蛋白黑素的研究进展

蛋白黑素是美拉德反应的终产物,在食品烹制及生产加工过程中生成,广泛分布于饮食当中。本文对蛋白黑素的结构、安全性、呈味机制、检验方法以及消除等方面的研究进展做以全面论述。

鸡肉味风味基料中蛋白黑素的初步分析

利用鸡骨架酶解液为原料,通过美拉德反应制备鸡肉味风味基料。通过大小排阻高压液相色谱对鸡肉味风味基料中的蛋白黑素进行分子质量(Mw)分析,发现其大小约为11561.1D;对使用0.2mol/L和0.5mol/L NaCl溶液洗脱出的蛋白黑素进行傅里叶变换红外光谱分析,鉴定出部分C-H、C=O以及C-N等吸收峰,说明蛋白黑素是一类复杂的有机化合物,可能由氨基酸复合物聚合、交联和美拉德反应的早期阶段的糖降解产物形成的,具体结构仍需深入研究。

白癜风患者血清前黑素小体蛋白17自身抗体的检测

目的获取重组前黑素小体蛋白17(Pmel 17)并用于检测白癜风患者血清中Pmel 17自身抗体的分布。方法通过RT-PCR从原代黑素细胞中获得人的Pmel 17基因,先后插入克隆载体pMD19-T和表达载体pGEX-4T-1,以构建重组质粒。IPTG诱导Pmel 17蛋白表达后以亲和层析法进行纯化。间接ELISA检测白癜风患者血清中抗Pmel 17自身抗体的阳性率。结果重组质粒经测序,与预期设计完全一致,同时Pmel 17蛋白成功表达和纯化。ELISA检测进展期白癜风患者血清中抗Pmel 17自身抗体阳性率为22%,稳定期白癜风患者阳性率仅为2%,健康对照组未检测到抗Pmel 17自身抗体,进展期和稳定期阳性率差异具有统计学意义。结论成功表达了Pmel 17重组蛋白,证明Pmel 17自身抗体与白癜风的疾病严重程度有一定关系。

黑素瘤抑制蛋白在转基因小鼠胚胎乳腺组织中的表达

目的：检测黑素瘤抑制蛋白（ＭＩＡ／ＣＤ－ＲＡＰ）在小鼠胚胎乳腺组织中的表达。方法：剖腹分离出１０．５～１６．５ ｄ 的ＭＩＡ／ＣＤ－ＲＡＰ启动子－半乳糖苷酶（２．２ｌａｃＺ）转基因小鼠胚胎，利用Ｘ－ｇａｌ全胚胎染色观察转基因的组织和细胞染色，并以免疫组织化学染色检测内源性ＭＩＡ／ＣＤ－ＲＡＰ蛋白在胚胎乳腺组织中的表达。结果：ＭＩＡ／ＣＤ－ＲＡＰ在孕期１１．５ ｄ 的小鼠胚胎乳腺上皮细胞中开始表达，至１３．５ ｄ 表达明显增强，而后逐渐减弱，至１６．５ ｄ 消失。结论：ＭＩＡ／ＣＤ－ＲＡＰ可能在乳腺的早期发育和乳腺癌发生中起重要作用。

黑素瘤抑制蛋白启动子在小鼠体内的表达活性

目的：观察黑素瘤抑制蛋白（ＭＩＡ／ＣＤ－ＲＡＰ）启动子在小鼠体内的表达活性。方法：利用ＰＣＲ技术扩增２．２ ｋｂ 的ＭＩＡ／ＣＤ－ＲＡＰ启动子，分子克隆技术构建ＭＩＡ 启动子－半乳糖苷酶（２．２ｌａｃＺ）载体，显微注射法将纯化的２．２ｌａｃＺＤＮＡ 注入来自Ｂ６ＳＪＬ杂交小鼠受精卵的原核以制备转基因小鼠。提取幼鼠尾ＤＮＡ，用ｌａｃＺ特异性引物筛选阳性转基因小鼠。结果：８只首建小鼠染色体基因组整合有２．２ｌａｃＺ融合基因。Ｘ－ｇａｌ全胚胎染色发现其中３ 只转基因小鼠在软骨和乳腺组织中均可见转基因的表达。结论：２．２ ｋｂ

黑素转铁蛋白在家兔网织红细胞非转铁蛋白结合铁摄取中的作用

目的 :研究黑素转铁蛋白 (P97)在家兔网织红细胞非转铁蛋白结合铁摄取中的作用。方法 :放射性同位素法 ([59Fe ])。结果 :(1)单纯用磷脂酰肌醇磷脂酶C(PI-PLC)作用网织红细胞 ,其铁摄取无明显变化(P >0 0 5 ) ;(2 )经蛋白酶procnase预处理后 ,再用PI -PLC作用网织红细胞 ,则胞浆内铁及整合到血红素中的铁均较单纯用蛋白酶处理的网织红细胞明显降低。结论 :在家兔网织红细胞膜上可能存在有P97,且P97在其摄取非转铁蛋白结合铁的过程中可能发挥作用。

非转移性黑素瘤糖蛋白基因沉默抑制黑素小体形成的机制探讨

目的:探讨非转移性黑素瘤糖蛋白[glycoprotein(transmembrane)nonmetastatic melanoma proteinb,GPNM]B基因沉默抑制黑素小体形成的作用机制。方法:以黑素细胞系PIG1为研究对象,采用小干扰RNA(siRNA)干扰法下调GPNMB基因的表达,以实时定量反转录(RT)-PCR和Western blot法检测GPNMB-siRNA转染对GPNMB、酪氨酸酶(Tyr)、酪氨酸相关蛋白1(Trp1)、OA1和Pmel17的影响,进一步采用Tyr-siRNA转染PIG1细胞下调Tyr基因的表达以验证GPNMB与Tyr之间的相互作用,并检测GPNMB基因沉默对小眼畸形相关转录因子(MITF)的影响。结果:GPNMB-siRNA转染对GPNMB、Tyr、Trp1、Pmel17和OA1等黑素小体蛋白的表达均有显著抑制作用;GPNMB与Tyr之间无相互作用;GPNMB-siRNA转染或中波紫外线(UVB)单独作用能够上调MITF的表达,但两者共同作用却能显著抑制MITF的表达。结论:GPNMB基因沉默对黑素小体形成的抑制作用不依赖于MITF。

脱氧熊果苷和氢醌对人黑素小体结构完整性及Pmel17蛋白表达影响的差异研究

目的探讨脱氧熊果苷和氢醌对人黑素小体结构完整性和前黑素小体蛋白17(Pmel17)表达影响的差异。方法体外分离并纯化黑素瘤细胞系MNT1中黑素小体,实验分3组,对照组、氢醌组、脱氧熊果苷组分别加入磷酸盐缓冲液(PBS)、10μmol/L氢醌、100μmol/L脱氧熊果苷,37℃孵育30 min,通过透射电镜观察各组黑素小体超微结构的改变。体外培养MNT1细胞,实验分3组,对照组、氢醌组、脱氧熊果苷组分别加入PBS、10μmol/L氢醌、100μmol/L脱氧熊果苷,37℃孵育24 h,蛋白免疫印迹法检测各组Pmel17蛋白的表达水平。采用单因素方差分析和Bonferroni法比较组间差异。结果对照组黑素小体超微结构完整,黑素小体破坏率为(14.80±3.70)%,Pmel17蛋白相对表达量为0.84±0.04;氢醌组黑素小体膜结构破坏,黑素小体裂解,黑素小体破坏率为(54.40±3.65)%,Pmel17相对表达量为0.61±0.03;脱氧熊果苷组黑素小体膜结构也遭破坏,部分黑素小体裂解,黑素小体破坏率仅为(27.60±3.65)%,Pmel17蛋白相对表达量为0.49±0.03。氢醌组与对照组、脱氧熊果苷组与对照组、脱氧熊果苷组与氢醌组在黑素小体结构完整性和Pmel17蛋白表达量比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论在体外实验中,与氢醌相比,脱氧熊果苷仅轻度破坏黑素小体超微结构,但更明显抑制了Pmel17蛋白的表达。

黑素转铁蛋白在家兔网织红细胞膜上的表达及其在铁摄取中的作用

目的 :研究黑素转铁蛋白 (p97)在家兔网织红细胞膜上的表达及其在非转铁蛋白结合铁摄取中的作用。方法 :聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS =PAGE)和放射性同位素法 (59Fe)。结果 :①网织红细胞孵育液浓缩后 ,经SDS PAGE测定 ,在分子量 97kD位置上可见一条明显的蛋白带 ;用磷脂酚肌醇磷脂酶C(PI PLC) 30 0mu/ml预处理网织红细胞后 ,孵育液浓缩再经SDS PAGE测定 ,在分子量 97kD处仍有一条明显的蛋白带 ,且其平均OD值高于未经处理的网织红细胞 ;而成熟的红细胞在此处却没有明显的蛋白带。②单纯用PI PLC作用于网织红细胞 ,其铁摄取无明显变化 (P >0 .0 5 )。③去除内源性转铁蛋白后 ,再用PI PLC作用网织红细胞 ,则胞浆内铁及整合到血红素中的铁均较未经处理的网织红细胞明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 :p97可能存在于家兔网织红细胞膜上 。

黑素瘤抑制性活性蛋白及基质金属蛋白酶-9在恶性黑素瘤的表达

目的:探讨黑素瘤抑制性活性蛋白(MIA)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在恶性黑素瘤中的表达以及作用。方法:应用SP免疫组化技术对38例恶性黑素瘤石蜡标本以及32例色素痣石蜡标本检测MIA及MMP-9表达水平。结果:MIA在所有色素痣中表达阴性,而在原位黑素瘤、侵袭性黑素瘤、有淋巴结转移恶性黑素瘤、无淋巴结转移恶性黑素瘤阳性表达率分别为21.4%,91.6%、94.1%、42.8%,MMP-9在恶性黑素瘤阳性表达率为71.1%,MIA的表达与MMP-9的表达呈正相关。结论:MIA在恶性黑素瘤的发生发展中起着重要作用,这种作用可能是通过上调MMP-9的表达来实现的。MIA有可能成为临床诊断、治疗恶性黑素瘤的有力靶点。

黑素瘤抑制蛋白2和VEGF在肝癌中的表达及其临床意义

目的研究黑素瘤抑制蛋白2(MIA2)和血管内皮生长因子(VEGF)在肝癌中的表达及其与肝癌临床病理特征之间的关系。方法采用免疫组化SP法检测36例肝癌手术切除标本的MIA2及VEGF的表达情况。结果 36例HCC中MIA2、VEGF阳性表达分别为41.7%和77.8%;MIA2和VEGF表达有相关性(P<0.05)。29例癌旁组织中MIA2和VEGF阳性表达分别为93.1%和34.5%。肝癌组织和癌旁组织MIA2和VEGF表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MIA2在肝癌组织中呈低表达,且与肝癌的TNM分期、病理分级及肿瘤转移有关。MIA2和VEGF的表达呈负相关。

黑素瘤抑制活性蛋白作为血清标志物对恶性黑素瘤的诊断价值

恶性黑素瘤(malignant melanoma,MM)是起源于神经嵴黑素细胞的高度恶性肿瘤。由于MM具有高度侵袭性且转移后预后极差,寻找一个可以提示肿瘤进展并评估预后的诊断指标显得极为重要。黑素瘤抑制活性蛋白(melanoma inhibitory activity protein,MIA)是一种在MM患者体内特异性高表达的小分子蛋白,在转移性MM患者血清水平增高尤为明显。研究证实,MIA参与了MM的转移和免疫抑制,故检测MIA水平对监测原发灶切除后肿瘤的复发和转移十分必要,同时解决了传统复查方式的辐射暴露和高昂检测费用等问题。该文综述了近年来MIA的分子机制研究、MIA的检测方法及是否可作为预后指标,还综述了与其他血清标志物如S-100β蛋白、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)结合,评估MM结局,认为MIA可成为评估MM进展及预后的指标。

人黑素瘤细胞A375 MIA/CD-RAP基因的克隆及其鉴定

目的为了研究人黑素瘤M IA/CD-RAP基因的生物学功能,克隆M IA/CD-RAP的cDNA,构建表达载体后,对其进行酶切和DNA测序鉴定。方法用RT-PCR从培养的人黑素瘤细胞A375中扩增M IA/CD-RAP cDNA,将其克隆到载体pcDNA3.1-MycH is上,经酶切及PCR扩增鉴定和测序。结果酶切电泳和DNA测序结果表明,成功地克隆了人黑素瘤M IA/CD-RAP cDNA。结论人黑素瘤M IA/CD-RAP cDNA的克隆,可为进一步研究其生物学功能奠定基础。

血清MIA检测在恶性黑素瘤诊断中的临床价值

目的 :探讨血清黑素瘤抑制蛋白 (melonom a- inhibiting activity protein,MIA)在恶性黑素瘤诊断中的价值。方法 :采用 EL ISA方法 ,检测不同临床分期的黑素瘤及其他恶性肿瘤患者 ,以及正常人血清 MIA浓度。 结果 :正常成人 (n=2 0 )和肺癌 (n=10 )、肝癌 (n=12 )、结肠癌 (n=12 )患者血清 MIA浓度全部低于正常 (6 .5 ng/m l)水平 ,黑素瘤患者血清 MIA浓度明显升高 ,阳性率达 77.3% (17/2 2 ) ,其中 , 期患者阳性率达 10 0 % (15 /15 )。乳腺癌患者阳性率 2 6 .7% (4/15 )。 结论 :血清MIA水平是临床诊断黑素瘤的一个较好指标。

人黑素瘤细胞A375 MIA/CD-RAP基因启动子的克隆及其鉴定

目的:克隆MIA/CD-RAP的启动子序列并对其进行酶切和DNA测序鉴定。方法:从培养的人黑素瘤细胞A375基因组DNA中扩增出MIA/CD-RAP启动子序列,并将其克隆到载体pGL2-Ba-sic上,再经酶切及PCR扩增鉴定和测序。结果:酶切电泳和DNA测序结果表明,已成功克隆了人黑素瘤MIA/CD-RAP启动子序列。结论:人黑素瘤MIA/CD-RAP启动子序列的克隆,可为进一步研究MIA/CD-RAP基因的表达调控奠定基础。

黑素瘤MIA启动子介导的CD/TK双自杀基因重组腺病毒系统选择性杀伤黑素瘤细胞

目的:探讨黑素瘤抑制蛋白(melanoma inhibitory activity,MIA)启动子介导的CD/TK双自杀基因重组腺病毒系统,对黑素瘤细胞A375的选择性杀伤作用。方法:构建腺病毒穿梭质粒pAdrMIA-CD/TK,在293细胞内包装、扩增、纯化后,体外转染人表皮黑素细胞HeMa-LP、黑素瘤细胞A375和人宫颈癌细胞HeLa,RT-PCR检测基因CD和TK片段,加入前体药物5-氟胞嘧啶(5-FC)和/或丙氧鸟苷(GCV),用MTT法测定该体系对细胞株的杀伤效应。结果:制备的病毒滴度为1×1011pfu/L,用100m.o.i.重组腺病毒感染细胞后,发现目的基因CD和TK片段可在黑素瘤细胞中表达,转染目的基因的黑素瘤细胞A375对5-FC和GCV具有一定的敏感性,细胞存活率较对照组显著下降(P<0.05),联合应用两种药物对A375细胞的杀伤作用较单用一种显著增强(P<0.05)。对人表皮黑素细胞HEMa-LP和人宫颈癌细胞HeLa无显著杀伤作用。结论:构建的黑素瘤MIA启动子介导的CD/TK双自杀基因重组腺病毒系统,在体外可选择性杀伤黑素瘤细胞A375。

大豆豆酱、酱油中褐色色素的生理功能作用

本文通过大量的引证资料和实验数据 ,详细地分析和说明了大豆发酵制品中生成的褐色色素的特征特性、功能作用及生理生化反应 ,涉及了制取方法和食用注意事项 ,旨在大力开发和应用褐色色素 ,并对有关机理进行深入研究。

儿童肥胖的生化机制和遗传特征

肥胖是遗传因素和环境因素共同作用的结果。儿童肥胖的易感性主要由遗传因素决定,具有较高的遗传率和遗传特征。瘦蛋白-促黑素细胞激素调控途径中断、单基因突变以及染色体重排都可能引起肥胖。对儿童肥胖的遗传学研究为治疗靶向药物的研制提供依据。

非转移性黑素瘤糖蛋白B对黑素瘤细胞增殖、迁移及黑素形成的影响

目的探讨非转移性黑素瘤糖蛋白B（GPNMB）对黑素瘤细胞增殖、迁移及黑素形成的影响。方法以人原代黑素细胞、黑素瘤细胞系M14、G-361为研究对象，采用免疫荧光法检测GPNMB表达量。细胞分为三组，实验组加入GPNMB—siRNA，阴性对照组加入阴性对照-siRNA，空白对照组为未经处理的细胞。实时定量逆转录（RT）-PCR检测GPNMB—siRNA的转染效率，以噻唑蓝法和Transwell小室法分别检测细胞的增殖及侵袭能力，并用分光光度计检测黑素水平，结果进行t检验分析。结果GPNMB—siRNA转染下调了GPNMBmRNA及蛋白的表达水平，并显著抑制黑素瘤细胞的增殖和迁移能力。其中黑素瘤M14细胞和G361细胞的增殖能力分别降低35％和40％，迁移能力分别降低49％和51％；同时，黑素细胞、黑素瘤M14细胞和G361细胞黑素形成分别降低73％、82％和69％。结论GPNMB缺失能抑制黑素瘤的增殖、迁移以及黑素瘤中黑素的形成，表明GPNMB在黑素瘤的发生发展中起重要作用。