苯丙酸诺龙对烧伤大鼠肝脏白蛋白与创面前胶原蛋白mRNA表达的影响

目的 研究苯丙酸诺龙对烧伤大鼠肝细胞白蛋白与创面成纤维细胞前胶原蛋白 m RNA表达的影响。方法 采用随机对照设计 ,使用苯丙酸诺龙治疗 2 0 %体表面积深 度烫伤大鼠 ,分别于伤后第 4、7、14、2 1d处死 ,留取肝组织与创面肉芽组织 ,RNA一步法分别提取二者总 RNA,RT- PCR一步法扩增检测白蛋白与 α1( )前胶原蛋白 m RNA表达水平。结果 实验组肝脏白蛋白 m RNA与肉芽组织 αl( )前胶原蛋白 m RNA表达水平明显提高 ,在各时间点均明显高于同期对照组 (P<0 .0 5 ) ,伤后第 7、14 d为 m RNA快速增长时期 (P<0 .0 1)。结论 苯丙酸诺龙能有效上调肝脏白蛋白 m RNA与肉芽 α1( )前胶原蛋白 m RNA的表达水平 ,有利于蛋白合成与逆转负氮平衡 ,从整体与局部促进创面愈合。

乳腺癌患者外周血中角蛋白19 mRNA,乳腺小粘蛋白mRNA和泌乳素诱导蛋白mRNA的检测及其临床意义

目的:研究乳腺癌患者外周血中角蛋白(CK)19mRNA,乳腺小粘蛋白(SBEM)mRNA和泌乳素诱导蛋白(PIP)mRNA的表达,并探讨三者在微转移检测中的意义。方法:用RT-PCR检测乳腺癌患者50例、结直肠癌20例、乳腺良性肿瘤21例、健康者20例外周血中的CK19mRNA、SBEM mRNA、PIP mRNA。结果:CK19mRNA在乳腺癌组的阳性率(36.0%)明显高于乳腺良性肿瘤组(0.0%,P<0.05)与健康者(0.0%,P<0.05)。SBEM mRNA、PIP mRNA在乳腺癌组的阳性率(28.0%、18.0%)明显高于其它3组(0.0%,P<0.05)。联合检测3个基因,可将阳性率提高到62.0%。结论:乳腺癌患者外周血中的SBEM mRNA、PIP mRNA均可能作为微转移标志物;而CK19mRNA作为乳腺癌微转移标志物的特异性尚待探讨;联合检测三者可提高乳腺癌外周血微转移的检出率。

维生素A、D对肉鸡血清钙结合蛋白浓度与胫骨和十二指肠组织中钙结合蛋白mRNA表达的影响

本试验主要研究不同的维生素A、D水平及其相互作用对肉鸡血清钙结合蛋白(CaBP)浓度与十二指肠和胫骨组织中CaBP mRNA表达的影响。采用4×4完全随机试验设计,选择8日龄健康AA雄性肉鸡384只按体重一致的原则分为16个日粮组,每组3个重复,每个重复8只鸡,试验期5周。维生素A设4个添加水平分别为1500、3000、15000和45000IU/kg,维生素D设4个添加水平分别为500、1250、2500和5000IU/kg。结果表明:1)随着日粮维生素A添加水平的增加,肉鸡血清CaBP含量、十二指肠和胫骨组织中CaBPmRNA表达量均呈现一次线性降低趋势(P=0.091,P=0.012,P=0.110),其中以45000IU/kg维生素A组最低;2)随着日粮维生素D添加水平的增加,肉鸡血清CaBP含量和十二指肠组织中CaBP mRNA的表达呈现一次线性增加趋势(P=0.310,P=0.140),其中以5000IU/kg维生素D组最高;3)维生素A、D相互作用对肉鸡血清CaBP浓度与十二指肠和胫骨组织中CaBP mRNA的表达均无显著的影响(P>0.05)。试验结果提示,过量维生素A引起肉鸡骨骼代谢异常的机理是过量维生素A抑制了肉鸡组织的CaBP mRNA表达,尤其对十二指肠组织的CaBP mRNA的表达有显著的抑制作用,引起血清CaBP浓度的降低,进而引起钙磷代谢发生紊乱。过量维生素A对肉鸡组织CaBP mRNA表达的抑制作用可能与过量维生素A对维生素D的拮抗作用有关。

奶牛乳腺上皮细胞的不同培养方法比较及激素和细胞因子对β-酪蛋白mRNA表达的诱导

本试验旨在建立一种高效的奶牛乳腺上皮细胞培养方法,并研究不同激素和细胞因子对其表达β-酪蛋白mRNA的诱导作用。分别采用组织块培养法和机械破碎法培养奶牛乳腺上皮细胞,利用成纤维细胞和乳腺上皮细胞对胰酶的敏感性不同,对获得的细胞进行纯化。通过细胞计数法测定纯化细胞的生长曲线,通过免疫荧光组织化学染色法检测角蛋白18的表达,通过实时定量PCR法检测8种不同激素和细胞因子组合培养液诱导细胞表达β-酪蛋白mRNA的效果。结果表明:通过机械破碎法可以分离得到增殖旺盛的奶牛乳腺上皮细胞,与组织块培养法相比,具有细胞迁出速度快等优点。细胞生长曲线呈典型的"S"型。在纯化的乳腺上皮细胞及第20代乳腺上皮细胞中都检测到角蛋白18的表达。100 ng/mL类胰岛素生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)显著提高了乳腺上皮细胞中β-酪蛋白mRNA的表达(P<0.05)。由结果可知,本试验采用的机械破碎法是一种高效的奶牛乳腺上皮细胞培养方法,100 ng/mL IGF-Ⅰ对细胞中β-酪蛋白mRNA表达的诱导效果最好。

骨髓间充质干细胞移植与电针刺激联合治疗对大鼠脑出血后生长相关蛋白mRNA表达的影响

目的：探讨电针刺激对骨髓间充质干细胞（BMsCs）移植治疗脑出血大鼠神经生长相关蛋白（GAP-43）mRNA表达的影响。方法：将培养的BMSCs和生理盐水分别移植入脑出血大鼠纹状体内，移植BMSCs的大鼠，其中一半再接受电针刺激百会穴和大椎穴，行H—E染色和GAP-43原位杂交检测。结果：从移植后3d起，BMSCs组脑组织病理改变较生理盐水组改善明显，联合电针后又较BMSCs组改善明显。GAP-43原位杂交检测显示，各组阳性细胞在移植后1d开始增多，7d达高峰，随后下降。BMSCs组阳性细胞较NS组多，联合电针后在5～14d，又较单纯BMSCs组多。结论：电针刺激上调BMSCs移植治疗脑出血大鼠GAP-43mRNA的表达，为电针联合BMSCs移植治疗脑出血的神经保护机制提供实验依据。

人乳头状瘤病毒持续感染状态下E6、E7蛋白mRNA在宫颈癌不同分期的表达结果

目的探讨人乳头状瘤病毒（HPV）持续感染状态下E6、E7蛋白mRNA在宫颈癌不同分期的表达。方法选择2012年8月至2015年8月该院收治的宫颈癌患者91例。TNM分期为Ⅰ期32例,Ⅱ期29例,Ⅲ期30例。另选同期该院体检的42例宫颈慢性炎性患者进行对照。所有患者宫颈组织标本实施超薄液基细胞学检查（TCT）,并做HPV E6/E7mRNA及HPV DNA检测,比较各种方法的检测结果,分析HPV E6/E7mRNA与宫颈癌分期的相关性及与HPV DNA检测的一致性。结果慢性炎性HPV DNA阳性检出率较HPV E6/E7mRNA更高,而宫颈癌Ⅰ~Ⅲ期的HPV E6/E7mRNA阳性检出率更高,但差异无统计学意义（P〉0.05）。随着宫颈病变程度增加,HPV E6/E7mRNA及HPV DNA的相对拷贝值均逐渐增大,不同宫颈癌分期的患者HPV E6/E7mRNA及HPV DNA的相对拷贝值差异均有统计学意义（P〈0.05）。HPV E6/E7mRNA阳性检出率及相对拷贝值与宫颈癌分期均呈正相关,且与HPVDNA检测具有较好的一致性。结论HPV持续感染状态下E6、E7蛋白mRNA的表达与宫颈癌不同分期有关,HPV E6/E7mRNA检测有助于早期判断宫颈癌病情进展,具有临床价值。

肝硬化患者外周血单个核细胞中白蛋白mRNA的表达与病变进展的关系

目的:研究肝硬化患者外周血单个核细胞中白蛋白mRNA表达与病变进展的关系。方法:采用实时荧光定量PCR检测肝硬化患者血清中HBV DNA含量。采用逆转录巢式PCR分别检测代偿性肝硬化、失代偿性肝硬化和健康人外周血单个核细胞中白蛋白mRNA的表达。结果:37例肝硬化患者中21例为代偿期,16例为失代偿期。代偿期肝硬化患者血清HBV DNA阳性率为67%(14/21),HBV DNA含量为(4.3±2.1)×106copies/mL;外周血单个核细胞白蛋白mRNA阳性率为14%(3/21)。失代偿期肝硬化患者血清HBV DNA阳性率为88%(14/16),HBV DNA含量为(5.1±3.4)×107copies/mL;外周血单个核细胞白蛋白mRNA阳性率为56%(9/16)。20例健康人外周血单个核细胞中的白蛋白mRNA阳性率为5%(1/20)。肝硬化代偿期和失代偿期患者外周血单个核细胞中的白蛋白mRNA阳性率差异有显著性(P<0.01)。结论:HBV DNA与肝硬化患者肝脏病变进程密切相关,外周血单个核细胞中的白蛋白mRNA表达与肝脏损害相关,二者可作为肝硬化病情进展的评价指标。

溶石颗粒剂对结石模型大鼠肾骨桥蛋白mRNA表达的影响

目的通过测定用药前后肾脏骨桥蛋白(osteopontin,OPN)mRNA含量的变化,阐明民间验方溶石颗粒剂治疗肾结石的作用机制。方法采用乙二醇、氯化胺法致大鼠肾结石,同时每天一次ig给予溶石颗粒剂5.8,11.6,17.4g.kg-1,实验全程21d。每7d做以下测定:血标本测定尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、钙和磷含量;尿标本以EDTA法测定钙含量,比色法测定草酸含量;肾组织HE染色,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测大鼠肾骨桥蛋白mRNA的表达。结果模型组大鼠肾OPN mRNA的表达明显增加,与溶剂对照组相比(P<0.01),其中21d模型组OPN mRNA的表达最高,为溶剂对照组的4倍;溶石颗粒剂各剂量组均能明显抑制大鼠肾结石模型OPN mRNA的表达(P<0.05),且呈现明显的量效关系;溶石颗粒剂各剂量组能减轻大鼠肾脏草酸钙结晶程度,显著降低大鼠尿钙和草酸含量(P<0.01)。结论溶石颗粒剂可以抑制大鼠肾结石模型中OPN mRNA的表达。

门静脉血白蛋白mRNA检测在肝癌术后肝内转移监测中的意义

【目的】通过检测门静脉血中白蛋白mRNA的表达,探究其在肝癌术后肝癌肝内转移过程中的意义。【方法】采用RT-PCR方法检测32例肝癌患者(其中单发大肝癌17例、多发大肝癌8例、小肝癌7例)门静脉血中白蛋白mRNA的表达,9例非肝病对照者门静脉血中白蛋白mRNA的表达。【结果】①17例单发大肝癌中有9例白蛋白mRNA的表达呈阳性,8例多发大肝癌中有7例白蛋白mRNA的表达呈阳性,7例小肝癌中有1例白蛋白mRNA的表达呈阳性;②17例门静脉血中白蛋白mRNA表达呈阳性者中有16例在术后3年内出现肝内转移。【结论】门静脉血中自蛋白mRNA表达呈阳性患者较门静脉血中白蛋白mRNA表达呈阴性患者出现术后肝内转移几率高。

死后不同时间大鼠心肌膈肌β肌动蛋白mRNA的检测

目的探讨死后不同时间心肌和膈肌β肌动蛋白mRNA(β-actin mRNA)的降解变化。方法大鼠断颈处死后置于21℃的温度控制系统,采用RT-PCR技术检测大鼠心肌和膈肌组织-βactin mRNA在死后即刻至12d的变化,并对电泳图像进行半定量分析。结果在死后即刻,以及保存2,4,6,8,10,12d的大鼠心肌组织样本中均可检测到β-actin mRNA,而膈肌组织仅在死后即刻和保存2,4,6d的样本中检测到-βactin mRNA;-βactin mRNA的扩增产物在死后12d内呈下降趋势。结论RT-PCR技术检测大鼠心肌和膈肌组织中的β-actin mRNA,其在死后12d内的降解呈现一定规律。

板蓝根有效部位F_(022)对脂多糖刺激小鼠组织膜结构伸展刺突蛋白mRNA表达的影响

目的探讨板蓝根抗内毒素活性部位F022对脂多糖(LPS)刺激小鼠组织膜结构伸展刺突蛋白mRNA(moesin mRNA)表达的影响。方法实验前1周用卡介苗腹腔注射小鼠0.2 mL.(20 g)-1,30只小鼠平分为5组,药物实验组分别灌胃给予1.00%,0.50%和0.25%F022液0.4 mL.(20 g)-1,阴性对照组灌胃给予1.00%F022液0.4mL.(20 g)-1,LPS模型组灌胃给予同等量0.9%氯化钠溶液。1.5 h后重复给药1次。第2次给药后30 m in,药物实验组、LPS模型组小鼠尾静脉注射LPS 0.2 mL.(20 g)-1,9 h后小鼠乙醚麻醉,取肝、脾、肾组织作moesin mRNA原位杂交处理,显微镜下观察胞浆被染色情况。结果组织胞浆着色呈棕黄色者为阳性。LPS可致小鼠肝、肾、脾组织moesinmRNA表达增加,而预先给予板蓝根F022部位者moesin mRNA表达被抑制,且有剂量依赖特征。结论板蓝根F022部位对脂多糖致小鼠肝、肾、脾组织moesin mRNA表达有抑制作用。

苯丙酸诺龙对烧伤后α1(Ⅰ)型前胶原蛋白mRNA表达影响的实验研究

目的 探讨苯丙酸诺龙对烧伤后成纤维细胞 α1( )型前胶原蛋白 m RNA表达的影响及其作用机制。 方法 Wistar大鼠 32只 ,制成 2 0 % TBSA深 度烧伤模型 ,随机分为苯丙酸诺龙治疗 (NP)组和对照组 ,于 4、7、14和2 1天分别取创面肉芽组织 ,测定其成纤维细胞中雄激素受体及 α1( )型前胶原蛋白 m RNA含量 ,分析比较两组间成纤维细胞雄激素受体和α1( )型前胶原蛋白 m RNA的表达及其相关关系。 结果 NP组在 7、14和 2 1天α1( )型前胶原蛋白 m RNA的表达均高于同期对照组 ,两组间比较有统计学意义 (P<0 .0 5 )。 NP在 4、7、14和 2 1天成纤维细胞雄激素受体的表达均明显高于同期对照组 ,有统计学意义 (P<0 .0 5 )。雄激素受体的表达与胶原蛋白基因的表达之间有相关关系 ,且有统计学意义。 结论 NP能促进 型前胶原蛋白 m RNA和成纤维细胞雄激素受体的表达 ,二者间存在正相关关系 ,NP在转录水平促进胶原蛋白的合成 ,这种作用与改变成纤维细胞雄激素受体的含量有关。

CD2相关蛋白mRNA在大鼠阿霉素肾病模型中的表达

目的观察CD2相关蛋白(CD2AP)mRNA在大鼠阿霉素肾病模型中的表达,探讨其在蛋白尿发生发展过程中的作用。方法建立大鼠阿霉素肾病模型,应用光镜、电镜观察不同时期(第2、4、6、8周末)肾组织的病理改变,并采用半定量RTPCR的方法,检测大鼠肾皮质中CD2APmRNA的表达。结果阿霉素注射后:(1)大鼠24h尿蛋白量逐渐增加,第2、4、6、8周末分别为(144.5±16.4)、(250.0±45.5)、(440.1±62.1)和(626.5±94.2)mg/24h,均显著高于正常对照组(24.3±6.5)mg/24h(P<0.001);(2)大鼠肾皮质CD2APmRNA的表达在第4、6、8周末分别达到正常对照组的1.7倍、2.5倍和1.9倍。CD2APmRNA的表达与尿蛋白量呈正相关(r=0.58,P<0.01)。结论阿霉素肾病模型大鼠肾皮质CD2APmRNA的表达与大鼠蛋白尿的发生发展具有一定的相关性。

重组人生长激素对肝硬化大鼠IGF-1、清蛋白mRNA的影响

目的 :探讨重组人生长激素 (rhGH)对肝硬化后蛋白质代谢的影响。 方法 :正常大鼠 (A组 )、肝硬化 (B组 )、肝硬化大鼠使用rhGH(C组 ) ,每组各 30只 ,rhGH按 1U/ (kg·d)皮下注射。于实验第 14天取门静脉血测定胰岛素样生长因子 1(IGF 1)、清蛋白、前清蛋白、转铁蛋白浓度 ,取肝组织做清蛋白mRNA定量测定。 结果 :A、C组IGF 1、血清清蛋白、前清蛋白、转铁蛋白明显高于B组 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。C组清蛋白mRNA表达量明显高于B组。 结论 :rhGH具有刺激产生IGF 1和增加清蛋白mRNA表达量的作用 ,从而能明显改善肝硬化引起的低蛋白质血症。

脾阳虚大鼠脾失健运相关蛋白mRNA表达差异的研究

目的:研究脾阳虚大鼠脾失健运相关蛋白mRNA表达差异。方法:利用现代分子生物学RT-PCR的实验方法,运用蛋白组学技术鉴定大鼠回肠组织中与脾阳虚相关的2个蛋白,即结蛋白(Desmin)、甘油醛三磷酸脱氢酶(glycer-aldehyde-3 phosphate dehydrogenase,GAPDH),从基因水平检测蛋白质mRNA的差异性表达。结果:Desmin的mRNA表达在正常组和脾阳虚组没有明显差异,GAPDH的mRNA表达在正常组和脾阳虚组有明显差异。结论:GAPDH可作为脾阳虚证的辅助检测指标之一。用分子生物学RT-PCR检测方法检验了两个蛋白mRNA在转录过程中是否发生变化,从结果中看到了蛋白组学筛选的GAPDH在转录过程中发生变化,充分证明了GAPDH与脾阳虚证有关。Desmin的mRNA表达在脾阳虚大鼠中与正常组没有明显差异,还需要进一步进行验证。

甲状旁腺激素相关蛋白mRNA在髁突软骨与生长板软骨发育早期的表达变化

目的研究甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone-related protein,PTHrP)mRNA在髁突软骨与生长板软骨发育早期的表达变化,初步探讨PTHrP在软骨内成骨中的作用。方法选用胚胎SD大鼠的髁突软骨与生长板软骨作为研究对象,采用原位杂交染色法检测发育早期两种软骨内PTHrP mRNA表达,以图像分析仪进行图像分析。结果胎龄14～19 d,随着软骨发育的成熟,PTHrP mRNA在生长板软骨和髁突软骨中的表达越来越广泛并呈现一定的时空变化,但PTHrP mRNA在两种软骨中的表达部位存在一定的差异。在髁突软骨中,PTHrP mRNA在增殖层和前肥大层强表达;在生长板软骨中,其主要表达在软骨膜细胞和关节周围的软骨细胞,前肥大层中也有较强的表达,增殖层弱表达或不表达。结论 PTHrP mRNA在生长板软骨和髁突软骨中表达部位不同,但均呈现一定的时空变化,提示PTHrP对不同分化阶段的软骨细胞具有一定的调节作用。

奶母果对肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-性腺轴中钙调蛋白mRNA表达量的影响

目的研究奶母果对肾阳虚大鼠模型下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴钙调蛋白(Ca M)mRNA表达量的影响。方法应用外源性糖皮质激素(氢化可的松)制作肾阳虚大鼠模型,检测各组大鼠HPG轴中Ca M mRNA表达量,分析奶母果对HPG轴中下丘脑、睾丸Ca M mRNA的影响。结果高剂量的奶母果瘿果可提高肾阳虚大鼠HPG轴下丘脑Ca M mRNA的表达量,降低睾丸Ca M mRNA的表达量,而奶母果瘿果低剂量组和花序托组作用不明显。结论奶母果可通过提高肾阳虚大鼠下丘脑Ca M mRNA的表达改善其肾阳虚症状。

肝细胞癌及癌旁组织中白蛋白mRNA和甲胎蛋白mRNA的表达

目的 :检测肝细胞癌及癌旁组织白蛋白 m RNA和甲胎蛋白 m RNA表达 ,为外周血肝细胞癌转移指标提供依据。方法 :用 RT- PCR技术检测 18例肝细胞癌和 13例癌旁肝组织中白蛋白 m RNA和甲胎蛋白 m RNA。结果 :1白蛋白 m RNA在 18例癌及 13例癌旁组织中均有高表达 ;2白蛋白 m RNA检出率明显高于第一轮 PCR甲胎蛋白 m RNA(P<0 .0 0 1) ;3白蛋白 m RNA和甲胎蛋白 m RNA可同时在癌组织中表达。结论 :选择检测白蛋白 m RNA敏感性高 ,可以避免漏检不表达或表达很低的甲胎蛋白 m RNA的肝细胞癌转移。

上皮钙黏着蛋白mRNA表达与肺癌的相关性研究

目的探讨E-cadherin(上皮钙黏着蛋白,E-cad)mRNA与肺癌及其病理类型之间的相关性。方法用巢式RT-PCR检测50例肺癌患者的癌、癌旁和远癌肺组织及5例肺良性对照标本中的E-cad mRNA的相对表达量。结果癌组织1.33±0.53、癌旁组织1.65±0.60、远癌组织2.01±0.46、非肺癌对照肺组织2.09±0.09,经方差分析癌、癌旁和远癌组织差异有统计学意义(F=18.810,P<0.01),但远癌组织与非肺癌对照肺组织之间的差异无统计学意义(P>0.05)。肺鳞癌、腺癌及腺鳞癌的癌组织、癌旁组织和远癌组织中E-cad mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论E-cad mRNA表达减少或缺失与肺癌的发生和发展有相关性,与肺癌的组织类型无关。

甲胎蛋白mRNA在肝癌组织中的表达及其意义

目的 :探讨甲胎蛋白 (AFP) m RNA在肝癌组织中的表达及其临床意义。方法 :用巢式逆转录聚合酶链反应 (nestedRT- PCR)检测 19例肝细胞癌患者癌组织 AFP m RNA。结果 :16例 (88.9% )患者癌组织 AFP m RNA呈阳性表达 ,其外周血 AFP m RNA亦为阳性 ;而阴性表达的 3例其外周血 AFP m RNA和血清 AFP亦为阴性。癌组织 AFP m RNA阳性率在血清 HBs Ag阳性组 (93.8% )、合并肝硬化组 (10 0 % )和血清 AFP≥ 2 5 μg/ L 组 (10 0 % )高于 HBs Ag阴性组 (33.3% )、无合并肝硬化组 (5 7.1% )和 AFP<2 5 μg/ L 组 (5 7.1% ) (P <0 .0 5 )。相关分析显示外周血 AFP m RNA阳性率和血清 AFP水平均与癌组织 AFP m RNA阳性表达呈正相关 (r =0 .6 413,P <0 .0 5 ;r=0 .6 0 2 4,P <0 .0 5 )。癌组织 AFP m RNA阳性表达和血清 HBs Ag阳性表达及合并有肝硬化呈正相关 (r =0 .6 5 0 3,P <0 .0 5 ;r =0 .5 90 8,P <0 .0 5 ) ,而与有无门静脉癌栓或肝外转移及癌灶大小无相关性 (P >0 .0 5 )。结论 :大多数肝细胞癌的 AFP基因处于活化状态。外周血 AFP m RNA阳性表达和血清 AFP水平均与癌组织 AFP m