γ干扰素诱导蛋白30基因在系统性红斑狼疮CD4^+T细胞中的表达分析

目的探讨系统性红斑狼疮(system ic lupus erythem atosus,SLE)患者CD4+T细胞mRNA中干扰素诱导蛋白30基因(IP-30)的表达水平与SLE疾病活动度的相关性。方法收集23例SLE患者和10例正常对照人群的临床资料。取外周血用免疫磁珠法分离出CD4+T细胞,抽提RNA并逆转录合成cDNA,运用GLG I方法从LongSAGE标签库中筛选出IP-30,比较该基因在系统性红斑狼疮疾病活动指数(SLEDAI)不同的SLE患者中表达的差异。结果①SLE患者组IP-30的表达量显著高于正常对照(P=0.01,P<0.05)。SLEDAI≥10组和SLEDAI<10组其IP-30的表达量显著高于正常对照(P分别为0.01和0.047),但两组间比较无显著差别(P=0.149)。②SLE有狼疮肾炎组和SLE无狼疮肾炎组相比IP-30表达量有差异(P<0.05)。③IP-30的表达量随SLE的活动水平升高而明显增加,与SLEDAI具有显著的正相关(r=0.830,P<0.01),与补体C3和外周血白细胞数成负相关(r=-0.517,r=-0.424,P<0.05)。结论CD4+T细胞IP-30水平表达升高提示IP-30可能参与SLE的发病,并对SLE活动度的判断和狼疮肾炎的诊断有一定的意义。

猪干扰素γ诱导蛋白30基因表达载体的构建及验证

干扰素γ诱导蛋白30基因(IFI30)能够在特异抗原递呈细胞中组成性表达,在其他细胞中能被IFN-γ诱导表达,IFI30在MHC-Ⅱ限制性抗原加工递呈过程中起关键性作用。为了构建猪IFI30表达载体并验证其在体外细胞表达情况。本试验从猪肺脏组织中扩增出IFI30中长度741bp的CDS区,将其克隆到带有红色荧光的真核表达pEF1a-IRES-DsRed-Express2上,用脂质体转染法转染到Marc145细胞中,用RT-PCR以及Western blot检测其mRNA表达量和蛋白表达量。结果表明,成功构建出猪IFI30表达载体并在Marc145细胞中高效表达。

长角血蜱甘肃株肌钙蛋白基因P27/30的克隆和序列分析

参照GenBank中长角血蜱致病性Okayama株肌钙蛋白P27/30基因的核苷酸序列,设计合成一对引物,从本实验室保藏的干净长角血蜱卵中快速提取总RNA,通过RT-PCR扩增出607 bp的肌钙蛋白基因,将其克隆于PGEM-T-Easy载体,对其进行序列分析,并推导出氨基酸序列,将这一序列与国内外已发表的长角血蜱肌钙蛋白基因进行比较分析。结果表明本实验室保藏的长角血蜱甘肃株与上述已发表的Okayama株核苷酸序列同源性为92.1%,氨基酸同源性为86%。长角血蜱甘肃株与Okayama株、四川孤雌生殖株的发育有一定差异。经RT-PCR分析表明,该基因在长角血蜱的卵、幼蜱、若蜱和饥饿成蜱这几个阶段均有表达。

镰形扇头蜱丝氨酸蛋白酶SP30基因的克隆及原核表达

根据丝氨酸蛋白酶保守性氨基酸序列设计引物,以镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA为模板,经PCR扩增得到SP30基因的保守区,通过5'RACE(rapid amplification of cDNA Ends)和3'RACE技术得到全长基因。将该基因连入原核表达载体pGEX-4T-1,经IPTG诱导纯化得到重组蛋白。以镰形扇头蜱卵、幼蜱、若蜱、成蜱各发育阶段的cDNA为模板进行Real-timePCR实验。结果显示,SP30基因全长1194 bp,开放阅读框长900 bp,编码299个氨基酸,预计蛋白分子质量30 kDa。Real-time PCR分析结果表明,该基因在四个不同的发育阶段均有不同程度的表达。

TIP30在胃癌组织中的表达及其对胃癌血管生成的影响

目的:研究Tat作用蛋白30(Tat-interactive protein 30,TIP30)基因在胃癌组织中的表达及其对胃癌血管生成的影响。方法:运用免疫组织化学方法检测52例胃癌组织及47例癌旁正常组织中TIP30蛋白的表达水平,同时检测CD34标记的微血管密度(microvessel density,MVD)。结果:TIP30在胃癌和癌旁正常组织中的阳性率分别为53.8%和85.1%,两者相比较差异有统计学意义(χ2=11.22,P﹤0.01),TIP30表达水平与患者年龄、性别、病理分化程度及肿瘤大小无关,与有无淋巴结转移及TNM分期有关。胃癌组织和癌旁正常组织中MVD值分别为27.37±2.68和21.87±4.11,两者比较差异有统计学意义(t=7.95,P<0.01),胃癌组织中TIP30表达阳性者较阴性者MVD值显著降低(t=-3.18,P=0.003)。结论:TIP30在胃癌组织中表达降低,其可能通过抑制胃癌血管生成影响胃癌的发生发展。

TIP30在脑星形细胞瘤中表达及意义

目的探讨Tat(transactivator of transcription)结合蛋白30(Tat-interactive protein 30,TIP30)在脑星形细胞瘤发生发展中的作用。方法采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶法(SP)和末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)分别检测69例脑星形细胞瘤和8例正常脑组织中TIP30蛋白表达、增殖细胞核抗原标记指数(PCNA LI)、微血管密度(MVD)和瘤细胞的凋亡指数(AI)。结果 69例脑星形细胞瘤组织TIP30的阳性表达率为49.3%,明显低于正常脑组织100%(P<0.01);TIP30的阳性表达率随星形细胞瘤的病理分级级别的升高而降低(χ2=16.31,P<0.01);TIP30蛋白阳性表达的星形细胞瘤组织中的MVD值(30.08±5.63)和PCNA LI值(22.29±7.15)明显低于TIP30蛋白阴性组的MVD值(47.83±8.27)和PCNA LI值(48.11±7.16)(P均<0.01);TIP30蛋白阳性表达的星形细胞瘤组织中的AI值(6.66±1.03)明显高于TIP30蛋白阴性组的AI值(4.02±1.09)(P<0.01)。结论星形细胞瘤中TIP30蛋白表达下降,可能是通过促进新生血管形成、瘤细胞增生和抑制凋亡作用参与了脑星形细胞瘤的发生发展过程。