酸性蛋白酶AP-10分离纯化及其酶学性质

采用活性炭吸附脱色、硫酸铵分级沉淀、脱盐和凝胶层析等技术对酸性蛋白酶AP-10浓缩液进行了分离纯化,并对其酶学性质进行了研究。结果表明,分离纯化后得到的酸性蛋白酶AP-10纯组分比酶活为5800 U·mg^(-1),纯化倍数为6倍;最适反应温度为40℃,热稳定范围为30~45℃;最适反应pH值为3.0,pH值稳定范围为3.5~6.5;Mn^(2+)对酸性蛋白酶AP-10具有强烈的激活作用,Fe 2+对酸性蛋白酶AP-10具有强烈的抑制作用。为拓展酸性蛋白酶AP-10的应用及开发高品质产品奠定了基础。

饲料中添加蛋白酶AG对鲤鱼鱼种生长和蛋白质消化酶活性的影响

通过2个试验研究了饲料中添加蛋白酶AG对鲤鱼生长和前肠蛋白质消化酶活性的影响。试验Ⅰ选用540尾均重11.7g的鲤鱼,随机均分为6组,随机选取3组分别饲喂鱼粉含量为10%、15%、20%的3种等蛋白基础饲料,另外3组分别饲喂添加有175mg/kg蛋白酶AG的以上3种饲料,试验期60d。试验Ⅱ选取120尾均重48.7g的鲤鱼,随机分为2组,一组饲喂鱼粉含量6%的基础饲料为对照组,另外一组饲喂添加175mg/kg蛋白酶AG的基础饲料为试验组,试验期为30d。试验Ⅰ结果表明:摄食10%鱼粉饲料和20%鱼粉+175mg/kg蛋白酶AG饲料的鲤鱼分别具有最低和最高的增重率;在10%鱼粉饲料中添加蛋白酶AG显著提高了鱼体增重率(P<0.05),但在15%、20%鱼粉饲料中添加蛋白酶AG,对鱼体增重率没有显著影响。试验Ⅱ结果表明:相比于对照组,试验组鲤鱼增重率提高了6.4%(P<0.05),饲料系数降低了5.4%(P<0.05)。试验Ⅰ和试验Ⅱ中,添加蛋白酶AG对鱼体肌肉水分、粗脂肪、粗蛋白质含量均无显著影响(P>0.05);对消化酶活性的测定表明,在鱼粉含量为10%、6%的基础饲料中添加蛋白酶AG,可显著提高前肠组织蛋白酶活性和食糜蛋白酶活性(P<0.05),但在鱼粉含量为15%、20%的基础饲料中添加蛋白酶AG,对前肠组织蛋白酶活性和食糜蛋白酶活性没有影响。综上所述,在鱼粉含量较低的饲料中添加蛋白酶AG,可提高鲤鱼消化道蛋白酶活性,改善生长性能。

花生分离蛋白碱性蛋白酶Alcalase水解物具有血管紧张素转化酶抑制活性(英文)

分别以碱性蛋白酶Alcalase和中性蛋白酶Neutrase对花生分离蛋白进行水解,制备花生分离蛋白水解物,并测定不同水解时间所得产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制活性。未水解的花生分离蛋白没有ACE抑制活性,用中性蛋白酶Neutrase水解所得的水解物显示弱ACE抑制活性。然而,碱性蛋白酶Alcalase水解物具有很强的ACE抑制活性,水解0.5h时水解物活性最高,其半抑制浓度为(IC50)0.56mg/ml。本研究表明,当用碱性蛋白酶Alcalase水解时,花生分离蛋白是生产ACE抑制肽的良好蛋白质来源,花生分离蛋白碱性蛋白酶Alcalase水解物可作为具有降压功能的功能食品添料。

低产蛋白酶A啤酒酵母的诱变选育及在啤酒中试发酵中应用的研究

以啤酒酵母X为出发菌株,用N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(亚硝基胍,NTG)和甲基磺酸乙酯(EMS)连续诱变,通过酸变性血红蛋白平板初筛及三角瓶发酵实验复筛,得到一株产蛋白酶A活力低的啤酒酵母突变株GM235。将该菌株进行100L啤酒发酵中试并测定发酵液蛋白酶A活力及各项发酵性能。结果表明:与出发菌株X相比,GM235发酵的啤酒蛋白酶A活力降低了19.83%,降糖能力、双乙酰还原能力略强,正丙醇含量高于出发菌株X,异丁醇、异戊醇、活性戊醇、乙酸乙酯的含量均低于出发菌株X,异戊醇和总高级醇分别降低了5.03%和4.87%;突变株GM235中试生产的啤酒泡沫更为细腻、持久。突变株GM235是一株具有工业应用前景的啤酒酿造酵母。

甲基磺酸乙酯(EMS)诱变选育低产蛋白酶A啤酒酵母的研究

采用甲基磺酸乙酯(EMS)对啤酒酵母进行化学诱变,利用酸变性血红蛋白平板筛选得到5株低产蛋白酶A的菌株。通过发酵栓试验,测定发酵综合性能,其中突变株E10在发酵力、双乙酰还原能力和风味物质等综合指标保持了亲株的优良性状,同时蛋白酶A活力显著降低,遗传5代,测其发酵性能,表明遗传性状稳定。

工业化酿造过程中酵母分泌蛋白酶A的规律及影响因素的研究

对啤酒工业化规模发酵过程中酵母分泌蛋白酶A的规律进行了探讨,对酵母代数及酵母贮存条件等因素对酵母分泌蛋白酶A的影响进行了研究,并对蛋白酶A活性不同的成品纯生啤酒的泡持值、泡沫活性蛋白含量及蛋白酶A活性进行了跟踪分析。结果表明:发酵过程中,蛋白酶A的活性呈上升趋势且接种酵母的蛋白酶A活性越高,与其对应的发酵液中蛋白酶A的活性越高,成品酒的泡沫稳定性越差。另外,随着酵母代数及贮存时间的增加,酵母分泌蛋白酶A的量增加。当酵母蛋白酶A活性控制在0.015U/m L以下且成品酒的初始蛋白酶A活性在15×10-5U/m L以下时,储存4个月的成品纯生啤酒的泡沫稳定性较好。

蛋白酶A对纯生啤酒泡持性的影响研究

该文研究蛋白酶A活力对纯生啤酒泡持性的影响,同时建立初始成品纯生啤酒及过滤前发酵液蛋白酶A活力限量值。结果表明,随着贮存时间的延长,纯生啤酒蛋白酶A活力和泡持值均呈下降趋势,最终残留蛋白酶A活力是影响其货架期泡持值的主要因素。纯生啤酒泡持值与蛋白酶A活力呈显著负相关(P<0.01)。为了保证成品纯生啤酒在货架期内泡沫稳定性,发酵液出罐滤酒前的蛋白酶A活力应<24×10^(-5)U/mL,相应成品纯生啤酒初始蛋白酶A活力应<15×10^(-5)U/mL。该内控标准能为纯生啤酒生产企业控制泡持性提供指导。

基质金属蛋白酶-9和妊娠相关血浆蛋白酶A及hs-CRP与急性冠脉综合征的相关性

目的:探讨外周静脉血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、妊娠相关血浆蛋白酶A(PAPP-A)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平对冠状动脉粥样硬化斑块稳定性的作用。方法:选取43例急性冠脉综合征(ACS)患者为实验组,其中急性心肌梗塞(AMI)23例,不稳定型心绞痛(UAP)20例,稳定型心绞痛(SAP)25例,健康对照组13例,分别测定他们的血清MMP-9、PAPP-A、hs-CRP水平,比较各组的差异及其在ACS组中的相互关系。结果:UAP组和AMI组的MMP-9、PAPP-A和hs-CRP水平非常显著高于对照组(P<0.01),亦显著高于SAP组(P<0.05～<0.01),hs-CRP水平与MMP-9、PAPP-A水平显著相关(r=0.217,0.244,P均<0.05)。结论:MMP-9、PAPP-A、hs-CRP与斑块不稳定性密切相关,其测定有助于ACS的早期防治。

蛋白酶A抑制剂GLPAI动力学性质的研究

对一种从灵芝发酵液中提取得到的蛋白酶A抑制剂GLPAI(GanodermaLucidumpro-teinaseAinhibitor)的动力学性质进行了研究,分别以胃蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶A为底物考察了GLPAI的动力学性质,实验结果:GLPAI对上述3种蛋白酶的抑制类型均属于混合型抑制模式,对胃蛋白酶的Ki=4.64(μmol/L);对胰蛋白酶的Ki=33.5(μmol/L);对蛋白酶A的Ki=2.7(μmol/L).

高分子蛋白和蛋白酶A对纯生啤酒泡沫稳定性的影响

利用考马斯亮蓝法、荧光底物法分别跟踪检测啤酒酿造和贮存过程中高分子蛋白含量及蛋白酶A活力变化，研究影响纯生啤酒泡沫稳定性的关键因素。结果表明，各发酵罐因发酵阶段工艺参数的不同，导致高分子蛋白含量及蛋白酶A活力变化趋势存在明显差异。发酵阶段高分子蛋白含量缓慢降低，由入罐麦汁时的350～407.6 mg/L降到成品酒时的180.1～243.1 mg/L；蛋白酶A活力在回收酵母前增加，后达到最高值，其范围是18.27～30.13 U/mL，回收酵母后蛋白酶A活力下降，最终在成品酒中的蛋白酶A活力检测值为发酵过程中最高值的19.06%～36.4%。通过对成品纯生啤酒中高分子蛋白含量、蛋白酶A活力的跟踪，分析各自对泡持性的作用发现，高分子蛋白含量与泡持性（r=0.794，P＜0.01）显著正相关；蛋白酶A活力与泡持性及高分子蛋白含量之间没有显著相关性。

反胶束中中性蛋白酶AS1.398反应机理

枯草杆菌中性蛋白酶AS1 398可用于反胶束萃取全脂豆粉分离大豆蛋白和油脂 揭示酶的催化作用机理可用于优化萃取条件 .以大豆分离蛋白为底物 ,研究了AS1 398在AOT/异辛烷反胶束体系中的反应机理 由于底物分子在反胶束中呈泊松分布 ,通过计算底物和酶分子数比例 ,推算出酶催化为单底物反应的概率占绝对优势 借鉴水相酶反应模型 ,考虑反胶束中分子交换作用 ,提出了反胶束中酶的单底物分子反应的作用模型 ,模型推导出水相的米氏常数比反胶束相的大 1个数量级 实验测定酶在水相和反胶束相的米氏常数分别为 3 2× 1 0 -3 g·ml-1和 4 2× 1 0 -4g·ml-1 .两者比值与模型推导出的关系较吻合 ,表明此模型可用来表示反胶束中AS1

天冬氨酸蛋白酶A、甲状腺转录因子-1、核苷酸切除修复交叉互补基因1检测在肺癌患者中的应用价值

目的探讨检测天冬氨酸蛋白酶A(NapsinA)、甲状腺转录因子-1(TTF-1)、核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1)的表达在肺癌患者中的应用价值.方法选取40例肺癌患者的手术切除肺癌病理标本,以40例癌旁正常组织作为对照,检测NapsinA、TTF-1、FERCC1表达.结果肺癌组织中NapsinA、TTF-1、ERCC1表达水平、阳性率显著高于癌旁正常组织(P<0.05);不同病理类型、分化程度者NapsinA表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05);不同病理类型、TNM分期者TTF-1表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05);NapsinA、TTF-1、ERCC1之间无显著相关性(P>0.05).结论临床可经检测NapsinA、TTF-1、FERCC1表达判断肺癌患者病情.

蛋白酶A与纯生啤酒泡沫稳定性及蔗糖转化酶的关系研究

纯生啤酒的泡沫稳定性衰减问题已成为其质量保证的难题。本研究通过外加蛋白酶A、温度梯度热处理研究啤酒残留蛋白酶A酶活和啤酒泡沫的稳定性、蛋白酶A专一抑制剂梯度处理后蛋白酶A残留酶活与对应啤酒泡沫稳定性相关性分析。结果表明,纯生啤酒的蛋白酶A酶活高低直接决定纯生啤酒的泡沫稳定性。通过戴安离子色谱法检测仪器,建立了检测单位时间内蔗糖的转化效率为基础的蔗糖转化酶酶活的评价方法,该方法可以定量评价啤酒经过温瓶温度处理的强度,为鉴别纯生啤酒提供了定量检测方法。

心脏糜蛋白酶A基因-1903AA基因型延缓肥厚型心肌病患者的发病

目的探讨血管紧张素转换酶基因(ACE)16内含子的插入/缺失(I/D)、血管紧张素Ⅱ受体1型基因(AGTR1)1166A/C、醛同酮合成酶基因(CYP11B2)-344C/T、心脏糜蛋白酶A基因(CMA)-1903A/G、肿瘤坏死因子α基因(TNFα)-308G/A和C蛋白β3亚单位基因(GNB3)825C/T等多态对HCM临床表型的影响。对象和方法研究对象为在中国医学科学院阜外心血管病医院就诊的93例无血缘关系的HCM病人,82例性别、年龄匹配的健康人作为正常研究对照。设计特异引物,PCR扩增包含ACE I/D、AGTR1 1166A/C、CYP11B2-344C/T、CMA-1903A/G、GNB3 825C/T、TNF-α- 308G/A等多态的目的片断,根据PCR产物的长度或PCR产物限制性酶切后的长度来判定上述多态。结果4．3%的HCM患者携带CMA-1903AA基因型,其发病(65．5±7．9岁,n=4)晚于携带AG (37．3±12．5岁,n=36,P＜0．01)和GG(40．1±15．3岁,n=53,P＜0．01)基因型的HCM患者。ACE I/D、AGTR1 1166A/C、CYP11B2-344C/T、GNB3 825C/T、TNF-α-308G/A等多态不影响HCM表型。结论携带CMA-1903AA基因型的HCM患者发病明显晚于AG和GG基因型的患者,可能AA基因型具有保护作用。

灵芝发酵全粉中蛋白酶A抑制剂的提取及应用初探

采用热水抽提、乙醇分级沉淀等步骤从灵芝发酵全粉中初步筛得一种粗蛋白酶A抑制剂 ;进一步采用superdex - 2 0 0和ACA4 4凝胶层析方法对其进行分离和组成分析 ,发现分子量 380 0 0蛋白质部分有较强抑制效果 ,一定条件下抑制率可达 71% ;应用实验中发现抑制剂的添加能明显提高纯生啤酒的泡沫稳定性。

固定化亲和层析分离灵芝发酵液蛋白酶A抑制剂

建立了一种固定化亲和层析高效分离筛选蛋白酶A抑制剂的方法,在pH为4.0,戊二醛终浓度为0.6%,给酶量为40mg/0.2g壳聚糖的条件下,固定化酶的回收率较高,达45.9%;利用此固定化蛋白酶A(PrA)亲和柱一步分离灵芝发酵全粉抽提液中的PrA抑制剂,所得抑制剂与原两步层析法分离的PrA抑制剂GLPAI在分子量、糖与蛋白质比例及抑制特性上都较为相近。

血清淀粉样蛋白酶A与慢性阻塞性肺疾病关系的Meta分析

目的 Meta分析血清淀粉样蛋白酶A(SAA)浓度与慢性阻塞性肺疾病(COPD)的关系。方法采用Rev Man5.0软件对符合入选标准的文献进行了随机效应模型Meta分析。结果共纳入7篇文献,Meta分析显示:稳定期COPD(SCOPD)组SAA高于健康对照组〔SMD=0.94,95%CI(0.36,1.26)〕;急性加重期COPD(AECOPD)组SAA高于SCOPD组〔SMD=5.40,95%CI(3.41,7.40)〕。结论 SAA可作为用于COPD疾病进展及药物干预治疗后疗效评估的生物学标志物。

蛋白酶A与啤酒泡沫稳定性（二）

有关蛋白酶A与啤酒泡沫稳定性的内容已经在<啤酒科技>2004年第1期中介绍有关分泌蛋白酶A的酿酒酵母基因组成、基因特点、蛋白酶A(PrA)本身的生理生化特点、检测蛋白酶A的合适底物、蛋白酶A的酶活检测方法等方面的内容.本篇文章中通过查阅大量的国外资料,陆续介绍不同酵母菌株分泌蛋白酶A(简写PrA)的差异性、蛋白酶A影响啤酒泡沫的作用机理、啤酒生产过程中影响酿酒酵母分泌蛋白酶A的各种工艺条件,就如何降低与消除蛋白酶A对成品啤酒泡沫的影响,提出了一些看法.

蛋白酶A与啤酒泡沫稳定性（一）

鉴于对有关分泌蛋白酶A(简写PrA)的酿酒酵母基因组成、基因特点、蛋白酶A本身的生理生化特点、蛋白酶A的酶活检测方法、不同酵母菌株分泌蛋白酶A(简写PrA)的差异性、蛋白酶A影响啤酒泡沫的作用机理、啤酒生产过程中影响酵母分泌蛋白酶A(简写PrA)的各种工艺条件、如何降低蛋白酶A(简写PrA)对成品啤酒泡沫的影响等方面的知识,国内啤酒行业人员可能了解不多或了解不太全面,本文作者通过查阅大量的国外资料,对以上问题进行探讨与综述;与此同时介绍中国食品发酵工业研究院在蛋白酶A与啤酒泡沫稳定性方面的一些研究,希望能够促进与加深啤酒技术人员对蛋白酶A(简写PrA)与啤酒泡沫稳定性方面的了解,生产出更加优质的啤酒.

酿酒酵母蛋白酶A外泌与酒类酿造

蛋白酶A(EC 3.4.23.6)是酿酒酵母中重要的蛋白酶,与酶原激活、生孢等多种生理功能密切相关.在酒类酿造过程中往往会发生蛋白酶A外泌进而影响发酵产品质量的现象.研究胁迫条件下蛋白酶A的外泌及其调控机制,对于酿酒酵母菌种选育和酒类产品质量控制具有重要的理论指导意义.本文主要对蛋白酶A外泌机制和蛋白酶A外泌对酒类酿造影响的相关研究进行综述.