耐碱性蛋白A色谱配基的构建及性能评价

提出了优化分子内作用力提高蛋白A(SpA)的结构域Z分子稳定性的方法,构建了突变结构域Z'和Z''。圆二色光谱分析结果表明,突变结构域具有与结构域Z一致的特征峰,但突变结构域Z'中α-螺旋含量明显高于突变结构域Z''。在pH 6.0下,突变结构域Z'的热转变温度(T_m)较结构域Z提高了3.9℃,而突变结构域Z''的Tm值仅提高了1.6℃。这表明,突变结构域Z'中第12位引入疏水性更大的Ile残基提高了结构域分子的稳定性。色谱介质耐碱性实验结果表明,突变结构域Z'具有更好的耐碱性,其耐碱性在突变结构域Z'四串联体融合蛋白中得到了进一步提升。研究工作为Sp A色谱配基的分子改造提供了新思路。