蝮蛇毒蛋白C激活物改善急性心肌梗死大鼠心功能的机制研究

目的:探讨皖南产蝮蛇毒(AHV)蛋白C激活物(protein C activator,PCA)改善急性心肌梗死大鼠心功能作用与机制。方法:Sprague-Daw-ly大鼠60只,随机分为假手术(SH)组、心肌梗死模型(MI)组、PCA低、中、高剂量组(0.5、2、8mg/kg)、阳性对照组(阿司匹林5mg/kg),每组10只。通过结扎冠状动脉前降支建立急性心肌梗死(AMI)模型,采用Medlab生物信号处理系统监测大鼠心脏血流动力学变化。Westernblot检测心肌基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达;光镜观察心肌组织学改变。结果:与心肌梗死组比较,PCA高、中剂量大鼠左室内压最低值(LVDP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室压力最大上升速率(+dp/dtmax)、左心室压力最大下降速率(-dp/dtmax)明显升高(P<0.05),MMP-9的蛋白表达下降(P<0.05)。病理观察显示PCA干预组较梗死模型组炎症细胞浸润显著减轻,梗死面积缩小。结论:蝮蛇毒PCA组分可以限制急性心肌梗死早期心肌梗死扩大,有效改善心脏血液动力学,抑制MMP-9表达,对急性心肌梗死后心室重构有一定的干预作用。

蝮蛇毒蛋白C激活物对家兔实验性DIC的干预作用

目的:观察蝮蛇毒蛋白C激活物(PCA)对家兔实验性弥散性血管内凝血(DIC)的干预作用并探讨其作用机理。方法:健康青紫蓝家兔24只随机分为:正常对照组、DIC组、PCA干预组(n=8),采用耳缘静脉注射兔脑粉浸液建立DIC模型,检测各组的凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(Fbg)含量和血小板计数(PLT)。结果:与正常对照组相比,DIC组PT、APTT延长的百分率、TT缩短的百分率、Fbg、PLT显著升高(P<0.01);PCA干预组PT、APTT延长的百分率,TT缩短的百分率与Fbg、PLT降低的百分率均明显降低(P<0.01)。结论:蝮蛇毒PCA对家兔实验性DIC有一定的防治作用,其机制可能与PCA抗凝、抑制血小板聚集有关。

蝮蛇毒蛋白C激活物对大鼠心肌微血栓形成的抑制作用

目的:观察蝮蛇毒蛋白C激活物(PCA)对大鼠心肌微血栓形成的影响,并进一步探讨其抗凝机制。方法:取健康雄性SD大鼠48只,随机分为假手术(SH)组、微血栓(MI)组、MI+PCA组和PCA组,其中MI+PCA组又分为1mg/kg、3mg/kg、6mg/kg三个剂量组,每组8只。以月桂酸钠复制大鼠心肌微血栓模型,测定并比较各组血浆中PAF、ET-1、vWF、MDA的含量及SOD的活性;心肌石蜡切片,常规HE染色,光镜观察;观察心肌梗死范围。结果:MI+PCA(3mg/kg)组及MI+PCA(6mg/kg)组大鼠血浆中PAF、ET-1、vWF、MDA的含量较MI组显著降低(P<0.05);病理亦显示MI+PCA(3mg/kg)组及MI+PCA(6mg/kg)组心肌无微血管血栓形成、无梗死;PCA组与SH组各指标无明显差异。结论:PCA可有效抑制微血栓形成,其除了可通过激活蛋白C系统抗凝外,保护血管内皮亦可能是其另一抗凝途径。

蝮蛇毒蛋白C激活物对败血症大鼠心脏血流动力学的作用研究

目的:研究蝮蛇毒蛋白C激活物(PCA)组分对败血症大鼠心脏血流动力学的影响。方法:取SD雄性大鼠24只随机分成对照组、PCA组、LPS组和LPS+PCA组四组,对照组尾静脉注射生理盐水,PCA组尾静脉注射蝮蛇毒蛋白C激活物,LPS组腹腔注射LPS(10 mg/kg,4 h)的方法建立败血症休克的实验动物模型,在建立败血症的实验动物模型的基础上,尾静脉注射PCA(0.4 mg/kg)为LPS+PCA组,每只大鼠均于药后30 min时运用Medlab生物信号采集处理系统记录平均动脉压(MAP)和左心室功能指标,并测定心肌中乳酸脱氢酶(LDH)活性、诱导性一氧化氮合酶(i NOS)活性及心肌病理切片。结果:PCA能明显减轻LPS诱导的心功能受损,并抑制心肌LDH的释放和i NOS活性的升高(P<0.05)。结论:PCA对败血症大鼠心脏血流动力学有明显的改善作用,其机制可能与通过保护血管内皮功能,改善微循环,稳定心肌酶活性和膜相结构等途径有关。

蝮蛇毒蛋白C激活物对大鼠在体心肌缺血再灌注损伤的干预作用

目的:在大鼠在体心肌缺血再灌注模型上进一步证实蝮蛇毒蛋白C激活物(PCA)对缺血再灌损伤心肌的保护作用。方法:麻醉大鼠,结扎左冠状动脉30 min后再灌注90min。结扎前10 min静脉注射PCA。观察PCA对大鼠心肌酶学、心肌梗死面积和脂质过氧化的影响。结果:PCA能有效缩小大鼠心肌梗死范围,降低血清乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)活性;能显著提高大鼠心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性,降低心肌和血清脂质过氧化代谢产物丙二醛(MDA)含量。结论:蝮蛇毒蛋白C激活物对大鼠缺血再灌注损伤心肌有保护作用。

皖南蝮蛇毒蛋白C激活物的急性毒性作用的研究

目的:探讨蛇毒蛋白C激活物(protein Cactivator,PCA)对大、小鼠的急性毒理反应。方法:大鼠采用上下剂量增减法,小鼠采用半数致死量法,观察实验动物症状、体征、死亡时间和累积死亡率。结果:PCA尾静脉注射大鼠(剂量17.5～175mg/kg)、小鼠(剂量为6.25～11mg/kg)的中毒表现为不同程度的口鼻泡沫状出血、呼吸困难、心率加快、走路不稳、蜷缩、昏厥性抽搐;大、小鼠尾静脉注射PCA的LD50及其95%可信限分别为29.57(17.5～55)mg/kg和8.05(7.55～8.54)mg/kg;大体解剖可见双肺有片块状出血,病理镜检显示出血主要累及肺泡、支气管等。其他器官未见明显异常。结论:皖南蝮蛇毒PCA的毒性主要是抗凝过度导致的出血,肺出血引起的急性呼吸衰竭是实验动物死亡主要原因。

蝮蛇毒蛋白C激活物对内毒素性离体大鼠心脏功能的影响

目的研究蝮蛇毒蛋白C激活物(PCA)组分对大鼠内毒素(LPS)性心肌损伤作用的影响。方法取SD雄性大鼠32只随机分成正常对照组、LPS组、PCA组和PCA+LPS组,用Krebs-Henseleit(K-H)液对大鼠离体心脏行主动脉逆灌。在相应时点记录HR、LVSP、LVEDP、LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax的变化,并测定冠脉流出液中的超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。结果PCA明显减轻LPS诱导的心功能改变并抑制心肌SOD活性降低和MDA的升高(P<0.01)。结论PCA对内毒素诱导的心肌损伤改善作用明显,其机制可能是通过保护血管内皮功能,改善微循环,稳定心肌酶活性和膜相结构等途径有关。

蝮蛇毒蛋白C激活物对败血症大鼠血小板聚集性的影响

目的观察蝮蛇毒蛋白C激活物(PCA)对败血症大鼠血小板聚集性的影响。方法将健康雄性SD大鼠30只,随机分为3组,即正常对照(NC)组,内毒素(LPS)模型组和PCA预处理组,每组10只。采用大剂量腹腔注射LPS复制大鼠败血症模型,观察和对比各组大鼠的临床表现、血小板聚集性和凝血酶原时间(PT)。结果与NC组相比较LPS模型组可使血小板聚集性显著下降(P<0.01),PT明显延长(P<0.01);PCA预处理组与LPS模型组相比较血小板聚集性明显升高(P<0.01),PT较LPS模型组明显缩短(P<0.01),而与NC组比较统计学差异无显著性,同时PCA预处理组可使大鼠临床症状较LPS模型组明显减轻。结论蝮蛇毒蛋白C激活物(PCA)可明显改善败血症大鼠的血液低凝状态。

蝮蛇毒蛋白C激活物抗凝机制的研究

目的 研究蝮蛇毒纯化蛋白C激活物 (PCA)的抗凝机制。方法 测定PCA对正常人混浆KPTT、PT、TT的影响 ;对白兔的KPTT、PT、TT和Fgn的影响。 结果 PCA在 0 1mg·L-1时对正常人混浆KPTT可明显延长 ,但PT和TT不受影响 ,当它的浓度增到 2 0 0mg·L-1,PT也可延长 ,但TT依然无明显变化 ;PCA可明显延长白兔的KPTT。结论 PCA在低浓度时优先抑制凝血系统第一阶段内凝途径 ,在高浓度时也妨碍外凝途径或共同途径 ,具有体内抗凝作用。

蝮蛇毒蛋白C激活物对凝血系统的影响

目的研究蝮蛇毒纯化蛋白C激活物(PCA)的抗凝机制。方法测定PCA对正常人混浆KPTT、PT、TT的影响,对血液凝血活酶生成试验(BTGT)及PA二期法的影响以及对白兔的KPTT和Fgn的影响。结果PCA在最终浓度为0.025mg/L时对正常人混浆KPTT可明显延长,但PT和TT不受影响;当它的浓度增加到50mg/L,PT也可延长,但TT依然无明显变化;最终浓度为0.0125mg/L时,血液凝血活酶生成明显受抑制;当它的浓度增加到2.5mg/L,凝血酶生成显著减少,但抗凝血酶时间始终无明显变化;PCA可明显延长白兔的KPTT。结论PCA在低浓度时首先抑制凝血系统第一阶段内凝途径,在高浓度时也妨碍外凝途径或共同途径,BTGT和PA二期法比KPTT和PT敏感;PCA具有体内抗凝作用。

蛇毒蛋白C激活物的初步研究

目的 研究蝮蛇毒蛋白 C激活物的分离纯化与理化性质。方法 经 DE5 2 -纤维素、CM-Sphadex C-5 0、G-75柱层析 ,从安徽芜湖产蝮蛇 ( Agkistrodon halys)蛇毒中纯化一种均一的蛋白 C激活物 ( PCA)。结果 SDS-PAGE测定分子量约为 1 5 5 0 0 Da,IEF-PAGE测定等电点为 4 .8。它能使人血浆的 KPTT明显延长 ,显示出强烈的抗凝活性。通过中和试验与显色肽定量实验表明 ,它能特异性激活蛋白 C,并且激活作用与剂量呈线性关系。

蝮蛇毒蛋白C激活物对全脑缺血再灌注损伤大鼠血-脑屏障通透性的影响

目的探讨蝮蛇毒蛋白C激活物(PCA)对全脑缺血再灌注损伤大鼠血-脑屏障通透性的影响和可能的机制。方法以关闭和重开放双侧颈总动脉和基底动脉来复制大鼠全脑缺血再灌注损伤模型。按照体重将SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组和低、中、高3个剂量实验组,每组10只。于造模前,低、中、高3个剂量实验组分别尾静脉注射PCA 1,3,6 mg·kg-1,假手术组和模型组给予等量0.9%NaCl。用试剂盒法检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;以酶联免疫吸附法检测大鼠脑组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1);以伊文思蓝(EB)染色法观察大鼠血脑-屏障通透性。结果假手术组、模型组和低、中、高3个剂量实验组的TNF-α分别为(5.57±1.81),(25.37±1.96),(15.32±1.94),(13.31±1.79)和(10.47±1.71)pg·mg-1;这5组的ICAM-1分别为(56.80±5.96),(105.80±10.23),(76.60±5.56),(63.50±8.34)和(59.10±8.36) ng·mL-1;这5组的EB含量分别为(0.55±0.18),(1.61±0.19),(0.99±0.22),(0.72±0.18)和(0.54±0.09)μg·g-1。上述指标:模型组与假手术组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);低、中、高3个剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01),且随着PCA浓度的增加,效果越明显。结论 PCA可降低脑缺血再灌注损伤大鼠血-脑屏障的通透性,其机制可能与抑制炎症细胞因子、下调细胞黏附分子和减轻炎症反应有关。

五步蛇毒蛋白C激活物对人脐静脉血管内皮细胞组织因子表达的影响

目的观察五步蛇毒蛋白C激活物(PCA)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的保护作用,并分析其对组织因子(TF)表达的影响。方法常规培养HUVEC,实验分为空白对照组、脂多糖(LPS)组、PCA(0.625、1.25、2.50μg·mL^(-1))组和PCA+LPS组。MTT法检测HUVEC活性,ELISA检测HUVEC培养上清中TF分泌量,免疫荧光染色检测核转录因子(NF)-κB是否被激活-核转运。结果 PCA对HUVEC活性和形态无显著影响(P>0.05)。与空白对照组,LPS组细胞活性显著下降(P<0.01);而LPS+PCA组细胞活性显著高于LPS组(P<0.05)。LPS组TF表达量和NF-κB表达均显著高于空白对照组(P<0.01);LPS+PCA组与LPS组比较TF表达量和NF-κB表达降低(P<0.01)。结论 PCA可降低HUVEC分泌TF,减少LPS对HUVEC的损伤作用,其可能与抑制NF-κB通路的活化有关。

影响五步蛇毒蛋白C激活剂酰胺酶活性的实验因素

目的:探讨可能影响皖南地区五步蛇毒蛋白C激活物(PCA)酰胺酶活性的实验因素。方法:分别采用发色底物法和APTT法检测皖南地区五步蛇毒PCA在不同实验条件下的酰胺酶活性。结果:当实验温度为37℃时该PCA活性最稳定,而温度升高或降低均会抑制其酰胺酶活性(P<0.05);该PCA在pH值为7.0时活性最稳定,偏酸或偏碱则均会明显抑制其活性(P<0.05);但一定浓度范围内的Na+、K+、枸橼酸钠等对其活性无明显影响(P>0.05)。结论:五步蛇毒PCA是一种效价较高、影响因素较少的蛋白C活化试剂。

皖南蝮蛇毒PCA活化血浆蛋白C的特性研究

目的:研究皖南蝮蛇毒蛋白C激活物(protein C activator,PCA)活化血浆蛋白C(protein C,PC)的特性。方法:家兔待检血浆分别与不同浓度的PCA混合后,行PT及APTT测定;随后利用PC活性检测试剂盒,检测不同浓度PCA对PC活性的影响;最后将最适浓度PCA分为PCA组、PCA血浆组、PCA血浆加PC抗体组,并应用发色底物法配合酶标仪对各组活化PC的能力进行鉴定。结果:与正常血浆相比,低剂量PCA即可显著延长APTT(P<0.01),随着PCA浓度的增加PT也显著延长(P<0.01);经检测0.3 mg/ml浓度的PCA具有最适PC活化特性,与阳性对照Protac量效相当(P>0.05))。结论:皖南蝮蛇毒PCA具有与Protac效应相当的活化PC特性,提示蛇毒PCA具有一定的临床应用前景。

蛇毒PCA改善冠脉微血栓大鼠血液流变学的机制研究

目的:探讨皖南产蝮蛇毒(AHV)蛋白C激活物(PCA)改善冠脉微血栓(CAM)大鼠血液流变学的作用机制。方法:Sprague-Dawley大鼠50只,随机分为假手术组、CAM组、低、中、高剂量PCA[CAM+PCA(0.5mg/kg)、CAM+PCA(2 mg/kg)、CAM+PCA(8 mg/kg)]干预组,每组10只。通过从主动脉根部直接向左心室注入月桂酸钠1.0 mg/kg(浓度10 g/L)以建立大鼠冠脉微血栓模型,采用血栓弹力仪系统(TEG)描计血栓弹力图,测定各组血浆中内皮素-1(ET-1)、P-选择素(P-selectin)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平;Western blotting检测心肌组织中P-selectin和肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白表达;光镜观察心肌组织学改变。结果:与模型组比较,PCA大剂量干预组凝血时间和血凝块形成时间延长,Alpha角度、最大幅度和血凝指数值减小(P<0.05),血浆CK-MB、LDH、AST、ET-1和P-selectin的水平降低(P<0.05),心肌组织P-selectin和TNF-α的蛋白表达下降(P<0.05)。病理观察显示中、高剂量PCA干预组大鼠冠脉未形成微血栓。结论:蝮蛇毒PCA组分可以限制冠脉微血栓的形成,降低血浆ET-1和P-selectin的含量,抑制心肌组织P-selectin和TNF-α表达,改善微血栓后血液流变学变化,有效保护心肌细胞。

蝮蛇蛇毒PCA对实验性心肌梗死大鼠血凝状态的影响

目的:探讨蝮蛇蛇毒蛋白C激活剂(PCA)对心肌梗死发生后血液凝固性的影响及其机制。方法:SD大鼠24只,随机分为对照组、心肌梗死模型组和PCA实验组。动物麻醉后,从心尖部向左心室注射月桂酸钠(1.0mg/kg)复制心肌梗死(AMI)模型。实验组大鼠于造模前由舌下静脉注射PCA(1.0mg/kg)预处理,由Medlab生物信号采集系统监测心电变化。于造模后30min从颈总动脉取血样2ml,以TEG5000型血栓弹力仪测量各样本血液的凝血时间、血凝块形成时间、Alpha角度、凝血最大幅度和凝血指数等参数。结果:模型组大鼠血样的R值较对照组明显缩短(P<0.01),CI值>+3.0,而Alpha角度变化不大;LY30%值明显增大,但小于7.5%。PCA实验组大鼠血样的R值较模型组明显延长,MA值减小(P<0.05),LY30%、A值、CI值明显减少(P<0.01)。结论:心肌梗死大鼠血液表现显著高凝状态,蛇毒PCA组分的预处理可以减轻这一过程。

蝮蛇毒PCA对脑梗死大鼠PC活性变化的影响及其机制

目的探讨脑梗死大鼠血浆蛋白C(PC)活性变化与蝮蛇毒蛋白C激活物(PCA)对其的影响及其可能机制。方法将SD雄性大鼠32只,随机分为正常对照组(C组)、脑梗死组(CI组)、阳性对照组(UK组)和实验组(PCA组),每组8只。采用血管内直接线栓闭塞法制备大鼠缺血性脑梗死模型,UK组和PCA组分别静脉注射UK和PCA。实验1h后于颈总动脉取血,以发色底物法检测血浆PC活性;测定APTT值;观察血浆PC活性和凝血功能的变化。24h后处死大鼠,开颅取脑TTC染色且行HE染色。结果 CI组大鼠血浆PC活性明显低于C组(P<0.01),APTT无明显改变(P>0.05);PCA组PC活性较CI组明显升高(P<0.01)。病理切片HE染色显示,CI组神经细胞数明显减少,形态发生改变,形状不规则,细胞固缩、深染;UK组与PCA组注射药物后脑梗死病变区表现近似,与正常对照组比较无明显变化。结论缺血性脑梗死与血浆PC活性显著降低有关;PCA可在一定程度上恢复和提高PC的活性,降低脑梗死发生的风险。

蛇毒有效成分治疗心肌梗死的研究进展

蛇毒中富含多种对人体治疗疾病有利的蛋白质及相关活性物质。本文介绍了目前蛇毒中对治疗心肌梗死的一些有效成分,分析了去整合素、蛇毒生长因子、尖吻蝮蛇毒血浆蛋白C激活物PCA、蛇毒去纤溶酶、库尼茨型缓蚀剂、血栓素2(Lebetin2)等物质从不同角度对心肌梗死的治疗作用,以及蛇毒对心肌梗死的诊断及治疗取得的一些成果,旨在明确蛇毒对心肌梗死有效成分的作用机制,为心肌梗死的治疗提供新的研究方向。