传统农家酱产蛋白酶菌株的分离及其在豆浆的应用

豆浆富含植物蛋白,但由于植物蛋白相较动物蛋白不易被人体吸收。利用产蛋白酶菌株发酵豆浆,可将植物蛋白降解成多肽和氨基酸,提高其消化吸收率。传统农家酱是以大豆为主要原料的传统发酵食品,含有大量能够水解大豆蛋白的优良菌株。该研究从传统农家酱中分离到8株产蛋白酶的芽孢杆菌并用于豆浆处理,处理后豆浆的可溶性肽含量显著提高,其中菌株BJ-20处理效果最显著;氨基态氮含量和水解度也有显著变化,其中BJ-6处理后的豆浆最佳,氨基态氮含量提高了10.87%,水解度为23.49%。同时,处理后豆浆的组织状态得到了明显改善。该研究丰富了豆类发酵菌种库,提高了大豆蛋白利用率,丰富了大豆产品种类,为大豆保健产品开发提供参考及理论支持。

甜面酱微生物多样性、高产蛋白酶菌株的筛选鉴定及产酶条件优化

为解析传统甜面酱中微生物群落结构及筛选高产蛋白酶菌株,利用宏基因组学技术探究其中微生物的演替规律,通过滤纸片法与福林法从中筛选高产蛋白酶菌株,并采用单因素试验及响应面试验优化其产酶条件。结果表明,甜面酱发酵过程中的优势真菌为曲霉属(Aspergillus)、接合酵母属(Zygosaccharomyces)、威克汉姆酵母属(Wickerhamomyces);优势细菌为芽孢杆菌属(Bacillus)、拟杆菌属(Bacteroides)、假单胞菌属(Pseudomonas)。筛选到一株高产蛋白酶细菌PC9,其被鉴定为莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)。菌株PC9最优产酶条件为:1%果糖,1%酵母浸膏,0.5%硫酸铵,1%NaCl,发酵温度28.5℃,发酵时间2.0 d、初始pH 9.0、接种量6%。在此优化条件下,碱性蛋白酶活力达到404.153 U/mL,是优化前的8.42倍。

产蛋白酶菌株的鉴定及酶学特性

通过形态学观察、生理生化实验以及16S rDNA基因序列分析对分离自味精糖化废渣中的产蛋白酶菌株NX-PB17进行鉴定,并对其蛋白酶特性进行研究。结果表明:菌株NX-PB17为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其蛋白酶最适酶解温度为50℃,最适pH值为7.0,并且具有良好的热稳定性和pH值稳定性。

高产蛋白酶菌株的分离、鉴定及酶学性质研究

该研究旨在从非传统环境(磷矿)中分离、筛选高产胞外蛋白酶菌株,对菌株进行形态学观察、生理生化和分子生物学鉴定,并研究其蛋白酶的酶学性质。结果表明,分离筛选到一株蛋白酶高产菌株,编号为PB5,该菌株被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),该菌株产胞外蛋白酶活力为562.3 U/mL,胞外蛋白酶的最适pH值为10,在pH 7~10有较好的pH稳定性;最适温度为60℃,20~50℃时有较好的稳定性;Na^(+)、Mg^(2+)、Mn^(2+)、K^(+)对蛋白酶活力有明显的促进作用;Fe^(2+)、Ag^(+)、乙二胺四乙酸(EDTA)、苯甲基磺酰氟(PMSF)、十二烷基硫酸钠(SDS)对蛋白酶活力有明显抑制效果。

产角蛋白酶菌株的筛选及发酵条件优化

采用以羽毛为唯一碳氮源的无机盐培养基,通过考察HC值(水解圈直径与菌落直径的比值)、羽毛的降解程度,筛选得到10株产角蛋白酶的菌株,经测定10株菌株摇瓶发酵液的蛋白酶活力,确定了一株产酶能力较强的菌株CJPE209,并对菌株进行鉴定,菌株CJPE209被鉴定为芽孢杆菌(Bacillus sp.),其发酵液酶活为267 U/mL。通过单因素实验,确定了菌株CJPE209产角蛋白酶的最适发酵条件:发酵周期48 h,培养基装液量25 mL/250 mL,发酵温度37℃,初始pH7,摇床转速220 r/min,发酵液酶活为337.6 U/mL,是优化前的1.26倍。

腐乳毛霉蛋白酶菌株紫外线诱变育种

目的:选育酶活力高、耐热性好的毛霉蛋白酶菌株,用于腐乳发酵实验或生产。方法:从腐乳中分离毛霉蛋白酶菌株,对其出发菌株进行紫外线诱变,并经控温培养,选育优良变株。结果:获得一株酶活力高、耐热性强的优良变株SCLG—毛霉16,该菌株在32℃条件下,生长茂盛,其HE值为1.39、蛋白酶活力为180.375u/g,分别较出发菌株高出7.8%和51.4%。结论:将此优良变株用于腐乳发酵实验或生产,在缩短发酵时间,提升腐乳质量,延长生产季节等方面具有一定的应用价值。

耐高温蛋白酶菌株的筛选

研究了土壤中耐高温蛋白酶菌株的筛选。采用平板透明圈法从7份土样中筛选到3株产蛋白酶菌株G1、G2、G3,运用菌落和菌体形态进行观察,初步鉴定G1、G2为芽孢杆菌属,G3为假单孢菌属。并对它们分别进行逐级升温驯化培养试验,结果表明:三株菌的最适生长温度均为43℃,其中G2、G3菌耐热性较差,在55℃高温下终止产酶,G1菌经驯化培养后,能耐67℃高温,且酶活力达48%,为拓宽酶制剂的应用提供了理论依据。

产酸性蛋白酶菌株在老陈醋澄清上的应用

用高产酸性蛋白酶菌株H308,在其产酶最适条件pH4.5、30℃下培养32h。用该粗酸性蛋白酸制剂处理已有沉淀的醋和刚下生产线的醋,最佳添加量为W=3%。距再次返浑的时间分别为45d和49d。处理后的老陈醋细菌数平均为800个/mL,大肠菌群未检出,符合国标。

剩余污泥碱性发酵产蛋白酶菌株的筛选与鉴定

为了能够缩短剩余污泥碱性发酵周期,从碱性发酵剩余污泥中筛选产蛋白酶活力较高的耐碱细菌,利用形态学、生理生化、分子生物学特征对筛选到的菌株进行鉴定。结果表明,从碱性厌氧发酵剩余污泥中最终筛选获得2株产蛋白酶活力较高的耐碱细菌HIT-01菌株和HIT-02菌株,经鉴定分别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和芽孢杆菌属细菌(Bacillus sp.)。为进一步利用筛选获得的优势菌株构建生物菌剂、从而快速启动污泥碱性发酵开拓了新思路。

产角蛋白酶菌株D_5培养条件的研究

为确定产角蛋白酶菌株D5的最佳培养条件,试验通过测定不同影响因素条件下角蛋白酶的酶活,确定产角蛋白酶菌株D5的最佳培养基为:新鲜鸡羽毛粉2.00%,酵母膏2.00%,磷酸二氢钾0.05%,硫酸铵0.05%,蛋白胨2.00%,硫酸镁0.04%,氯化锌0.01%;最适发酵条件为:温度37℃,pH 6.5,装量80mL/250mL锥形瓶,转速150r/min,培养时间3d。

仔猪小肠产蛋白酶菌株筛选及其对不同蛋白源利用效果的研究

为研究仔猪小肠主要产蛋白酶菌株对不同蛋白质来源利用效果,从健康仔猪小肠内筛选一株产蛋白酶菌2L6,经形态、生理生化和分子生物学鉴定确定该菌株为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)。分别在豆粕、棉籽粕、豆粕-棉籽粕和鱼粉发酵培养基中对其进行发酵培养,并在不同时间检测蛋白酶活性和底物蛋白消化率。结果表明:菌株2L6在不同发酵培养基中蛋白酶活性及底物蛋白消化率有较大差异。其中,豆粕-棉籽粕混合发酵培养基中蛋白酶活性在相对较短时间内即达到最大值21.31 U/m L,而底物蛋白消化率也在36 h即达到最大值64.42%(P<0.01)。因此,豆粕-棉籽粕混合蛋白源可较大提高仔猪小肠主要蛋白酶菌(Bacillus cereus strain2L6)产蛋白酶和蛋白质利用能力。

坎儿井水产蛋白酶菌株X-34产酶条件及其部分酶学特性研究

从吐鲁番坎儿井水样为实验材料,筛选出一株产生蛋白酶活性较高的X-34菌株,经生长特点、菌体及菌落形状和生理生化指标和16S r RNA基因序列比对分析,将该菌株鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),并对其产酶条件和部分酶学特性进行实验研究,结果显示:该菌株最佳产酶条件为:时间为48 h,温度为37℃;初始pH为7;装液量为80 mL,碳源为葡萄糖,氮源为牛肉膏。该蛋白酶的作用最适温度为40℃,反应最适pH为7.5。在最适条件下,X-34菌株产生的蛋白酶活力达到1558 U/mL。

中高温大曲中高产蛋白酶菌株的选育

从宋河大曲中共分离得到39株产蛋白酶芽孢菌株,采用透明圈法和摇瓶发酵法筛选出1株高产蛋白酶菌株MSPN-11,酶活达114.8U/m L。以该菌株为出发菌种,采用紫外诱变的育种方法,以致死率和蛋白酶活力为指标选育高产蛋白酶菌株。研究表明:紫外照射时间160s、照射距离50cm^55cm的剂量处理,菌株致死率达80%以上,且90%诱变菌株的R/r值在3.0以上,得到1株高产蛋白酶菌株MSPR 8,酶活提高了26.38%。

中高温大曲中高产蛋白酶菌株的选育

从宋河大曲中共分离得到39株产蛋白酶芽孢菌株,采用透明圈法和摇瓶发酵法筛选出1株高产蛋白酶菌株MSPN-11,酶活达114.8U/m L。以该菌株为出发菌种,采用紫外诱变的育种方法,以致死率和蛋白酶活力为指标选育高产蛋白酶菌株。研究表明:紫外照射时间160s、照射距离50cm^55cm的剂量处理,菌株致死率达80%以上,且90%诱变菌株的R/r值在3.0以上,得到1株高产蛋白酶菌株MSPR8,酶活提高了26.38%。

产蛋白酶菌株的筛选、鉴定及水解菜粕蛋白能力

以筛选产蛋白酶菌株水解菜粕蛋白生产氨基酸为研究目的,利用牛奶、豆浆等选择性培养基,从土壤、水体等自然环境以及家禽内脏中分离到可利用蛋白质菌株90余株。通过菌株对菜粕蛋白利用及水解能力的研究,筛选出2株具有高效水解菜粕蛋白产氨基酸的菌株,分别编号为K11和G12。经形态学观察和16SrDNA序列分析,初步鉴定K11为短小芽胞杆菌（Bacillus pumilus）,G12为嗜麦芽寡养单胞菌（Stenotrophomonas maltrophilia）。发酵实验表明,2株细菌具有高效水解菜粕蛋白的能力,发酵后菜粕中游离氨基酸最大含量达到8.2%,研究所得菌株对于利用菜粕蛋白资源具有非常重要的意义。

降解猪血蛋白的优良菌株筛选鉴定及产酶条件研究

为获得可用于生产的高效降解猪血的菌株,在以猪血为主要培养物的平板上对生猪屠宰场下水道土壤中的微生物进行分离,根据微生物在酪素固态培养基上透明圈的大小,初筛得到10株产蛋白酶的菌株。发酵后测定酶活力,筛选出1株产酶能力较高的菌株B12。根据形态学分析、生理生化实验,以及16S rRNA序列比对,鉴定为Bacillus cereus,构建了关于B12的系统发育树。菌株B12在以葡萄糖为碳源,猪血为氮源,培养基初始p H 7.0,培养温度33℃的条件下振荡培养24 h,所产蛋白酶活力最高可达185.48 U/m L。

高产蛋白酶菌的筛选及其对螺旋藻发酵物活性的影响研究

为了更好地利用微生物发酵方法制备螺旋藻生物活性肽,从螺旋藻泥天然发酵液中筛选高产蛋白酶的菌株,并对其发酵产物进行了功能评价。形态观察和16S rRNA菌种鉴定结果显示,3株蛋白酶高产菌株分别为解淀粉芽孢杆菌、芽孢杆菌和短小芽胞杆菌。以3株菌及其混菌发酵螺旋藻,对所得发酵产物的3种活性成分(多肽、总黄酮和总酚)、4种抗氧化指标(DPPH自由基清除率、ABTS阳离子自由基清除率、铁离子还原力、总抗氧化能力)和血管紧张素I转移酶(angiotensin I converting enzyme,ACE)抑制活性进行了测定。结果表明单菌发酵和混菌发酵的产物中活性成分的含量及其抗氧化活性和ACE抑制活性均显著提高,以混菌发酵提高最为明显,效果最为优异,混菌发酵液中3种成分的含量分别提高305.2%、267.8%和164.2%;4种抗氧化活性指标分别提高611.5%、189.8%、354.4%、316.0%,ACE抑制活性提高102.6%。筛选获得的菌株在制备螺旋藻生物活性肽方面具有较好的应用价值和广阔的市场前景。

发酵血粉菌株的优化选育

从霉变猪血中筛选到产蛋白酶菌株 16株 ,研究了各菌株产复合酶的性能 ,并对其进行组合优化 ,从中筛选出一组兼产蛋白酶、淀粉酶、糖化酶、羧甲基纤维素酶、植酸酶及果胶酶的优化菌株 ,初步鉴定并命名为米曲霉 (AspergillusOryzae )AS10 0、AS10 2 ,酿酒酵母 (Sac charomycescerevisiae)Y113 ,芽孢杆菌 (Bacillussp .)Asp0 0 7。经血粉发酵试验 ,发酵产品香味浓郁 ,营养丰富 ,蛋白质含量高达 69% ,且富含游离氨基酸和无机元素 ,证实了该组合菌株是发酵血粉的优化菌种。

发酵马铃薯蛋白制备抗氧化肽

从腐乳、泡菜等传统发酵食品中分离筛选得到七株产蛋白酶能力较强的菌株,分别为菌A、B、C、D、E、F和G。以马铃薯蛋白为原料,利用产蛋白酶菌株对其进行发酵,研究马铃薯蛋白发酵产物的抗氧化能力。以样品发酵液对DPPH自由基的清除率为指标,测得七种菌株发酵产物DPPH自由基的清除率分别为:88.32%、92.00%、24.49%、76.90%、53.02%、18.11%、55.69%,菌B的发酵液具有较强的抗氧化能力。

微生物学实验综合模块的设计研究

对微生物学实验"产生蛋白酶菌株的筛选、鉴定、培养和选育"进行了教学改革,改变了以往的内容安排以及考核方式,并将该实验综合为一个统一的实验模块.模块是由8个紧密相连的实验所组成的一个综合性实验模块,其每个实验的具体内容分别为:玻璃器皿的清洗、包扎,培养基的配制及灭菌,产蛋白酶菌株的筛选、纯化及保藏,产蛋白酶菌的革兰氏染色及镜检,产蛋白酶菌的PCR鉴定,16S rDNA序列的比对及其分析,产蛋白酶细菌的生理生化鉴定,产蛋白酶菌的培养优化实验以及其诱变选育.