线粒体内膜蛋白17(MPV17)通过阻断ERK通路抑制铁过载小鼠脾脏CD3^(+)T细胞铁死亡

目的探索铁过载对小鼠脾脏损伤的影响及线粒体内膜蛋白17(MPV17)在铁过载小鼠脾脏CD3^(+)T细胞铁死亡中的作用。方法将小鼠随机分为正常饮食组、高铁饮食组、高铁饮食联合铁死亡抑制剂ferrostatin-1(Fer-1)处理组、高铁饮食联合MPV17腺病毒注射组,每组5只。喂食8周后,取脾脏组织并固定,通过组织切片和HE染色法观察脾脏结构,碘化丙啶(PI)染色检测脾脏CD3^(+)T细胞死亡,脂质过氧化荧光探针C11 BODIPY 581/591检测脂质氧化,实时定量PCR检测溶质载体家族7成员11(SLC7A11)及前列腺素内过氧化物合成酶2(PTGS2)mRNA水平,流式细胞术检测M1、M2巨噬细胞比例,ELISA实验检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)及IL-6的含量。同时增加高铁饮食联合细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂处理组、ERK激活剂处理组、β半乳糖苷(β-gal)酶联合ERK激活剂处理组、MPV17联合ERK激活剂处理组,Western blot法检测MPV17、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、磷酸化的ERK(p-ERK)水平,JC-1结合流式细胞术检测线粒体膜电位。结果与正常饮食组相比,高铁饮食组小鼠脾脏红髓形状不规则,白髓结构消失,脾脏CD3^(+)T细胞死亡增多,脂质过氧化物增多,SLC7A11及PTGS2表达升高,血液中M1/M2巨噬细胞比例升高,炎症因子含量升高;经Fer-1处理或过表达MPV17,部分恢复脾脏结构,CD3^(+)T细胞数量及脂质过氧化物减少,SLC7A11及PTGS2表达被抑制,M1/M2巨噬细胞比例及炎症因子的含量降低。高铁饮食导致GPX4表达降低,p-ERK表达升高,抑制ERK部分恢复GPX4表达,激活ERK降低GPX4表达;MPV17抑制ERK部分恢复GPX4表达,MPV17部分恢复因ERK激活导致的线粒体膜电势降低。结论铁过载可诱导小鼠脾脏CD3^(+)T细胞发生铁死亡,MPV17通过阻断ERK信号抑制高铁饮食诱导的脾脏CD3^(+)T细胞铁死亡。

突触融合蛋白17通过调节自噬减少阿尔茨海默病细胞模型中淀粉样物质沉积

目的:探究突触融合蛋白17(STX17)对小鼠海马神经元HT22细胞中自噬和淀粉样物质沉积的影响及可能机制。方法:用慢病毒介导HT22细胞内淀粉样前体蛋白(APP)和STX17过表达,RT-qPCR检测慢病毒感染后各组细胞中APP和微管相关蛋白1轻链3-II(LC3-II)及STX17的mRNA表达情况。刚果红染色观察HT22细胞中淀粉样物质沉积情况。Western blot检测自噬相关蛋白LC3-II和P62的表达。免疫荧光观察细胞中STX17定位,以及LC3-II定位和斑点数量。结果:HT22细胞成功过表达APP后,淀粉样物质沉积增多,STX17表达下降,STX17主要定位在细胞质内,LC3-II和P62表达明显增多。过表达STX17后,LC3-II和P62表达下降,淀粉样物质沉积减少。结论:STX17通过调节自噬减少阿尔茨海默病淀粉样物质沉积。

细胞角蛋白17在胃癌细胞上皮间充质转化(EMT)中的作用及临床意义研究

研究 CK17对胃癌细胞株体外侵袭转移能力的影响,以及调控上皮间充质转化(EMT)标志性基因的表达情况,为寻找胃癌诊疗新靶点提供理论依据。方法 胃癌细胞系AGS、MGC823、MGC803、SGC7901、MKN45、人胃癌细胞(HGC-27)、胃部正常黏膜组织上皮细胞株人胃黏膜细胞(GES-1),制定与完善靶向抑制CK-17指标水平表达的特异性小干扰RNA(Small interfering RNA;siRNA),同时瞬时转染人胃癌细胞SGC7901以及AGS细胞。实时荧光定量核酸扩增检测(Real-time Quantitative PCR Detecting System,qPCR)方法检查瞬时转染96小时后SGC7901以及AGS细胞中CK17mRNA指标表达水平;并且使用MTT比色方法细胞划痕愈合发光法、TransweII小室方法检查减少CK17指标表达水平对于细胞繁殖、迁移以及侵袭等方面的影响,使用蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB )方式对细胞中上皮间充质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)有关蛋白表达水平进行检测。结果 与正常胃黏膜上皮细胞相比,六种胃癌细胞株CK17指标表达水平均处于较高水平中,靶向抑制 siRNA CK-17组SGC7901及AGS细胞中CK-17 mRNA表达下调(P<0.01),该细胞的增殖、迁移和侵袭能力受到抑制,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、vimentin蛋白表达降低。结论 CK17可促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,该作用可能与EMT过程有关。

角蛋白17基因敲除加剧糖尿病小鼠的创面愈合障碍

目的 探究角蛋白17(keratin 17,Krt17)基因敲除对糖尿病小鼠创面愈合的影响。方法 取6周龄野生型小鼠和Krt17基因敲除小鼠,利用60%高脂饲料喂养4周和腹腔注射链脲佐菌素(40 mg/(kg·d),连续5 d)联合诱导建立糖尿病小鼠模型;于造模成功后1周,小鼠异氟烷全身麻醉,背部剃毛,用6 mm环钻制造在体的皮肤圆形损伤;于制造创面后第8天,利用Western blot和免疫荧光染色检测KRT17在创面近端中的表达和定位及病理组织学分析;并于制造创面后第0、2、4、6和8天拍照记录,计算伤口愈合速率。结果 在正常生理情况下,KRT17主要在小鼠毛囊中表达;当皮肤受到损伤时,创面近端的角质形成细胞中KRT17的表达显著升高;而糖尿病小鼠创面中KRT17的表达较对照组小鼠显著下调。与野生型小鼠相比,Krt17基因敲除小鼠的伤口愈合速率显著降低;创面局部炎症反应更持续。结论 Krt17基因敲除加剧了糖尿病小鼠的创面愈合障碍,Krt17可能是参与该病理进程的重要调控基因之一。

钙黏蛋白17对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其PI3K/AKT/mTOR信号通路调节机制

目的:探讨钙黏蛋白17 (Cadherin-17)对结直肠癌(CRC)细胞增殖和凋亡的影响,阐明其可能的机制。方法:构建Cadherin-17基因过表达及小干扰质粒,包装成慢病毒,转染至SW480细胞,构建过表达和干扰病毒稳转株。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测细胞中Cadherin-17 mRNA和蛋白表达水平,验证转染效率并鉴定稳转株。SW480细胞分为对照组、空载体组、 Cadherin-17过表达质粒(OV-Cadherin-17)组和Cadherin-17小干扰质粒(si-Cadherin-17)组,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中Cadherin-17、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素c(Cyt-c)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路相关蛋白表达水平。采用PI3K抑制剂LY294002处理细胞,将细胞分为对照组、 LY294002组、 OV-Cadherin-17+LY294002组和si-Cadherin-17+LY294002组,检测各组细胞增殖活性、细胞凋亡率及细胞中Bcl-2、 Bax、 Cyt-c、 Caspase-3和PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达水平。结果:RT-qPCR和Westernblotting法检测,OV-Cadherin-17和si-Cadherin-17转染和稳转株构建成功。与对照组比较,OV-Cadherin-17组细胞增殖活性明显升高(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01),细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Bcl-2和Cyt-c蛋白表达水平明显升高(P<0.01),磷酸化PI3K (p-PI3K)、磷酸化AKT (p-AKT)和磷酸化mTOR (p-mTOR)蛋白表达水平明显升高(P<0.01),si-Cadherin-17组和LY294002组细胞增殖活性明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.01),细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Bcl-2和Cyt-c蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与LY294002组比较,OV-Cadherin-17+LY294002组细胞增殖活性明显升高(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01),细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Bcl-2和Cyt-c蛋白表达水平明显升高(P<0.01),p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平明显升高(P<0.01),si-Cadherin-17+LY294002组细胞增殖活性明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.01),细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Bcl-2和Cyt-c蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:Cadherin-17可促进CRC细胞增殖,抑制CRC细胞凋亡,其机制可能与Cadherin-17调控PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活有关。

刚地弓形虫棒状体蛋白17基因的克隆、表达及抗原性分析(英文)

目的克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株棒状体蛋白17(TgROP17)基因,并分析其抗原性。方法制备弓形虫RH株速殖子总RNA,根据TgROP17基因全长编码序列(GenBank登录号为AM075203.1)的开放阅读框设计引物并进行逆转录PCR(RT-PCR)扩增,扩增产物经双酶切后连接入pGEX-6P-1载体,重组质粒转化大肠埃希菌(E coli)DH5α,阳性菌落经PCR和双酶切鉴定,并测序。将重组质粒pGEX-6P-1-TgROP17转化至E.coli Rosetta(DE3)并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。分别以兔抗弓形虫血清和抗谷胱甘肽S转移酶(GST)标签抗体为一抗,采用蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白及其抗原性。结果 RT-PCR扩增产物约为1850 bp。菌落PCR、双酶切及测序结果显示重组质粒pGEX-6P-1-TgROP17构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(M_r)约96 000的可溶性重组蛋白。Western blotting结果表明,诱导表达的蛋白质为带GST标签的重组蛋白,且能被兔抗弓形虫血清识别。结论获得刚地弓形虫重组ROP17蛋白,且具有抗原性。

人精子蛋白17单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备抗精子蛋白17(Sp17)的单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:克隆人Sp17cDNA,表达带有6His标记的重组Sp17,用纯化的重组Sp17免疫BALB/c小鼠制备mAb。用ELISA筛选抗体阳性的细胞克隆。用免疫组化染色法及阻断试验鉴定mAb的特异性。结果:获得2株杂交瘤细胞系3C12和3D6,其分泌的mAb的Ig亚类(型)分别为IgG1和IgM(κ),杂交瘤细胞培养上清的ELISA效价分别为1∶64和1∶32;腹水mAb的效价分别为1∶1×105和1∶5×104。用人和大鼠睾丸组织以及人精液精子免疫组化染色及阻断试验证明,抗Sp17mAb具有良好的特异性。抗Sp17mAb也可识别卵巢癌组织中异常表达的Sp17。结论:成功地制备特异性的抗Sp17mAb,为研究该蛋白的功能、天然分布及异常表达奠定了基础。

精子蛋白17mRNA在卵巢癌中的表达及临床意义

目的:测定精子蛋白(Sp)17mRNA在肿瘤组织中表达情况。方法:设计合成特异性引物,建立测定人Sp17mRNA的RTPCR的方法,以β肌动蛋白(βactin)作为内标。检测13份原发卵巢癌组织标本、3份卵巢癌腹水标本和13份其他肿瘤组织标本。用正常睾丸组织RNA作模板进行RTPCR作为阳性对照,正常卵巢组织为阴性对照。阳性对照可出现2个条带,其中Sp17扩增产物近500bp,βactin产物234bp。阴性对照仅出现βactin条带。结果:13份原发卵巢癌组织标本中,11例表达Sp17mRNA,阳性率为84.6%。3份卵巢癌腹水标本中,1份检出Sp17mRNA。其他肿瘤组织标本全部阴性。结论:Sp17mRNA在原发卵巢恶性肿瘤中高水平表达,可以作为临床诊断的辅助指标。

血清顶体蛋白酶抗体与精子蛋白17抗体对不孕不育症的临床价值探讨

目的探讨血清顶体蛋白酶抗体(AcrAb)与精子蛋白17抗体(Sp17Ab)对不孕不育的影响及意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测60例不明原因不孕不育症患者及48名正常生育者(对照组)血清AcrAb、SP17Ab,采用t检验和直线相关分析进行统计。结果不明原因不孕不育症组男性及女性血清AcrAb分别为(22.39±3.15)、(21.02±3.56)U/L,均明显高于对照组男、女性[(11.29±2.15)、(10.23±2.12)U/L,P<0.01];不明原因不孕不育症组男性及女性血清Sp17Ab分别为(10.47±2.10)、(9.63±2.04)U/L,均高于对照组男、女性[(3.63±1.05)、(3.58±1.03)U/L,P<0.01];男性及女性血清AcrAb和Sp17Ab之间均无相关性[相关系数(r)分别为0.17、-0.20,P均>0.05]。结论不明原因不孕不育症患者血清AcrAb及Sp17Ab含量明显高于正常人,且相互独立,可单独或联合检测作为不孕不育症的辅助诊断指标。

子宫内膜癌和宫颈癌中CT抗原精子蛋白17的异常表达

目的人精子蛋白17(spermprotein17,Sp17)正常情况下局限表达于睾丸,近年发现在上皮性卵巢癌等恶性肿瘤中异常表达,已被列入CT(cancer/testis)抗原家族。我们研究该蛋白在不同病理类型的子宫内膜癌和宫颈癌中的表达频度、分布类型以及与肿瘤临床分期分级的关系,旨在探讨Sp17是否可能成为相关妇科肿瘤诊断标志和治疗靶标。方法用免疫组化技术检测81例石蜡包埋的妇科恶性肿瘤组织标本中Sp17的表达,其中包括50例子宫内膜癌(腺癌44例、腺鳞癌6例)和31例宫颈癌(鳞癌17例、腺癌14例)。结果子宫内膜癌组织Sp17的阳性率为66%(33/50),其中腺癌29例阳性,腺鳞癌4例阳性,表达模式呈异质性,Sp17表达与肿瘤分化程度和临床分期均无相关性。宫颈癌组织Sp17总阳性率32.2%(10/31),鳞癌23.5%(4/17),腺癌42.8%(6/14)。结论Sp17在子宫内膜癌和宫颈腺癌中呈高水平异常表达,尽管其表达与肿瘤分化程度和临床分期无明显相关,仍有可能作为肿瘤体内显像诊断和免疫治疗的分子靶标。

刚地弓形虫棒状体蛋白17(ROP17)真核表达载体的构建、表达及其激酶活性分析

目的构建刚地弓形虫RH株棒状体蛋白17(ROP17)真核表达载体,对表达产物进行激酶活性的检测和功能分析。方法根据刚地弓形虫ROP17蛋白编码基因(GenBank登录号为AM075203.1)设计引物,以弓形虫RH株速殖子总RNA为模板,RT-PCR扩增目的基因片段,克隆至真核表达载体p3×Flag-CMV-14,构建重组质粒p3×Flag-CMV-14/TgROP17。经菌液PCR、双酶切和测序鉴定正确后,用脂质体法转染至人胚肾细胞(HEK293T),RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分析表达产物;Western blotting检测其激酶活性;流式细胞术分析ROP17对转染宿主细胞凋亡的影响。结果 RT-PCR结果显示,从RH株弓形虫速殖子中扩增出约1 850 bp的基因片段。菌落PCR、双酶切和测序结果显示,重组质粒p3×Flag-CMV-14/TgROP17构建成功且序列正确。RT-PCR和Western blotting结果显示,在转染p3×Flag-CMV-14/TgROP17的细胞中有TgROP17的表达,基因片段大小为1 850bp,蛋白质相对分子质量(Mr)约为70 000,而转染空质粒组未见表达。Western blotting结果显示,ROP17可以磷酸化c-Jun蛋白;流式细胞术结果显示,ROP17抑制喜树碱(CPT)诱导的细胞凋亡,6 h和12 h的抑制率分别为20.6%和24.1%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了真核表达载体p3×Flag-CMV-14/TgROP17,其表达产物具有激酶活性且能够抑制细胞凋亡。

靶向角蛋白17基因的小干涉RNA对角质形成细胞增生与凋亡的影响

目的利用RNA干涉技术诱导角蛋白17(K17)基因沉默,观察其对角质形成细胞(KC)增生和凋亡等生物学活性的影响。方法合成两条含有针对人K17mRNA序列的正义和反义寡核苷酸,退火后与表达载体psilencer3.1-H1neo相连接,经鉴定后转染人角质形成细胞系HaCaT,分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(W est-ern b lot)检测转染细胞K17 mRNA与蛋白水平的改变,用流式细胞仪检测转染细胞的细胞周期及凋亡情况,并通过透射电镜观察细胞的凋亡。结果成功构建了靶向人K17基因的siRNA表达载体psilencer3.1/K17,检测到瞬时转染的HaCaT细胞中K17的蛋白水平及mRNA水平均明显下降。流式细胞仪检测表明转染细胞的细胞周期发生了明显的G1期阻滞并证实凋亡的存在,电镜下观察到凋亡小体。结论对于增生活跃的角质形成细胞,K17的表达对其增生、分化和凋亡等生物学活性具有重要影响。靶向K17的siRNA能够抑制角质形成细胞增生,诱导其凋亡。

人精子蛋白17基因在大肠杆菌中的表达

目的:克隆人精子蛋白17(hSp17)基因,构建重组表达载体并表达重组蛋白.方法:用RTPCR法从人睾丸中克隆hSp17基因,构建重组表达质粒pET28a(+)/hSp17,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDSPAGE检测,用特异性hSp17的mAb进行Westernblot鉴定,NiNTAHisBind树脂纯化重组蛋白.结果:克隆到hSp17cDNA(456bp)并经过DNA测序证实,表达和纯化得到重组蛋白hSp17(表观Mr为27500),并经过Westernblot鉴定.结论:成功克隆和表达hSp17基因.

不育患者血清精子蛋白17抗体的检测及临床意义

目的:检测抗精子抗体(AsAb)阳性不育患者血清中抗精子蛋白17(Sp17)的抗体,探讨该抗体在免疫性不育血清学诊断和免疫避孕方面的潜在应用价值。方法:用重组人Sp17作为抗原,ELISA法检测62例AsAb阳性血清中Sp17抗体阳性率及滴度,分析AsAb中抗Sp17的含量。结果:AsAb阳性血清中Sp17抗体阳性率为56.5%,男女之间差异无显著性。Sp17抗体占AsAb的(10.09±7.45)%,结果具有统计学意义(P<0.05)。结论:Sp17是重要的精子抗原组分,血清中Sp17抗体的检测可作为不育患者辅助诊断指标,同时也提示Sp17可能是一种免疫避孕候选抗原疫苗。

精子蛋白17抗体免疫磁性颗粒活性分析及细胞成像研究

目的:制备精子蛋白17(Sp17)抗体免疫磁性纳米颗粒,以期用于卵巢癌的磁共振成像靶向诊断。方法:在偶联剂EDC/NHS作用下,将壳聚糖修饰磁性氧化铁纳米颗粒与抗人Sp17抗体结合,制备抗Sp17抗体免疫磁性纳米颗粒(IMNPs)。透射电镜观察颗粒的形貌特征,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳评价抗体与磁性颗粒的结合效果,ELISA检测免疫磁性颗粒的免疫活性。将IMNPs与转染人Sp17的卵巢癌HO-8910细胞共孵育,进行体外磁共振成像检测。结果:成功实现了抗体与磁性纳米颗粒的偶联,并且IMNPs保持良好的抗体活性。磁共振显示该颗粒成功靶向Sp17阳性的细胞,没有发生明显的非特异吸附。结论:该免疫磁性纳米颗粒特异性良好,可进一步用作卵巢癌的靶向治疗研究。

白介素22调控角质形成细胞表达角蛋白17的研究

目的:研究白介素(IL)-22对培养的人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)表达角蛋白(K)17的影响。方法:对体外培养的HaCaT细胞分别给予不同浓度的IL-22(0～100μg/L)作用24 h,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测K17mRNA表达水平,以酶联免疫吸附测定技术(ELISA法)、蛋白质免疫印记法(Western blot)及免疫荧光染色法检测K17蛋白表达水平的变化。结果:HaCaT细胞经12.5、25.0、50.0、100.0μg/L的IL-22作用后,均出现不同程度的K17表达。与空白对照组的HaCaT细胞相比,12.5μg/L组的mRNA及蛋白表达无明显差异,而25.0、50.0、100.0μg/L组的mRNA及蛋白表达则明显上升(P<0.05),并且随着IL-22浓度增高,K17mRNA及蛋白表达量增多。免疫荧光染色图片显示,随着IL-22浓度的增高,HaCaT细胞胞质中K17蛋白荧光染色增强。结论:IL-22可以剂量依赖方式诱导HaCaT细胞表达K17。

细胞角蛋白17在口腔鳞癌中的表达

目的研究细胞角蛋白17(CK17)在口腔鳞癌中的表达,以期为口腔鳞癌的诊断和预防提供依据。方法分别采用实时定量聚合酶链反应、免疫印迹方法和免疫组化方法检测口腔黏膜上皮体外癌变模型、口腔鳞癌细胞株及30例原发口腔鳞癌标本中的CK17 mRNA及蛋白质的表达。结果与永生化HIOEC细胞相比,CK17 mRNA在HB56和OSC细胞株中表达明显升高,CK17蛋白表达水平在所有细胞株中均有不同程度的升高。口腔鳞癌患者癌组织中CK17的mRNA和蛋白表达水平均显著高于癌旁组织(P<0.01)。结论 CK17表达上调可能与口腔鳞癌的发生、发展有关。

白癜风患者血清前黑素小体蛋白17自身抗体的检测

目的获取重组前黑素小体蛋白17(Pmel 17)并用于检测白癜风患者血清中Pmel 17自身抗体的分布。方法通过RT-PCR从原代黑素细胞中获得人的Pmel 17基因,先后插入克隆载体pMD19-T和表达载体pGEX-4T-1,以构建重组质粒。IPTG诱导Pmel 17蛋白表达后以亲和层析法进行纯化。间接ELISA检测白癜风患者血清中抗Pmel 17自身抗体的阳性率。结果重组质粒经测序,与预期设计完全一致,同时Pmel 17蛋白成功表达和纯化。ELISA检测进展期白癜风患者血清中抗Pmel 17自身抗体阳性率为22%,稳定期白癜风患者阳性率仅为2%,健康对照组未检测到抗Pmel 17自身抗体,进展期和稳定期阳性率差异具有统计学意义。结论成功表达了Pmel 17重组蛋白,证明Pmel 17自身抗体与白癜风的疾病严重程度有一定关系。

人精子蛋白17增强型绿色荧光蛋白共表达卵巢癌细胞模型的建立

目的:建立人精子蛋白17(hSp17)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)共表达的卵巢癌细胞模型。方法:用PCR方法获取hSp17基因片段,HindⅢ/KpnⅠ双酶切、T4 DNA连接酶连接的方法将hSp17基因片段克隆至含报告基因EGFP的真核表达载体pEGFP-N1中,脂质体介导转染卵巢癌细胞HO8910,荧光倒置显微镜观察及Westernblot检测转染细胞中hSp17/EGFP融合蛋白的表达,G418筛选稳定表达的细胞株。结果:酶切和测序结果均证实pEGFP-N1/hSp17重组质粒的构建完全正确。荧光观察与Western blot均证实了hSp17/EGFP蛋白的共表达,且成功筛选出稳定表达的细胞株。结论:成功构建hSp17/EGFP共表达的卵巢癌细胞模型,为研究hSp17异常表达对肿瘤细胞生物学行为的影响,以及hSp17为靶标的肿瘤诊断和生物治疗奠定基础。

精子蛋白17的研究进展

精子蛋白 17(Sp17)为一种睾丸组织特异性蛋白 ,参与精子的顶体反应。然而 ,近年来发现Sp17在正常非睾丸组织和肿瘤组织也有表达。它作为一种免疫避孕的候选抗原以及肿瘤免疫治疗的理想靶分子倍受关注。本文就Sp17的特性、表达与分布、生理学功能及临床研究的新进展进行了综述。