外力调控金属蛋白酶ADAMTS13构象和功能研究

目的金属蛋白酶ADAMTS13水解血管性血友病因子v WF减少血小板在血管受损处的过度聚集和血栓的形成。ADAMTS13存在多种构象态,但血流剪应力是否会介导ADAMTS13构象转换,其调控机制如何尚未清楚。方法利用流动腔技术对ADAMTS13施加不同的作用力并利用原子力显微镜(AFM)扫描技术其进行扫描,分析其分子构象特征。利用AFM拉伸技术对ADAMTS13进行力学加载,分析ADAMTS13分子解折叠力、分子长度和内部结构域间分子键生存时间。利用拉伸分子动力学模拟技术分析ADAMTS13解折叠过程。结果高流体剪应力(100 dyn/cm^(2))作用显著增加ADAMTS13分子的纵横比,分子的“闭合”态和“中间”态比例下降,而“伸展”态比例增加。AFM拉伸实验显示ADAMTS13发生解折叠后分子长度增加量呈双峰分布(10.3 nm和25.9 nm),平均解折叠力约为40 p N。ADAMTS13分子内部结构域间的分子键生存时间随作用力的增加呈先增加后减少的“逆锁键”-“滑移键”转换趋势。拉伸分子动力学模拟结果显示外力作用下,exosite-4先解离,exosite-3后解离。结论本研究表明,高流体剪应力可伸展ADAMTS13分子构象。“逆锁键”-“滑移键”转换机制调控ADAMTS13分子的内部结构域间相互作用和解折叠。本研究为外力调控ADAMTS13构象和功能提供了新的见解。

VWF-分解蛋白酶(ADAMTS13)活性严重缺乏定义为血栓性微血管病患者-独特型

背景 ADAMTS13活性严重缺乏是血栓形成微血管病(TMA)的一种生物学危险因子。本文假设ADAMTS13活性严重缺乏与一组独特TMA群体相关。研究设计与方法 107例TMA成人患者经过血浆置换治疗,在治疗前检测患者ADAMTS13活性。患者未进行临床分类,但按照ADAMTS13活性严重缺乏(n=50)和不严重缺乏(n=57)分为2组。治疗前比较2组患者实验室及临床参数。结果

野生型和功能增强型ADAMTS13蛋白酶分子的表达及功能鉴定

背景:血管性血友病因子水解蛋白酶13(a disintegrin and metalloproteinase with a thrombospondin type 1motif,member 13,ADAMTS13)可结合并酶切血管性血友病因子,在防止血小板过多聚集和血栓的形成中起到关键作用。重组ADAMTS13通常选择在真核细胞中表达分泌,然而对于其表达纯化目前仍缺乏一个明确高效的途径。目的:寻找合适的宿主细胞,得到稳定表达野生型ADAMTS13和功能增强型ADAMTS13的细胞株,建立高纯度ADAMTS13的纯化方法,进而研究其生物学功能。方法:以野生型ADAMTS13重组质粒为模板,利用位点突变试剂盒得到功能增强型ADAMTS13重组质粒。比较CHO-S细胞、CHO-K1细胞、293T细胞对ADAMTS13的表达效果,挑选出合适的宿主细胞。通过Ni柱亲和层析和分子筛纯化蛋白;采用7.5%SDS-PAGE、Western-blot鉴定野生型ADAMTS13和功能增强型ADAMTS13的纯度及特异性;利用原子力显微镜技术检测野生型及功能增强型ADAMTS13与血管性血友病因子A2的相互作用,鉴定两种蛋白的活性。结果与结论:相对于CHO-S和CHO-K1,293T细胞更适合作为野生型ADAMTS13和功能增强型ADAMTS13的表达宿主;经Ni柱亲和层析和分子筛纯化后,所得到的野生型ADAMTS13和功能增强型ADAMTS13质量浓度分别为103.7,149.7 mg/L,且两种蛋白纯度均约90%;原子力显微镜检测结果显示,野生型ADAMTS13、功能增强型ADAMTS13与血管性血友病因子A2的黏附频率分别为11.37%,14.70%,表明功能增强型ADAMTS13与血管性血友病因子A2的结合亲和力更高,这与近期ADAMTS13构象研究一致。

白细胞介素1β对软骨细胞miR-27b和基质金属蛋白酶13蛋白表达的影响

背景:基质金属蛋白酶13对软骨细胞外基质中的Ⅱ型胶原蛋白的降解能力最为活跃,白细胞介素1β被认为是基质金属蛋白酶的诱导剂,参与关节软骨的降解和退变。目的:分析白细胞介素1β对大鼠软骨细胞miR-27b和基质金属蛋白酶13蛋白表达的影响。方法:雄性Wistar大鼠7只,体外分离培养软骨细胞,并分组为白细胞介素1β刺激组及对照组。对照组不采取任何刺激;白细胞介素1β刺激组采用10μg/L白细胞介素1β的无血清培养基培养大鼠软骨细胞,于第0,24,48小时分别采用倒置显微镜观察细胞生长情况,并收集细胞,提取RNA检测软骨细胞基质金属蛋白酶13表达以及不同的miR NAs的表达变化。结果与结论:(1)白细胞介素1β诱导大鼠软骨细胞0,24,48 h时基质金属蛋白酶13相对表达量逐渐增加(P<0.05);(2)白细胞介素1β诱导大鼠软骨细胞24,48 h时miR-27b、miR-31表达均逐渐下降(P<0.05);mi R-26a、miR-26b、miR-23和miR-204表达均逐渐加强(P<0.05),白细胞介素1β诱导大鼠软骨细胞48 h后,mi R-27b表达的降低最为显著(P<0.05);(3)结果说明白细胞介素1β诱导大鼠软骨细胞,miR-27b表达显著下降,靶定调控基质金属蛋白酶13的能力降低,导致软骨细胞的损伤,加剧了骨性关节炎的发病及进展。

ADAMTS13的结构、功能及其与TTP诊疗的关系

血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)是一种能够特异性裂解血管性血友病因子(vWF)的血浆金属蛋白酶,严重的ADAMTS13活性缺失可导致特发性血栓性血小板减少性紫癜(TTP)的发生。本文简要综述了ADAMTS13的结构和功能及其与TTP的发病机制、诊断和治疗之间的关系。

支气管哮喘患儿血清类胰蛋白酶诊断价值及其与疾病严重程度的关系

目的探讨支气管哮喘(简称"哮喘")患儿血清类胰蛋白酶诊断价值及其与疾病严重程度的关系。方法选取本院2016年1月-2017年9月收治的哮喘患儿116例为研究组,根据疾病严重程度分间歇组(n=37)、轻度组(n=32)、中度组(n=29)和重度组(n=18),以同期进行体格检查的35例健康儿童为对照组。检测各组血清类胰蛋白酶水平,统计研究组儿童哮喘控制测试(C-ACT)评分、肺功能及血清免疫球蛋白(Ig E)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-13(IL-13)水平,分析血清类胰蛋白酶对哮喘的诊断价值及与临床指标的相关性。结果研究组血清类胰蛋白酶水平高于对照组(P<0.05),且各亚组间差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线显示,血清类胰蛋白酶诊断哮喘的阈值为3.08μg/L,敏感性为74.86%,特异性为86.75%。研究组各亚组C-ACT评分、FEV_1/预估值、PEF/预估值、FEV_1/FVC值及血清Ig E、IL-4、IL-13水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。研究组血清类胰蛋白酶水平与C-ACT评分、FEV_1/预估值、PEF/预估值、FEV_1/FVC值呈负相关(P<0.05),与血清Ig E、IL-4、IL-13水平呈正相关(P<0.05)。结论哮喘患儿血清类胰蛋白酶水平与疾病严重程度呈正相关,可作为病情诊断的有效指标。

少阳生骨方调节C518大鼠膝关节退变软骨细胞Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶13的表达

背景:少阳生骨方有很好的治疗骨关节炎的作用,但其作用机制仍不清楚,可能与软骨退变的调节有关。目的:探讨少阳生骨方对C518细胞Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶13表达的影响。方法:选用C518大鼠膝关节退变软骨细胞,并用苏木精-伊红染色观察C518细胞形态;然后将C518细胞分为:少阳生骨方组、盐酸氨基葡萄糖组、生理盐水组,每组给予相应的干预后,再用RT-q PCR和Western blot检测Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶13基因和蛋白的表达水平。结果与结论:(1)RT-q PCR和Western blot检测结果显示,相较于生理盐水组,少阳生骨方组和盐酸氨基葡萄糖组Ⅱ型胶原的m RNA和蛋白表达量均上调(P<0.05),基质金属蛋白酶13的m RNA和蛋白表达量均下调(P<0.05);且相比盐酸氨基葡萄糖组,少阳生骨方组Ⅱ型胶原的m RNA和蛋白表达量显著上调(P<0.05),基质金属蛋白酶13 m RNA和蛋白表达量显著下调(P<0.05);(2)结果说明,少阳生骨方能调节C518大鼠膝关节退变软骨细胞中Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶13的m RNA和蛋白的表达水平,从而延缓退变的发展。

膝关节软骨中基质金属蛋白酶13及其组织抑制剂1的表达

背景:基质金属蛋白酶组织抑制剂1是与基质金属蛋白酶13相对应的拮抗剂,两者间表达水平和功能活性的平衡对细胞外基质的代谢状态起着重要作用,但在DH豚鼠骨关节炎发生发展过程中,两者表达水平,尤其两者表达水平比值的变化尚不明确。目的:探讨不同月龄DH豚鼠关节软骨中基质金属蛋白酶13、基质金属蛋白酶组织抑制剂1表达比值的变化及其与DH豚鼠增龄性原发骨性关节炎发病过程中软骨退变程度的关系。方法:选取2,4,8,12月龄雌性DH各6只,取膝关节观察关节软骨的大体形态后常规脱钙、包埋、制作石蜡切片,用于VG染色行组织学观察,采用Mankin评分系统定量分析关节软骨退变情况,采用免疫组织化学方法检测膝关节软骨中基质金属蛋白酶13、基质金属蛋白酶组织抑制剂1表达情况,应用Image pro-Plus6.0软件对免疫组织化学阳性蛋白表达情况进行积分吸光度计算。线性回归分析判断Mankin评分与基质金属蛋白酶13/基质金属蛋白酶组织抑制剂1比值的相关性。结果与结论:DH豚鼠2月龄膝关节软骨无关节炎表现,4月龄出现轻度软骨退变,并随月龄增加进行性加重,Mankin评分随月龄增加逐渐增高,各组之间的差异均有显著性意义(P<0.05)。基质金属蛋白酶13、基质金属蛋白酶组织抑制剂1的表达均随月龄进行性增加,两者比值与Mankin评分呈正相关性(P<0.05)。结果提示DH豚鼠4月龄出现膝关节软骨退行性变化,随月龄增加而进行性加重,其病理改变与基质金属蛋白酶13/基质金属蛋白酶组织抑制剂1表达失衡有关。

替米沙坦对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝纤维化基质金属蛋白酶-13及其抑制因子-1的表达和胰岛素抵抗的影响

目的观察替米沙坦对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝纤维化的疗效和对基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及其抑制因子-1(TIMP-1)的表达和胰岛素抵抗的影响。方法 30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和替米沙坦干预组。模型组和干预组给予高脂饲料喂养16周诱发脂肪性肝炎,其中干预组于高脂喂养12周后,给予替米沙坦[5mg/(kg·d)]灌胃治疗4周。16周末处死所有动物。检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FPG),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),RT-PCR和Western blot法检测肝组织TIMP-1、MMP-13 mRNA和蛋白的表达水平。病理切片观察组织学改变,免疫组织化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况。结果模型组血清ALT,AST,FPG,FINS及HOMA-IR较正常组均显著升高(均P<0.01)。与模型组相比,干预组血清ALT,FPG,FINS及HOMA-IR均明显下降,差异具有统计学意义(均P<0.01)。AST与干预组相比存在下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组相比,替米沙坦可显著改善肝脏炎症活动度及肝纤维化程度(均P<0.01)。干预组HOMA-IR较模型组明显降低[(3.59±0.29)vs(6.23±0.19),P<0.01]。干预组肝组织α-SMA的表达明显减少,肝组织MMP-13 mRNA和蛋白的表达均增加,TIMP-1 mRNA和蛋白的表达均降低(均P<0.01)。结论替米沙坦对NASH大鼠具有改善胰岛素抵抗和抗肝纤维化的作用。

吡啶类基质金属蛋白酶抑制剂

选择性MMP-13抑制剂是式(Ⅰ)的吡啶衍生物或其药学上可接受的盐，其中R^1和R^2独立地是氢、卤代、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6链烯基、C2-C6炔基、NO2、NR^4R^5、CN或CF3；E独立地是。或S；A和B独立地是OR^4或NR^4R^5：R^4和R^5独立地是H、C1-C6烷基、C2-C6链烯基、C2-C6炔基、(CH2)n芳基、(CH2)n环烷基、(CH2)n杂芳基，

川芎嗪对CIA大鼠足爪组织MMP-13蛋白表达及血清VEGF、IL-17和IL-23水平的影响

目的:探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)治疗胶原性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠的可能机制。方法:采用Ⅱ型胶原诱导CIA大鼠模型。随机分为正常对照组、模型组与药物处理组,用免疫组化染色法和Western blotting分析检测足爪组织中基质金属蛋白酶(MMP)-13蛋白的表达;HE染色观察不同剂量的TMP对CIA大鼠足爪组织病理学变化的影响;ELISA法检测CIA大鼠血清中VEGF、IL-17和IL-23的含量。结果:与CIA组相比,CIA+TMP(100 mg.kg-1)组大鼠体重明显回升(P<0.01),足爪组织胞浆中MMP-13蛋白表达降低了31.82%(P<0.01),大鼠足爪皮下组织病理改变明显减轻,血清中VEGF、IL-17和IL-23的含量分别降低了33.33%、27.40%和33.33%(P<0.01)。结论:TMP(100 mg.kg-1)对CIA大鼠炎症有明显的抑制作用,其机制可能与其下调MMP-13蛋白表达,抑制炎症细胞浸润及血管增生,降低VEGF、IL-17和IL-23的产生有关。

血管性血友病因子裂解蛋白酶活性的检测方法及评估

血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13,vWF-CP)裂解血浆中具有高黏附能力的超大分子量血管性血友病因子(UL-vWF),防止血小板因其引起聚集形成血栓。ADAMTS13活性异常是临床上血栓性血小板减少性紫癜(TTP),特别是遗传性TTP和特发性TTP发病的基础。其活性的检测在TTP临床诊断和治疗上具有日益重要的意义。目前报道的一些用于检测ADAMTS13活性的方法有十余种,本文对此进行综述。

维生素D对脓毒症大鼠血清血管性血友病因子血管性血友病因子裂解蛋白酶表达的影响

目的观察维生素D（VD）对脓毒症大鼠血清血管性血友病因子（vWF）、血管性血友病因子裂解蛋白酶（ADAMTS13）表达的影响。方法采用腹腔注射内毒素的方法制备脓毒症大鼠模型，随机分为五组：正常对照组、脓毒症组、骨化三醇组（分别给予骨化三醇1mg／kg、5mg／kg、25mg／kg），观察大鼠一般情况，肺组织病理及肺湿／干质量比变化，血小板计数变化，血清vWF、ADAMTS13变化。结果脓毒症组大鼠病态表现明显，骨化三醇组病态表现优于脓毒症组，骨化三醇各组肺组织病理改变较脓毒症组明显减轻；脓毒症组及骨化三醇组（1mg／kg、5mg／ks）血小板计数低于正常对照组，骨化三醇组（25mg／ks）血小板计数与正常对照组比较差异无统计学意义，但低于脓毒症组；脓毒症组血清vWF较正常组显著增高，骨化三醇各组较正常组亦显著增高，但低于脓毒症组；脓毒症组及骨化三醇各组血清ADAMTSl3水平较正常对照组显著下降，骨化三醇各组血清ADAMTS13水平与脓毒症组比较差异无统计学意义。结论VD抑制vWF表达，改善内皮细胞损伤进而影响脓毒症发病进程，而这一作用并不是通过提高ADAMTS13的表达实现。脓毒症发生时循环中血小板降低主要与内皮细胞损伤、vWF增加有关。

脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞血管性血友病因子血管性血友病因子裂解蛋白酶表达影响及维生素 D 的干预作用

目的：观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells，PMVEC）内血管性血友病因子（von willebrand factor， VWF）、血管性血友病因子裂解蛋白酶（A disintegrin-like andmetalloproteinase with thrombospond in type-1 domain 13，ADAMTS13）表达的影响，以及维生素 D（vitamin D，Vit D）的干预作用。方法体外原代培养大鼠 PMVEC，随机分为6组：NC 组、LPS 组（给予100μg/mL LPS）、骨化三醇（Calcitriol，Cal）组（给予100 nmol/L Cal）及LPS＋Cal 1、2、3组（分别给予100μg/mL LPS 和5 nmol/L、20 nmol/L、100 nmol/L Cal），分别检测细胞裂解液中VWF、ADAMTS13 mRNA和蛋白表达情况。结果 LPS 组和 Cal 组 VWF、ADAMTS13 mRNA 和蛋白表达均无显著变化，LPS 组和 LPS＋ Cal 各组VWF mRNA、蛋白表达较NC组显著增高，LPS＋ Cal各组VWF mRNA、蛋白表达较LPS组显著降低， LPS 组和 LPS＋ Cal 各组 ADAMTS13 mRNA、蛋白表达较 NC 组显著降低，LPS＋Cal 三组 ADAMTS13 mRNA、蛋白表达较 LPS 组显著增高。结论 Vit D 在生理状态下并不能改变 PMVEC 中 VWF 和ADAMTS13的表达，但在受到LPS刺激后可使已增高的VWF表达降低，已降低的ADAMTS13表达增加，在脓毒症或急性肺损伤（acute lung injury，ALI）发病过程中，补充 Vit D 可能通过对 PMVEC中VWF、ADAMTS13表达的影响对疾病的转归起作用。

冠状动脉内血管性血友病因子裂解蛋白酶活性和全球急性冠状动脉事件注册评分对急诊经皮冠脉介入术治疗ST段抬高型心肌梗死病人住院期间主要心血管不良事件的预测价值

目的 探讨冠状动脉内血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)活性和全球急性冠状动脉事件注册(GRACE)评分对ST段抬高型心肌梗死(STEMI)行急诊经皮冠脉介入术(PCI)的病人住院期间主要心血管不良事件(MACE)的预测价值。方法 选取2019年10月至2021年6月在潍坊医学院附属医院住院的162例STEMI接受急诊PCI治疗的病人,根据住院期间是否发生MACE,分为MACE组(38例)和无MACE组(124例)。记录两组病人的重要临床特征、GRACE评分。采用荧光共振能量转换法(FRETS-VWF73)分别测定两组病人急诊PCI术前外周血和冠脉内的ADAMTS13活性。四格表χ~2检验及独立样本t检验比较两组病人的重要临床特征、GRACE评分。Pearson相关性分析探讨ADAMTS13活性与GRACE评分的相关性。多因素logistic回归分析MACE的独立危险因素。应用受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析冠脉内ADAMTS13活性、GRACE评分以及联合诊断对MACE的预测效能。结果 两组比较,MACE组病人糖尿病史、吸烟史更多,年龄较大、外周血血小板计数更低、凝血酶原时间(PT)更长、N端脑钠肽前体(NT-proBNP)和肌钙蛋白I(cTnI)更高(P<0.05);MACE组病人GRACE评分更高[(187.26±35.50)分比(153.87±32.95)分,P<0.001],术前外周血[(59.01±4.56)%比(63.86±5.75)%]和冠脉内[(46.37±5.43)%比(54.26±5.70)%]的ADAMTS13活性更低(均P<0.001)。术前冠脉内ADAMTS13活性与GRACE评分中等强度负相关(r=-0.40,P<0.001),而外周血ADAMTS13活性与GRACE评分无明显相关性(r=-0.08,P=0.457)。多因素logistic回归分析,糖尿病史和GRACE评分为MACE的独立危险因素[OR=2.513,95%CI:(2.045,3.381),P=0.007;OR=1.089,95%CI:(1.033,1.147),P=0.001],术前冠脉内ADAMTS13活性是MACE的保护性因素[OR=0.568,95%CI:(0.429,0.753),P=0.001]。术前冠脉内ADAMTS13活性、GRACE评分诊断MACE的AUC及其95%CI分别为0.833(0.735,0.932)和0.746(0.624,0.867),截断值分别为50.95%和158.50分,联合诊断的AUC为0.893(0.824,0.962)。结论 GRACE评分增高、术前冠脉内ADAMTS13活性降低均是接受急诊PCI治疗的STEMI病人住院期间MACE的独立危险因素,二者联合诊断的预测价值更高。

创面渗出液VEGF、MMP-13、TIMP-1水平对负压封闭引流术联合人工真皮修复难愈性创面效果的预测价值

目的观察难愈性创面患者创面渗出液血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)、金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases-1,TIMP-1)水平,并分析其对负压封闭引流术(vacuum sealing drainage,VSD)联合人工真皮修复治疗难愈性创面临床效果的预测价值。方法选取难愈性创面患者60例纳入难愈组,普通创面患者60例为对照组。所有入选者均检测创面渗出液VEGF、MMP-13、TIMP-1水平,并计算MMP-13/TIMP-1值。采用VSD联合人工真皮修复治疗难愈性创面患者,观察临床效果,并依据临床效果将其分为有效组与无效组,比较有效组与无效组创面渗出液VEGF、MMP-13、TIMP-1水平与MMP-13/TIMP-1值,采用Logistic回归分析上述指标对VSD联合人工真皮修复治疗难愈性创面患者效果的影响,并绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC),分析上述指标对VSD联合人工真皮修复治疗难愈性创面患者效果的预测价值。结果难愈组MMP-13水平及MMP-13/TIMP-1值高于对照组,VEGF、TIMP-1水平低于对照组(P<0.05)。60例难愈性创面患者经VSD联合人工真皮修复治疗有效49例(81.67%),无效11例(18.33%)。无效组MMP-13、MMP-13/TIMP-1值高于有效组,VEGF、TIMP-1水平低于有效组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,MMP-13(95%CI:1.037~1.165)及MMP-13/TIMP-1值(95%CI:1.410~3.458)是难愈性创面患者治疗效果的危险因素,VEGF(95%CI:0.972~0.995)、TIMP-1(95%CI:0.264~0.756)是保护因素(P<0.05)。点二列相关性分析结果显示,VEGF、TIMP-1水平与难愈性创面患者VSD联合人工真皮修复治疗效果呈正相关(r=0.410、0.448,P<0.05),MMP-13水平、MMP-13/TIMP-1值与其治疗效果呈负相关(r=-0.477、0.570,P<0.05)。绘制ROC曲线,结果显示,VEGF(95%CI:0.643~0.908)、MMP-13(95%CI:0.706~0.986)、TIMP-1(95%CI:0.712~0.943)水平及MMP-13/TIMP-1值(95%CI:0.829~0.981)对难愈性创面患者治疗效果具有一定预测价值(AUC=0.776、0.846、0.827、0.905)。结论创面渗出液VEGF、MMP-13、TIMP-1、MMP-13/TIMP-1值能够对VSD联合人工真皮修复治疗难愈性创面效果产生重要影响,临床可通过测定VEGF、MMP-13、TIMP-1、MMP-13/TIMP-1值早期预测治疗效果。

ADAMTS13蛋白C-末端结构调节其酶活性的研究

目的 初步研究并探讨ADAMTS13蛋白C-末端结构域变化在调节其酶活性方面的作用.方法 将人全长野生型及缺失C-末端TSP8和CUB结构域的截短型重组ADAMTS13基因转染Hela细胞并稳定表达.分别在静态尿素变性条件及蜗旋装置提供的高剪切力条件下观察这两种ADAMTS13蛋白酶切血管性血友病因子（vWF）的差异,同时利用Western blot技术及残余胶原结合实验对结果进行检测,另外利用ELISA法直接检测这两种ADAMTS13蛋白静态条件下结合vWF的能力.结果 在Hela细胞真核表达载体表达并纯化了全长野生型及缺失C-末端TSP8和CUB结构域的截短型ADAMTS13蛋白,分别利用鼠抗His-Tag单抗（抗载短型ADAMS113单）及兔抗人ADAMTS13多抗Western blot法鉴定了其特异性.静态尿素变性条件下,截短型ADAMTS13蛋白酶活性显著高于野生型,且静态条件下在结合vWF的能力方面,截短型也显著高于野生型;但在高剪切力作用下,只有全长野生型ADAMTS13可以对vWF进行剪切.结论 ADAMTS13蛋白C-末端TSP8和CUB结构域在不同条件下可以调节ADAMTS13蛋白结合vWF的能力,从而调节其酶活性的发挥,ADAMTS13蛋白C-末端在高剪切力作用条件下对ADAMTS13酶活性的发挥至关重要.

一例两种新的ADAMTS13基因突变导致的遗传性血栓性血小板减少性紫癜

目的对1例高度可疑的遗传性血栓性血小板减少性紫癜(TTP)患者的vWF裂解蛋白酶(ADAMTS13,vWF-cp)基因突变进行检测,以明确诊断并制定相应的治疗方案。方法用残余胶原结合实验(residual-collagen binding assay)动态检测1例TTP患者ADAMTS13的活性和抑制物水平。用PCR方法扩增ADAMTS13的29个外显子及外显子邻近处的内含子,并直接测序检测突变。对其亲属的基因组DNA在患者突变区域扩增并测序。结果患者ADAMTS13活性降低,未发现抑制物存在。测序显示患者的ADAMTS13的凝血酶敏感蛋白1(TSP1)基序重复区第21外显子碱基2708处和25号外显子碱基3283处出现C→T的错义突变(均为纯合子),分别导致该碱基参与编码的丝氨酸密码子(TCG)变为亮氨酸密码子(TTG)(S903L),精氨酸密码子(CGG)变为色氨酸密码子(TGG)(R1095W)。患者父母上述突变位置处的基因均呈杂合状态,其兄的该段碱基序列正常,并且在采集的25位家族成员中共发现11名上述突变位点的正常携带者。结论该患者是由于ADAMTS13基因纯合子错义突变导致翻译发生错误所致的遗传性TTP。

血栓性血小板减少性紫癜患者血浆置换前后ADAMTS13抗原变化及临床意义

血栓性血小板减少性紫癜（TTP）是一种罕见的微血管血栓——出血综合征。该病进展迅速，临床表现多样，病死率高。TTP典型临床表现为Moschcowitz’s五联征：血小板减少、溶血性贫血、发热、中枢神经系统和肾脏受累表现。现已证实血管性血友病因子裂解蛋白酶（ADAMTS13）缺陷，导致超大分子量vWF多聚体（ULvWF）不能被裂解而引起血小板聚集、微血管血栓形成是TTP的重要发病机制。血浆置换（PE）是治疗该病的一种安全有效的方法，使患者的病死率由90％以上降至25％。

造血干细胞移植后ADAMTS13缺失的血栓性血小板减少性紫癜一例报告并文献复习

造血干细胞移植（HSCT）相关血栓性血小板减少性紫癜（TA—TTP）是HSCT后的一种严重并发症。多数TA—TTP患者血浆血管性血友病因子裂解蛋白酶（ADAMTSl3）活性为正常水平。2011年5月我院收治1例嗜酸粒细胞白血病患者，行脐血造血干细胞移植后并发特发性TTP，其血浆ADAMTSl3活性只有3％，ADAMTSl3抑制物阳性。现报告如下，并进行文献复习。