具有抗氧化活性青稞酒糟蛋白酶解液对H_(2)O_(2)诱导HepG2细胞的保护作用

为实现青稞酒糟的高值化利用,该研究在提取青稞酒糟蛋白基础上,以DPPH自由基清除率和还原力为指标优化了青稞酒糟蛋白酶解液的制备工艺,并对该酶解液的体外抗氧化活性和细胞保护作用进行了探究。结果表明:青稞水酒糟和青稞白酒糟均含有丰富的蛋白质,含量分别为31.46 g/100 g和18.47 g/100 g;超声纤维素酶法辅助碱提酸沉法对青稞水酒糟的蛋白提取率高达76.10%(m/m),白酒糟的为29.88%;碱性蛋白酶最适合用于青稞水酒糟蛋白的酶解,其最佳酶解条件为:料液比1:60(m/V),超声时间15 min,酶添加量3.7%(m/m)及酶解时间3.5 h,此条件下制得的青稞水酒糟蛋白酶解液的DPPH自由基清除率高达95.02%;不同浓度的青稞水酒糟蛋白酶解液对HepG2细胞活力没有负面影响;随着青稞水酒糟蛋白酶解液浓度的升高,对经H_(2)O_(2)诱导的细胞内ROS逐渐降低,酶解液浓度为5.0 mg/mL(m/V)时可使受损细胞内的ROS比损伤组低约50%。该研究成果可为青稞水酒糟蛋白酶解液的制备及其在保健食品、化妆品中的高值化利用提供参考。

辣木籽蛋白酶解物对小鼠肠道黏膜炎的改善作用

探讨辣木籽蛋白酶解物(Moringa oleifera Seed Protease Hydrolysate,MSPH)对小鼠肠道黏膜炎的改善作用。提取辣木籽蛋白并进行酶解,冷冻干燥得到MSPH;随机将雄性BALB/c小鼠分为空白对照(Con)组、模型(Mod)组和MSPH组(800 mg/kg·BW),每组6只,腹腔注射5-FU诱导小鼠肠道黏膜炎,MSPH灌胃干预。每天记录小鼠体质量;通过HE染色观察肠道组织形态学并计算绒毛高度/隐窝深度;酶联免疫法测定小鼠血清(INF-γ、SIgA、ROS、G-CSF、ET、D-LA)和小肠组织(IL-1β、IL-6、MDA、MPO、TNF-α)含量变化;实时荧光定量聚合酶链式反应检测小肠组织ZO-1和Occludin m RNA表达量。与Mod组相比,MSPH组小鼠在实验后期体质量显著提高(P=0.001 1),脾脏和胸腺指数分别增加16.22%和34.69%,肠绒毛高度/隐窝深度增加25.88%,血清中INF-γ、ROS、G-CSF、ET、D-LA含量分别降低16.85%、17.50%、14.22%、8.28%、9.27%,SIgA含量升高23.07%,小肠组织中IL-1β、IL-6、MDA、MPO、TNF-α含量分别降低9.72%、11.23%、9.74%、7.29%、5.17%,肠道组织ZO-1和Occludin mRNA表达量增加121.64%和29.35%。因此,MSPH可以通过减轻炎症和氧化应激及降低肠道通透性改善5-FU诱导的小鼠肠道黏膜炎。

牡蛎蛋白酶解肽制备工艺优化及其对小鼠睾丸间质细胞睾酮分泌和氧化应激的影响

为探究牡蛎在药食同源领域的研究与开发,本实验采用响应面法优化牡蛎蛋白酶解肽酶法制备工艺,并研究其对小鼠睾丸间质细胞睾酮分泌和氧化应激的影响。以水解度为考察指标,采用仿生酶解法,在单因素实验的基础上,根据响应面分析法优化牡蛎蛋白酶解肽的制备工艺。同时构建过氧化氢(H2O2)诱导的小鼠睾丸间质细胞(TM3)氧化损伤模型,通过细胞存活率、DAPI染色、睾酮(Testosterone,T)分泌量,超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量研究牡蛎蛋白酶解肽对TM3细胞睾酮分泌和氧化应激的影响。结果表明:牡蛎蛋白酶解肽的最佳酶解条件为:料液比1:10 g/mL、胃蛋白酶量为1.1%、酶解时间为1.0 h、胰蛋白酶量为2.1%、酶解时间3.1 h,此条件下的水解度为39.43%±0.42%。牡蛎蛋白酶解肽对H2O2诱导的TM3细胞均有不同程度的增殖活性,可显著(P<0.05)增加TM3细胞睾酮分泌量、SOD酶活力和降低(P<0.05)MDA含量,并且在牡蛎蛋白酶解肽物质量浓度为200μg/mL时效果最好。综上所述,响应面法优化酶解工艺有效可行,牡蛎蛋白酶解肽可极显著的促进TM3细胞增殖,促进睾酮分泌量,增加SOD酶活力,降低MDA含量(P<0.01)。

人参不同炮制品蛋白酶解肽对LPS诱导RAW264.7细胞的抗炎作用研究

研究从人参炮制品生晒参、红参、黑参中筛选出具有抗炎作用的蛋白酶解肽并进行对比分析。采用低温浸提法从三种炮制品中提取人参不同炮制品蛋白,采用分步酶解法,利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胃蛋白酶对三种人参蛋白进行酶解,得到BGP(黑参蛋白酶解肽)、RGP(红参蛋白酶解肽)、SGP(生晒参蛋白酶解肽)三种酶解产物;使用超滤膜进行分离,分别得到不同分子量的超滤组分。通过建立脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7炎症模型确定了具有最强抗炎活性的组分。酶联免疫法测定活性组分对RAW264.7细胞分泌一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的影响。分析三种蛋白酶解肽的氨基酸组成及含量。采用多元统计分析筛选出人参三种炮制品的差异性氨基酸并探究其与抑制RAW264.7细胞分泌细胞因子之间的关系。结果表明,人参三种炮制品蛋白酶解肽小于1 kDa组分较其他组分相比,对RAW264.7细胞增殖的作用最强且在质量浓度为50~200μg/mL时可显著抑制NO、TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌(P<0.05)。质量浓度为200μg/mL时,三种蛋白酶解肽给药组对细胞因子释放的抑制作用最强,且BGP-4对细胞因子释放的抑制作用高于RGP-4和SGP-4,具有显著差异(P<0.05)。三种蛋白酶解肽均含有17种氨基酸,但含量存在明显差异。其中,苯丙氨酸含量最高且为三种人参炮制品差异氨基酸与抑制炎症因子的分泌密切相关。本研究初步探讨了炮制对人参抗炎活性的影响,并筛选出不同炮制品的差异性氨基酸,为人参炮制品的加工提供了参考依据。

羊乳酪蛋白酶解物对秀丽线虫衰老的改善作用

该研究利用秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)模型研究了羊乳酪蛋白酶解物(Goat Milk Casein Hydrolysates,GMCH)的抗衰老及体内外抗氧化作用。通过对比GMCH实验组和大肠杆菌对照组秀丽线虫的寿命、运动能力、脂褐素水平等指标来研究GMCH的抗衰老作用,通过自由基清除实验以及测定线虫体内抗氧化酶活性评价GMCH的体内外抗氧化活力,同时测定秀丽线虫在过氧化氢、百草枯及热应激条件下的寿命。结果表明,与对照组相比,喂食0.1mg/mL羊乳酪蛋白酶解物的线虫的平均寿命延长9.33%,体内脂褐素水平降低了65.00%,同时GMCH对线虫的生殖能力和运动能力没有负面影响,对线虫氧化应激和热应激有一定的保护作用;GMCH具有一定的体外抗氧化能力并且能够提高线虫体内抗氧化酶活力,与对照组相比,实验组SOD活力提高43.30%、CAT活力提高124.40%、GSH活力提高176.90%、MDA含量降低78.70%。综上所述,GMCH能够延长线虫的寿命,降低线虫体内脂褐素积累,提高线虫在应激条件下的抵抗能力和体内抗氧化酶活力,具有较好的抗衰老活性。

羊乳酪蛋白酶解物的改善睡眠作用

该文研究了羊乳酪蛋白酶解物(Goat Milk Casein Hydrolysates,GMCH)促进睡眠的功效及作用机制。采用保健食品规范方法(睡眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验)判定GMCH高、中、低剂量组(700、400、100 mg/kg)改善小鼠睡眠的功效。进一步通过旷场实验深入探究GMCH对小鼠行为学的影响,最后测定小鼠下丘脑中睡眠相关神经递质分泌含量。结果表明,GMCH无直接睡眠作用,与空白组相比,GMCH低、中、高剂量组小鼠睡眠潜伏期分别缩短42.86%、56.63%、91.18%,睡眠时间分别延长34.46%、48.83%、63.19%,入睡率分别提高20.00%、60.00%、80.00%。在旷场中的运动总路程缩短,中央停留次数、中央停留时间和静止总时间均增加。下丘脑中GABA含量显著升高64.72%、41.16%、56.19%,5-HT含量显著升高25.87%、33.50%、43.67%、DA含量显著降低7.02%、12.85%、13.72%,NE含量显著降低18.73%、23.37%、29.41%。综上,GMCH具有改善小鼠睡眠的作用,有一定镇静作用,可能通过调节小鼠下丘脑中的神经递质水平起到促睡眠作用。

亚麻籽粕蛋白酶解物对面团的低温保护作用

采用差示扫描量热仪、低场核磁、原位拉曼光谱仪等手段研究不同酶解时间下亚麻籽粕蛋白酶解物对面团的冷冻保护作用。结果表明:酶解时间60 min时,亚麻籽粕蛋白酶解物的热滞活性最高,为0.83℃,且此酶解时间下亚麻籽粕蛋白酶解物的冰重结晶抑制活性最显著,大冰晶比例降至最低。将亚麻籽粕蛋白酶解物添加到面团体系中发现水解度为13.62%(酶解60 min)的酶解物冷冻保护效果最为显著,与对照组相比,面团中强结合水提高了13.2%,弱结合水、自由水分别降低了0.7%、7.9%;面团的最大发酵高度、最终高度、开始泄露CO_(2)时间分别提高了18.5%、24.4%、34.4%;蛋白结构分析表明,当水解度为13.62%时,面筋蛋白中α-螺旋相对含量最高,与对照组相比提高了35.3%,无规卷曲相对含量降低了28.9%;氨基酸侧链I_(760)值提高了282.3%,I_(850)/I_(830)值降低了59.6%;二硫键g-g-g构型和g-g-t构型相对含量分别提高了8.8%、9.8%。综上,亚麻籽粕蛋白酶解物提升了面团的持水性能,缩短了面团的醒发时间,减弱了冰晶对面团网络结构的破坏,当水解度为13.62%时对面团冷冻保护作用最好。

热处理对鳙鱼骨蛋白酶解特性的影响

探索热处理工艺对鳙鱼骨蛋白酶解特性的影响,为资源合理利用提供理论依据。研究对象为鳙鱼骨,检测出基本成分为蛋白质含量25.93%,粗脂肪含量24.8%,总灰分37.56%,水分15.54%。利用Alcalase对鳙鱼骨进行酶解,以不同热处理条件(加热时间、加热温度、底物质量分数)为变量,以蛋白质回收率、水解度、TCA可溶性氮得率为分析指标,探索热处理工艺对鳙鱼骨蛋白酶解特性的影响。结果表明,酶解效果最佳的热处理条件为加热温度121℃,加热时间20 min,底物质量分数2%,此时蛋白质回收率达到44.7%,水解度为7.2%,TCA可溶氮得率高达23.7%,分别是未热处理组的3.0倍,4.2倍,4.7倍。

酶种类对生物解离大豆蛋白酶解物功能性和苦味的影响

在生物解离提取大豆油脂过程中会伴随产生丰富的水解液,水解液主要成分为大豆蛋白酶解物。以不同种类蛋白酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶和胰蛋白酶)对挤压膨化大豆粉进行酶解,将得到的不同蛋白酶解物作为研究对象,采用水解度、SDS-PAGE凝胶电泳、氨基酸组成分析、傅里叶红外光谱对大豆蛋白酶解物结构进行表征,利用乳化活性和乳化稳定性、溶解性及感官评价等表征大豆蛋白酶解物功能性和苦味。结果显示:采用碱性蛋白酶进行生物解离时,提油率最高,为91.23%;碱性蛋白酶解物溶解性为91.12%,但是酶解产物的苦味值大大增加,乳化性也不理想。采用风味蛋白酶处理时,尽管提油率不是最高,为87.73%,但是酶解产物苦味值为1.5,溶解性为87.12%,乳化活性和乳化稳定性效果最优。

猪皮胶原蛋白酶解及其酶解产物的抗氧化活性

以新鲜猪皮为原料,利用Alcalase水解胶原蛋白,并对影响Alcalase水解过程的各个因素进行研究,通过对水解度和超氧阴离子自由基(O-2.)清除率的测定,确定Alcalase水解猪皮胶原蛋白的最适条件;研究在最适条件下制备的不同质量浓度的猪皮胶原蛋白酶解液对DPPH自由基和O-2.的清除效果。结果表明:Alcalase水解猪皮胶原蛋白的最适条件为:pH7.5、温度55℃、酶与底物比6000U/g、底物质量浓度40mg/mL,水解时间4h;在此水解条件下,水解度达到9.55%,O-2.清除率达到60.11%;在相应质量浓度10～50mg/mL范围内,猪皮胶原蛋白酶解液的DPPH自由基最大清除率为95.06%,IC50为3.89mg/mL;O-2.最大清除率为65.89%,IC50为16.43mg/mL。猪皮胶原蛋白酶解液具有较强的自由基清除能力。

α-乳白蛋白酶解物的钙络合特性研究

采用荧光光谱、傅里叶红外光谱分析了α-乳白蛋白酶解物的钙离子络合特性。通过测定游离钙离子浓度研究了不同pH值对氯化钙、柠檬酸钙、α-乳白蛋白酶解物-钙络合物的钙离子释放的影响。根据络合物光谱学特征可知α-乳白蛋白酶解物通过芳香族氨基酸、酰胺基团及天冬氨酸和谷氨酸的羧基基团与钙离子发生结合形成α-乳白蛋白酶解物-钙(α-lactalbumin hydrolysate-calcium complex)络合物。

鱼骨粉粒径对鱼骨粉-鱼蛋白酶解物混合物中钙生物利用率的影响

以采肉剩余的鲢鱼中骨酶解制得的蛋白肽和鱼骨粉为原料制备鱼骨粉-鱼蛋白酶解物混合物,以Wistar雄性大鼠为动物实验模型,用钙表观吸收率、钙存留率、股骨生物力学指标和骨密度等指标检测鱼骨粉粒径对鱼骨粉-鱼蛋白酶解物混合物中钙生物利用率的影响。结果表明:在相同钙摄入量下饲喂不同粒径鱼骨粉-鱼蛋白酶解物混合物的大鼠其体质量、肝体比、脾体比、肾体比无明显差异(P>0.05),但其钙表观吸收率、钙存留率、大鼠股骨生物力学性质、骨密度等指标有显著差异(P<0.05)。添加小粒径鱼骨粉(d≤74μm)的鱼骨粉-鱼蛋白酶解物混合物各项评价指标均显著高于其他实验组和碳酸钙对照组及低钙对照组,其钙表观吸收率为(47.84±3.90)%,钙存留率为(44.94±3.01)%,骨钙含量为(24.18±0.01)%,能量吸收为(7.52±0.48)kg·mm,其钙生物利用率最高。

黄鲫(Setipinna taty)蛋白酶解液的抑菌活性及稳定性研究

以黄鲫为原料测定其氨基酸组成,比较风味蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解黄鲫蛋白所得酶解液对大肠杆菌的抑菌作用,并对抑菌效果最强的蛋白酶酶解液进行抑菌稳定性研究。结果表明:黄鲫蛋白必需氨基酸含量丰富,其中胃蛋白酶的水解液对大肠杆菌抑菌作用强,相对分子质量主要分布在3000～1000;黄鲫胃蛋白酶酶解液对热稳定,酸性低pH值可增强其抑菌效果,可耐受胰蛋白酶和β-内酰胺酶处理,该酶解液有作为天然抗菌剂应用的前景。

大豆蛋白酶解液脱色工艺的优化

采用正交试验法,用粉末活性炭对大豆蛋白酶解液进行脱色处理,比较粉末活性炭用量、pH、脱色温度和吸附时间等因素对脱色结果的影响。结果表明:粉末活性炭用量2%,pH3,脱色温度50℃,吸附时间3h,大豆蛋白酶解液脱色效果明显,肽损失率为18.88%。

微生物发酵对罗非鱼下脚料蛋白酶解液脱腥去苦效果比较

以嗜热链球菌(Streptococus thermophilus)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)和瑞士乳杆菌(L.helveticus)及2种酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)为菌种,对罗非鱼(Oreochromis niloticus)下脚料蛋白酶解液进行发酵,利用感官评定法,比较不同微生物发酵对酶解液脱腥去苦效果。试验结果表明,乳酸菌脱腥效果优于酵母菌,其中以嗜热链球菌脱腥效果最好,其适宜的发酵条件为接种量10%,发酵温度42℃,发酵时间9h。微生物发酵去苦效果不明显。

鱼鳞蛋白酶解物为基料的涂膜剂对鲫的保鲜效果

研究了鱼鳞蛋白酶解物为基料的复合涂膜剂对鲫4℃贮藏过程中其鲜度指标变化和保鲜效果的影响。实验将去鳞、去内脏并洗净后的鲫分别于4℃的鱼鳞蛋白酶解物溶液和添加了迷迭香的鱼鳞蛋白酶解物溶液中浸泡1.5 min,沥干后用保鲜膜包好于4℃条件下贮藏。通过测定鱼体贮藏过程中细菌总数、TBA值、TVB-N值、K值、重量损失、感官评分等鲜度指标的变化规律,评价了鱼鳞蛋白酶解物对鲫在4℃贮藏条件下保鲜作用效果。结果表明,涂有鱼鳞蛋白酶解物的鲫的细菌总数、TVB-N值、K值、TBA值、重量损失在10 d内显著(P<0.05)低于对照组,而感官品质显著(P<0.05)高于对照组,在4℃条件下能延长鲫贮藏期8 d左右;涂有添加了迷迭香提取物的鱼鳞蛋白酶解物的鲫的TVB-N值、K值、重量损失在4～6 d内显著(P<0.05)低于对照组,而感官品质显著(P<0.05)高于对照组,但不能有效延长鱼体的贮藏期。鱼鳞蛋白经过胃蛋白酶在一定条件下酶解后,其产物对鱼体具有较好的保鲜效果,是一种良好的鱼体生物保鲜涂膜材料,但不适宜与迷迭香提取物联合使用。

鹰嘴豆蛋白酶解物对D-半乳糖衰老小鼠抗氧化能力的影响

目的研究不同剂量鹰嘴豆蛋白酶解物(CPH)对D-半乳糖致衰小鼠血清、心脏和肝脏抗氧化能力的影响。方法D-半乳糖连续颈部注射制作亚急性衰老的小鼠模型,采用生物化学方法检测各组小鼠血清、心脏和肝组织匀浆中超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力及丙二醛(MDA)的含量。结果D-半乳糖致衰小鼠SOD活力、GSH-Px活力均明显下降,MDA含量明显上升,与正常小鼠比较差异显著;不同剂量的鹰嘴豆蛋白酶解物灌胃给药后均能提高小鼠血清、肝脏和心脏组织中的SOD和GSH-Px,同是降低血清、心脏和肝脏组织中MDA浓度;其效果与VE效果相当。结论鹰嘴豆蛋白酶解物能显著提高亚急性衰老小鼠的抗氧化能力,尤以高剂量组效果最好,具有一定延缓衰老的作用。

红曲黄酒糟蛋白酶解物制备工艺优化及营养评价

为了高效提取利用红曲黄酒糟蛋白,以蛋白提取率和感官评价为指标,通过单因素和响应面法对制备工艺参数进行优化。实验结果表明,最佳酶解工艺为:以红曲黄酒糟和水固液比1:10,以纤维素酶和α-淀粉酶酶解预处理黄酒糟,选用中性蛋白酶和风味蛋白酶以2:1比例复合,最佳工艺参数为pH 6. 15,温度52. 0℃,时间3 h,加酶量2 825 U/g。在此条件下,蛋白提取率达63. 62%。黄酒糟蛋白酶解物中鲜味氨基酸(天门冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸)和甘氨酸总质量分数达53.50%,具有良好的鲜味和甘味,必需氨基酸指数、生物价、营养指数和氨基酸比值系数分分别为76. 52、71. 70、74. 99、79. 03,营养均衡、合理,是一种优质的蛋白质资源。

山羊乳酪蛋白酶解物制备及体外抗氧化活性研究

以自由基清除能力、金属离子螯合能力和抗脂质过氧化能力为指标,采用均匀试验研究山羊乳酪蛋白酶解物的制备及其体外抗氧化活性,并且比较自由基清除能力的方法。结果表明:山羊乳酪蛋白适宜的酶解工艺为在60g/kg的底物浓度下,中性蛋白酶和碱性蛋白酶的添加量分别为4000U/g和250U/g,45℃、pH7.5条件下酶解24h。山羊乳酪蛋白经酶解后其体外抗氧化活性显著增强。山羊乳酪蛋白酶解物.OH清除率的EC50值是其蛋白的3.59倍,ABTS+.的清除能力是其蛋白的158.72倍,螯合Fe2+的能力是其蛋白的5.44倍;在亚油酸体系中抗脂质过氧化能力强于TBHQ,与VE相当。清除.OH、DPPH自由基、O-2.和ABTS+.的方法不能相互替代。

添加酪蛋白酶解物对宫内生长迟缓仔猪肠道生长发育的影响

为研究酪蛋白酶解物对宫内生长迟缓(IUGR)仔猪肠道生长发育的影响,本试验选择15头IUGR新生仔猪,分为新生对照组(N组)、酪蛋白组(C组)和酪蛋白酶解物组(CH组),以牛乳为基础日粮,C和CH组分别加入10%的酪蛋白溶液和10%的酪蛋白酶解物溶液,人工饲喂3 d后取样。结果显示,CH组仔猪小肠长度显著高于C组(P<0.05),CH组空肠后段和回肠前段的绒毛高度/隐窝深度显著高于C组(P<0.05);CH组小肠黏膜的蛋白质含量显著高于C组(P<0.05),同时其DNA含量显著高于C和N组(P<0.05);CH组的麦芽糖酶活性和相对活性均显著高于C和N组(P<0.05或P<0.01),CH组的碱性磷酸酶(AKP)活性显著高于C组(P<0.05)。结果表明,酪蛋白酶解物有促进新生IUGR仔猪肠道组织生长的作用,同时能够刺激IUGR仔猪小肠黏膜上皮细胞的增殖和提高小肠黏膜麦芽糖酶和碱性磷酸酶的活性。