻型IBS患者60例及正常者30例,采用免疫组织化学检测各组肥大细胞、PAR-2蛋白的表达强度;采用Western blot检测各组Occludin的表达量.结果:免疫组织化学法结果显示IBS-D组与对照组相比,肥大细胞表达明显增多(5.20±2.78vs 1.40±0.55,P<0.05);PAR-2蛋白的表达明显增多(3.20±1.64 vs 1.20±0.45,P<0.05);Western blot结果示IBS-D组Occludin蛋白的表达明显低于正常组(2108.33±59.58 vs 3113.00±77.74,P<0.01).结论:本研究提示IBS-D患者肥大细胞过表达、激活后可刺激PAR-2活化,从而进一步损伤细胞间紧密连接.

蛋白酶激活受体-2对缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡的影响

目的探讨蛋白酶激活受体-2(PAR-2)活化对缺血再灌注(I/R)大鼠心肌细胞凋亡的影响及细胞外信号调节激酶(ERK)1/2在此过程中的作用。方法40只雄性SD大鼠随机均分为5组(n=8):假手术组,I/R组,PD组(0.3mg/kgERK1/2通路制剂PD98059),PAR-2AP组(3mg/kgPAR-2激活肽SLIGRL-NH2),PD+PAR-2AP组。建立大鼠在体心肌I/R模型。采用末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学法检测各组凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,Western blotting检测各组大鼠心肌组织中磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达水平。结果与假手术组相比,I/R组、PD组、PAR-2AP组、PD+PAR-2AP组的凋亡指数,Bcl-2、Bax蛋白表达及p-ERK1/2水平均明显增高(P<0.01)。与I/R组比较,PAR-2AP可使凋亡指数和Bax蛋白表达降低,而使Bcl-2的表达和p-ERK1/2水平增加;与PAR-2AP组比较,PD+PAR-2AP组凋亡指数和Bax蛋白表达增加,Bcl-2的表达和p-ERK1/2水平降低。PAR-2AP抑制凋亡的效应可被PD98059部分阻断。结论PAR-2活化后可增加Bcl-2蛋白的表达,降低Bax的表达,从而部分抑制大鼠I/R心肌细胞的凋亡,发挥心肌保护效应,其机制可能涉及ERK路径。

蛋白酶激活受体2在人中性粒细胞弹性蛋白酶诱发气道黏液速发式分泌中的作用及机制

目的研究蛋白酶激活受体2(protease-activated receptor 2,PAR2)在人中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)诱发气道黏蛋白(mucin,MUC)5AC速发式分泌中的作用及机制。方法用Western blot法检测对照组及NE刺激组Calu-3细胞中PARs的表达。NE分别干预野生型(空白对照组)及转染PARs siRNA的Calu-3细胞,通过ELISA法检测其上清液中MUC5AC的表达,采用Fluo-3AM荧光探针法检测细胞内Ca2+浓度、Western blot法检测胞膜及胞质中蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)水平。NE分别刺激空白对照组、转染PAR2siRNA组、细胞内钙离子螯合剂BAPTA-AM预处理组及PKC抑制剂Chelerythrine预处理组,再通过ELISA法检测其上清液中MUC5AC浓度、细胞免疫荧光法测定细胞质内滞留的MUC5AC。结果 Calu-3细胞系中PAR1、PAR2、PAR3蛋白均呈阳性表达,其中以PAR2为主,而PAR4则呈近似阴性表达。NE刺激Calu-3细胞,其PAR1、PAR3表达较空白对照组无明显变化(P>0.05),而PAR2则较空白对照组明显增加(P<0.05)。NE刺激野生型Calu-3细胞,其上清液中MUC5AC分泌量及细胞内Ca2+浓度较刺激前明显增加(均P<0.05);而转染PAR2siRNA组,其MUC5AC分泌量增加不明显(P>0.05),细胞内Ca2+浓度升高水平也不及空白对照组(P<0.05)。同时,空白对照组PKC主要存在于胞质中,当给予NE刺激以后,PKC被引导至胞膜。转染PAR2siRNA,细胞内Ca2+螯合剂BAPTA-AM及PKC选择性抑制剂Chelerythrine预处理,均可部分削弱NE刺激后细胞上清液中MUC5AC水平的升高(均P<0.05)。结论 NE刺激可导致Calu-3细胞PAR2表达上调,并通过激活PAR2、增加细胞内Ca2+浓度、PKC激活及膜移位导致MUC5AC的速发式分泌。

蛋白酶激活受体-2基因靶向shRNA表达质粒的构建及转染食管癌细胞致沉默效应的研究

目的:构建靶向蛋白酶激活受体-2(PAR-2)基因的shRNA表达质粒,建立PAR-2基因沉默的食管癌EC109稳定细胞株。方法:针对人PAR-2的mRNA序列,设计并体外合成编码shRNA的两条特异性寡核苷酸序列,分别插入pGFP-V-RS质粒中构建2个shRNA表达质粒(PAR-2shRNA-1、PAR-2shRNA-2),经过鉴定,然后将表达质粒转染至食管癌细胞EC109中,经嘌呤霉素筛选,获得稳定干扰的细胞株,运用RT-PCR和WesternBlot检测PAR-2的表达。结果:PAR-2shRNA-1转染人食管癌细胞EC109后,PAR-2基因表达在mRNA和蛋白质水平都受到显著抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建针对PAR-2基因的shRNA表达质粒,转染食管癌细胞EC109,能有效抑制该细胞株PAR-2基因的表达。

蛋白酶激活受体-2在原发性肝癌组织中的表达

目的:研究蛋白酶激活受体-2(PAR-2)在原发性肝癌(PHC)中的蛋白表达水平,并探讨其临床价值.方法:采用免疫组织化学和免疫荧光技术检测41例PHC患者癌组织和癌旁正常组织中PAR-2的蛋白表达水平.结果:PAR-2在PHC组织及癌旁正常组织中均有不同程度的表达,癌旁组织主要表现为核周胞质染色,而肝癌组织呈弥漫性胞质染色.PHC与癌旁组织的表达差异具有显著性意义(92.67±8.53vs57.52±7.31,P<0.05);不同组织学类型的肝癌表达不均衡,肝细胞癌高于胆管细胞癌,但差异无统计学意义(141.05±18.36vs112.10±10.05,P>0.05);肿瘤转移者高于无转移者,差异有统计学意义(167.83±8.91vs73.25±4.05,P<0.05).结论:PAR-2在PHC中高表达;PAR-2的表达与PHC的发生和发展密切相关.

银杏达莫注射液对机械通气所致肺损伤大鼠蛋白酶激活受体-2表达的影响

目的观察银杏达莫注射液对机械通气相关性肺损伤（VILI）肺组织蛋白酶激活受体-2（PAR-2）表达的影响。方法21只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、过度通气组、银杏达莫干预组，每组7只。所有大鼠均行气管切开插管、右颈总动脉穿刺置管术；对照组不进行机械通气；过度通气组及银杏达莫组大鼠气管插管外接动物呼吸机，通气3h。银杏达莫干预组大鼠于实验前24h腹腔注射银杏达莫注射液1．6mL／kg，机械通气开始时尾静脉注射等剂量银杏达莫注射液。制模成功后测定大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-8（IL-8）水平；取肺组织，光镜下观察病理学变化并进行损伤病理评分，用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫组化法检测肺组织PAR-2的mRNA和蛋白表达水平；用Pearson相关性分析法分析肺组织PAR-2mRNA和蛋白表达水平与细胞因子含量的相关性。结果与对照组比较，过度通气组TNF-α、IL-8、肺组织病理学评分及PAR-2mRNA和蛋白[吸光度（A）值]表达水平均较对照组明显升高[TNF-α（ng／L）：394．37±45．72比127．34±14．83，IL-8（ng／L）：407．58±22．54比167．28±16．81，病理学评分（分）：12．14±1．57比1．00±0．82，PAR-2mRNA（灰度值）：1．249±0．095比0．513±0．049，PAR-2蛋白（A值）：167．84±5．61比107．84±1．57；与过度通气组比较，银杏达莫干预组TNF-α、IL-8、肺组织病理学评分及PAR-2mRNA和蛋白表达水平均明显降低（分别为334．59±10．27比394．37±45．72、374．76±13．86比407．58±22．54、10．57±0．98比12．14±1．57、1．133±0．095比1．249±0．095、158．44±7．82比167．84±5．61），差异均有统计学意义（均P〈0．05）。光镜下过度通气组肺组织结构破坏，肺泡腔内大量出血，肺泡壁见明显充血和炎症细胞浸润，伴有不同程度肺泡腔实变和肺不张；银杏达莫干预组肺组织病理结构改变较过度通气组有一定程度的改善。相关分析显示：PAR-2mRNA与TNF-α、IL-8呈正相关（r值分别为0．971、0．969，均P〈0．001）；PAR-2蛋白与TNF-α、IL-8亦呈正相关（r值分别为0．958、0．980，均P〈0．001）。结论银杏达莫注射液可能通过抑制炎性因子及PAR-2的表达而对VILI过程中肺组织产生保护作用。

疏肝和胃降逆汤对胃食管反流病肝胃不和证患者食管黏膜蛋白酶激活受体-2及环氧合酶-2蛋白表达的影响

目的:探讨疏肝和胃降逆汤对胃食管反流病(GERD)肝胃不和证患者食管黏膜蛋白酶激活受体-2(PAR-2)及环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达的影响。方法:选取2015年1月至2016年1月辽宁中医药大学附属医院收治GERD患者178例作为研究对象,以随机数表法分为观察组和对照组,每组89例。2组均给予奥美拉唑肠溶片治疗,观察组在此基础上给予疏肝健脾和胃方治疗。观察2组基线期和治疗后12周(治疗后)反流性疾病问卷(RDQ)症状积分及食管黏膜PAR-2及COX-2蛋白表达变化。结果:基线期,2组RDQ症状积分、食管黏膜PAR-2及COX-2蛋白表达基本相同,差异无统计学意义(P> 0. 05);治疗后,观察组RDQ症状积分、食管黏膜PAR-2及COX-2蛋白表达显著低于对照组,差异有统计学意义(P <0. 05)。观察组RDQ症状积分与食管黏膜PAR-2及COX-2蛋白表达正相关(P <0. 05),对照组RDQ症状积分与食管黏膜PAR-2及COX-2蛋白表达无明显相关性(P> 0. 05)。结论:奥美拉唑肠溶片联合温阳活血汤治疗胃食管反流病肝胃不和证具有较好的疗效,其机制可能是通过降低患者食管黏膜PAR-2及COX-2蛋白表达而起治疗作用。

蛋白酶激活受体2在肠易激综合征患者内脏敏感性中的作用

目的通过观察肠易激综合征(IBS)患者直肠蛋白酶激活受体2(PAR2)的表达情况,同时观察外源性的PAR2对内脏敏感性的影响,了解PAR2在IBS患者内脏敏感性中的作用。方法按照罗马Ⅲ标准选取本院住院及门诊便秘型IBS(IBS-C)患者16例、腹泻型IBS(IBS-D)患者18例,对照组18例,经结肠镜钳取直肠黏膜组织,采用免疫组化和实时荧光定量PCR法观察PAR2的表达情况。在正常大鼠直肠内注入PAR2激动剂,观察内脏敏感性的改变。结果 PAR2主要表达于直肠黏膜上皮细胞,绒毛中可见大量的表达,此外在黏膜下层也可见阳性表达。通过图像分析,各组的积分吸光度(IA)没有明显的差异,PAR2在IBS直肠黏膜组织中mRNA表达水平也没有统计学差异。在大鼠直肠内注入PAR2激动剂(SLIGRL-NH2,50μg/只)4h后,测定腹壁肌电活动,发现PAR2激动剂组在直肠球囊扩张时,随着扩张球囊容量增加,腹壁肌肉收缩的肌电图明显增加,球囊无扩张时腹壁外肌通常无肌电活动。球囊容量增加到0.8mL、1.0mL和1.2mL时PAR2激动剂组的腹壁肌电活动,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 PAR2在直肠黏膜中高度表达,肠道PAR2活化后大鼠内脏敏感性明显增加。

激活蛋白酶活化受体2抑制肺癌细胞凋亡

目的观察蛋白酶激活受体2(PAR2)活化对肺癌细胞株A549表皮生长因子受体(EGFR)表达及凋亡影响。方法在A549及EGFR基因沉默的A549细胞株培养液中加入类胰蛋白酶,用定量RT-PCR及Western blot法检测EGFR表达,观测细胞凋亡情况及与Bax/Bcl-xL表达水平。结果与类胰蛋白酶共培养48 h后,A549细胞EGFR表达明显增加。凋亡比例明显降低,而且这种降低呈现剂量浓度依赖性。细胞中Bax表达明显减少而Bcl-xL明显增加。EGFR基因沉默后,类胰蛋白酶对A549细胞凋亡的抑制作用被阻断,对Bax/Bcl-xL比率亦无影响。结论类胰蛋白酶能增加肺癌细胞株A549EGFR表达,减少其凋亡,明显减少Bax表达而增加Bcl-xL表达。

蛋白酶激活受体2激动剂对肥大细胞释放组胺的影响

目的 研究PAR 2激动剂 (tc LIGRLO NH2 与SLIGKV NH2 )和胰蛋白酶对结肠肥大细胞释放组胺的影响。方法 结肠组织经酶消化后 ,细胞成份用全HBSS重新悬浮。激发过程在LP4试管中、37℃条件下完成。组胺水平用以玻璃纤维为基础的荧光方法测定。结果 PAR 2激动剂tc LIGRLO NH2 和SLIGKV NH2 均可诱导人结肠肥大细胞剂量依赖性组胺释放。浓度为 10 0 μmol/mL时 ,tc LIGRLO NH2 和SLIGKV NH2 可分别引起比基础分泌量多出 2 .5倍和 2倍的组胺释放 ,而反PAR 2激动剂tc OLRGIL NH2 和VKGILS NH2 在实验浓度高至 30 0 μmol/mL时仍对组胺释放无影响。胰蛋白酶在 1.0～ 10 0 μg/mL间可引起剂量相关性组胺释放 ,胰蛋白酶抑制剂可抑制之。PAR 2激动剂tc LIGRLO NH2 的作用从加样后 1min开始 ,3min后完成。细胞经过百日咳毒素和代谢抑制剂预先处理后 ,几乎失去了对tc LIGRLO NH2 、SLIGKV NH2 和胰蛋白酶刺激的反应性。结论 PAR 2激动剂和胰蛋白酶是高效的组胺释放刺激剂 。

蛋白酶激活受体-2对动脉粥样硬化斑块发展和稳定性作用的实验研究

目的:探讨蛋白酶激活受体-2(PAR-2)对动脉粥样硬化斑块发展和稳定性的影响。方法:将32只6周龄雄性Apo E-/-小鼠随机分为对照组、实验组,每组16只。两组均给予高脂饮食建立动脉粥样硬化模型,连续喂养14周。实验组给予腹腔注射SLIGRL-NH2(5μmol·kg^(-1)·d^(-1)),对照组给予腹腔注射0.9%生理盐水,持续喂养至24周,处死小鼠并收集相关检测标本进行检测,采用酶法检测血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C),采用免疫组化检测巨噬细胞表面分子抗-2(Mac-2)、α平滑肌激动蛋白(α-SMA)、血小板-内皮细胞粘附分子(CD-31)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、血管细胞间粘附分子-1(VCAM-1),采用RT-PCR检测TNF-α、γ干扰素(IFN-γ)、IL-6、Egr-1、MCP-1等炎症因子mRNA表达。对比分析两组小鼠各项检测结果差异。结果:32只小鼠动脉粥样硬化模型建模成功率为93.75%(30/32),实验组小鼠PAR-2 mRNA表达明显高于对照组(P﹤0.05),两组小鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C浓度及体质量(BW)差异无统计学意义(P﹥0.05),实验组小鼠动脉粥样硬化斑块纤维帽厚度小于对照组,斑块核心坏死率、Mac-2、α-SMA、CD-31、MMP-9、MMP-13、VCAM-1等检测结果明显高于对照组(P﹤0.05),实验组TNF-α、IFN-γ、IL-6、Egr-1、MCP-1等炎症因子mRNA表达相对水平明显高于对照组(P﹤0.05)。结论:PAR-2激动剂能通过激活PAR-2促进小鼠动脉粥样硬化斑块发生发展,加快斑块内的炎症反应。