细胞质内高表达的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P^(21)抑制人支气管上皮细胞凋亡

目的研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P^(21)抑制人支气管上皮细胞凋亡的机制。方法 (1)表达细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P^(21)的质粒P^(EGFP-N1-p21)转染人支气管上皮细胞系16HBE,研究P^(21)蛋白在细胞质、细胞核内的表达变化与质粒转染后细胞凋亡表现之间的相互关系。实验分组包括空白对照、空质粒及P^(EGFP-N1-p21)质粒组,应用Westen-blot方法检测质粒转染24 h后P^(21)蛋白在细胞质、细胞核内的表达变化相对值,流式细胞仪方法检测质粒转染24 h、48 h后的细胞凋亡率。(2)转化生长因子-β_1(TGF-β_1)刺激人支气管上皮细胞系16HBE,研究TGF-β_1刺激后P^(21)蛋白在细胞质、细胞核内的表达变化与支气管上皮细胞凋亡之间的相互关系。实验分组包括TGF-β_10 ng/mL、TGF-β_13 ng/mL及TGF-β_110 ng/mL组,应用Westen-blot方法检测TGF-β_1刺激24 h后P21蛋白在细胞质、细胞核内的表达变化,流式细胞仪方法检测TGF-β_1刺激12 h、24 h后的细胞凋亡率。结果质粒P^(EGFP-N1-p21)转染人支气管上皮细胞系16HBE 24 h后,P^(EGFP-N1-p21)质粒组的P^(21)蛋白在细胞质内表达水平高于空质粒组、空白对照组,并高于同组细胞核内,差异均有统计学意义(P<0.05);空质粒组、空白对照组的细胞质内P^(21)蛋白表达水平低于细胞核内,差异均有统计学意义(P<0.05)。P^(EGFP-N1-p21)质粒转染24 h、48 h后,P^(EGFP-N1-p21)质粒组凋亡率低于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。P^(EGFP-N1-p21)质粒转染24 h后的16HBE细胞凋亡率高于转染48 h后,而空质粒组和空白对照组表现相反结果。P^(EGFP-N1-p21)质粒转染后,P^(21)蛋白在细胞质内表达与转染后的细胞凋亡呈负相关。TGF-β_1(0 ng/mL、3 ng/mL、10 ng/mL)作用于16HBE细胞24 h后,TGF-β_13 ng/mL及10 ng/mL组的细胞核、细胞质内P^(21)蛋白表达均高于TGF-β_10 ng/mL组,差异均具有统计学意义(P<0.05),TGF-β_13 ng/mL及10 ng/mL组的细胞质中P^(21)蛋白表达均高于细胞核内P^(21)蛋白(P均<0.05),10 ng/mL组胞质P^(21)蛋白表达量低于3 ng/mL组(P<0.05)。TGF-β_1(0 ng/mL、3 ng/mL、10 ng/mL)作用于16HBE细胞12h、24 h后,同一作用时间下,随着TGF-β_1刺激浓度增加,细胞凋亡率增加,TGF-β_1(3 ng/mL、10 ng/mL)作用于16HBE细胞12 h、24 h后,同一作用浓度下,随着刺激时间延长,细胞凋亡率增加(P均<0.05)。TGF-β_1作用于人支气管上皮细胞系16HBE后,细胞质内P^(21)蛋白增加与刺激后的细胞凋亡呈负相关。结论 P^(EGFP-N1-p21)质粒转染人支气管上皮细胞后,P^(21)蛋白表达于细胞质,抑制人支气管上皮细胞凋亡。TGF-β_1作用于人支气管上皮细胞系16HBE后,刺激细胞质内P^(21)蛋白表达增加,随着细胞质内P^(21)蛋白表达下降,细胞凋亡增加。细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P^(21)可通过在细胞质内高表达这一机制抑制人支气管上皮细胞凋亡。

大鼠全脑缺血再灌流后脑组织P^(53)及P^(21)蛋白的表达

目的 探讨大鼠全脑缺血再灌流后Ｐ５３、Ｐ２１蛋白的表达及其与迟发性神经元死亡（ＤＮＤ）的关系。方法 在４ 血管闭塞法全脑缺血模型上，采用ＨＥ及ＬＳＡＢ染色法，观察脑组织病理改变，检测脑组织Ｐ５３、Ｐ２１蛋白的表达，以及蛋白合成抑制剂放线菌酮对其的影响。结果 全脑缺血１５ ｍ ｉｎ 再灌流后，脑组织Ｐ５３、Ｐ２１蛋白表达增加，且两者分布接近。海马结构、丘脑、下丘脑等白质区（再灌流后６ ｈ）较皮层、海马的神经细胞核（２４ ｈ）先检测到Ｐ５３、Ｐ２１蛋白，７２ ｈ 表达达高峰。并且以缺血损伤最严重的海马ＣＡ１ 区Ｐ５３、Ｐ２１蛋白表达为强。另外，放线菌酮可抑制脑组织Ｐ５３、Ｐ２１蛋白的表达，并对ＤＮＤ具有一定的保护作用。结论 全脑缺血再灌流损伤后，脑组织Ｐ５３、Ｐ２１蛋白表达增加，放线菌酮可抑制其表达，并对ＤＮＤ起保护作用，提示Ｐ５３、Ｐ２１蛋白参与了全脑缺血后ＤＮＤ的凋亡机制。

Hp感染、DNA含量、P^(21)蛋白异常表达与胃癌关系的研究

目的 :明确幽门螺杆菌 (Hp)感染、DNA含量及 P2 1 蛋白在胃炎性病变、不典型增生及胃癌中异常表达的意义 ,探讨三者之间的关系。方法 :Hp、P2 1 蛋白采用免疫组化 (SP)法检测 ;DNA含量采用 Feulgen反应显示 DNA,用北京航天航空大学研制的 CMM- 3彩色病理图像分析系统进行 DNA含量分析。结果 :Hp感染与胃炎性病变及不典型增生密切相关 ,在胃癌中的检出率较前二者低 (34% ) ;不典型增生和胃癌 P2 1 蛋白阳性表达与胃炎性病变 P2 1 蛋白阳性表达有显著性差异 ;中、高增殖病例 P2 1 蛋白阳性表达无显著性差异。结论 :对胃粘膜活检标本同时检测 Hp、P2 1 及 DNA含量 ,对预防胃癌发生有重要的临床意义。另外 ,还可以作为早期诊断胃癌的有效方法。

阴茎癌和癌旁组织中ras－P^（21）蛋白的表达

阴茎癌和癌旁组织中ｒａｓ－Ｐ^（２１）蛋白的表达刘禄成，朱德淳，毛英兰白求恩医科大学第二临床学院（长春市１３００４１）近年来，随着分子生物学和免疫学的进步，随着癌基因研究的深入和检测技术的提高，对阴茎癌的发生、预防和治疗的研究有了很大进展。正如对其它...

肾母细胞瘤组织中ras癌基因P^(21)蛋白和表皮细胞生长因子受体的观察

应用免疫组化方法观察了30例肾母细胞瘤组织中ras癌基因P^21蛋白和表皮细胞生长因子受体(EGFr),发现P^21蛋白主要在间叶细胞表达。EGFr阳性细胞在间叶细胞和肾小管上皮型细胞中多见,且以上皮型细胞呈强阳性染色。结果提示肾母细胞瘤组织细胞学和基因蛋白水平表达的多样性。

口腔粘膜白斑发生发展中bcl-2、P^(21 wafl)蛋白的表达

目的 :探讨口腔粘膜白斑发生发展中bcl 2及P2 1wafl蛋白的表达。方法 :利用免疫组织化学技术对 13例正常口腔糊膜、39例口腔粘膜白斑及 46例不同分级鳞癌的bcl 2、P2 1wafl蛋白表达进行研究。结果 :正常口腔粘膜bcl 2均呈阴性 ,不典型增生性白斑bcl 2蛋白阳性表达率为 5 2 .17% ,显著高于单纯增生性白斑 (18.75 % )及Ⅰ、Ⅱ级口腔鳞状细胞癌 (18.18% ,2 2 .2 2 % ,P <0 .0 5 )。正常口腔粘膜P2 1waf1蛋白表达均呈阳性。单纯增生性白斑P2 1waf1蛋白阳性表达率为 75 .0 0 % ,显著高于不典型增生性白斑 (2 6 .0 9% ) (P <0 .0 5 )及口腔鳞状细胞癌 (2 8.2 6 % )(P <0 .0 5 ) ,而P2 1wafl蛋白表达率在不典型增生性白斑和鳞癌之间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。P2 1wafl阳性标本阳性细胞计数随组织恶性程度增加而有增高趋势。结论 :bcl 2蛋白表达在口腔粘膜恶性变的较早阶段起主要作用。P2 1waf1表达的下调是口腔白斑发生发展中的较早期事件 ,P2 1waf1表达率综合P2 1waf1阳性细胞计数在口腔粘膜白斑恶变潜能评价方面是一项有用的指标。

鼻咽癌ras P^(21)蛋白表达的临床意义

目的 :探讨鼻咽癌rasP2 1蛋白表达的临床意义。方法 :采用流式细胞术和单克隆技术对鼻咽鳞状细胞癌细胞rasP2 1蛋白表达进行定量检测 ,并与正常细胞对照。结果 :rasP2 1蛋白表达量与鼻咽癌的恶性程度呈正相关。随着鼻咽癌恶性程度的增加rasP2 1蛋白表达量也增加 ,但是与临床分期及患者的生存期无关。结论 :rasP2

ras癌基因产物P^21蛋白在乳腺癌组织中的表达

用免疫组化ABPAP法对45例乳腺癌及10例乳腺良性增生病和正常乳腺组织进行了P^21表达的检测，结果发现，45例乳腺癌中37例有P^21的过度表达。其中以低分化浸润性癌阳性率较高，癌旁乳腺组织P^21表达明显低于乳腺癌组织（P<0.01)。作者认为，P^21免疫组化检测不仅对研究ras基因在乳腺癌变中的作用有理论意义。而且在肿瘤临床病理和细胞学诊断方面亦有实用价值。

结节性甲状腺肿与甲状腺癌P^(21WAF1)蛋白和层粘连蛋白的表达

目的研究P21WAF1蛋白和层粘连蛋白(LN)在结节性甲状腺肿中的表达水平及意义。方法应用免疫组化SP法检测50例结节性甲状腺肿、40例正常甲状腺组织、40例甲状腺癌标本中P21WAF1蛋白和LN的表达。结果P21WAF1蛋白和LN表达阳性率在结节性甲状腺肿分别为(52.14±29.02)%,(26.45±15.89)%;正常甲状腺组织为(87.01±7.21)%,(20.45±10.2)%;甲状腺癌为(14.20±12.04)%,(60.12±23.77)%;三者比较差异有显著性(P<0.01)。甲状腺癌P21WAF1和LN的表达呈负相关(r=-0.610,P<0.05)。结论P21WAF1和LN联合测定对鉴别良恶性甲状腺肿瘤有一定的临床价值。

妊娠滋养细胞疾病中ras基因突变及其P^(21)蛋白表达的研究

目的了解妊娠滋养细胞疾病分子生物学发病机制中ｒａｓ基因的作用。方法应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ（聚合酶链反应－限制性片段长度多态分析）检测绒毛膜细胞株ＪＡＲ和ＢｅＷｏ、和３６例标本（６例新鲜组织及３０例石蜡标本）中Ｈ－ｒａｓ、Ｋ－ｒａｓ的第１２位点点突变情况；应用免疫组织化学方法检测石蜡标本野生型Ｐ２１和３种突变型Ｐ２１蛋白的表达情况。结果所有被测标本均未见Ｈ－ｒａｓ、Ｋ－ｒａｓ第１２位点的点突变。而野生型Ｐ２１蛋白在妊娠滋养细胞疾病中存在着不同程度的表达，其表达强度依ＧＴＤ恶性程度增加而递减。结论Ｒａｓ基因并不以第１２位点点突变的方式在ＧＴＤ中发挥作用。野生型Ｐ２１参与正常滋养细胞的增殖、分化过程；

P^(21ras)、P^(53)在子宫颈癌中的免疫组化研究

目的 探讨p^(21ras),突变型P^(53)蛋白的过度表达与宫颈癌病因学方面的关系。方法 采用免疫组化S—P法检测正常宫颈、慢性宫颈炎、宫颈不典型增生、宫颈癌组织中P^(21ras),突变型P^(53)蛋白的表达。结果 P^(21ras),突变型P^(53)蛋白在正常宫颈和慢性宫颈炎中不表达,在宫颈不典型增生中有表达,在宫颈癌中过度表达,相互间差异显著(P<0.05)。结论 宫颈癌的发生与ras癌基因变异及P^(53)抑癌基因突变有关,且ras癌基因变异可能是宫颈癌发生的早期事件,P^(53)抑癌基因突变可能是宫颈癌发生的晚期事件,代表肿瘤的恶性倾向。

子宫内膜癌细胞rasP^(21)、P^(53)表达、DNA含量和临床病理特征及预后的关系

为探讨ｒａｓ癌基因和Ｐ５３抗癌基因表达产物、ＤＮＡ含量及其它临床病理因素对子宫内膜癌预后的影响，本文采用单因素、Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲线和ＳＰＳＳ多元相关与逐步回归软件将患者年龄、临床期别、病理类型、临床分型、组织学分级、肌层侵犯深度、局部免疫反应、ＤＮＡ指数（ＤＩ）、Ｓ期细胞比率（ＳＰＦ）、增殖指数（ＰＩ）、Ｐ２１荧光指数（Ｐ２１ＦＩ）、Ｐ５３荧光指数（Ｐ５３ＦＩ）和Ｐ５３免疫组织化学表达强度等１３个因素与生存的关系进行了分析。结果表明：Ｐ５３表达强度和临床期别为最有意义的预后指标，Ｐ５３表达强阳性和临床Ⅲ期与短生存期有关；另外，肌层侵犯超过２／３、乳头状腺癌和年龄大也提示不良预后。

ras癌基因产物p^（21）蛋白在人肺癌中的表达及意义

本研究用免疫组织化学方法研究了ｒａｓ癌基因产物ｐ￣２１蛋白在５８例人肺癌中的表达。结果表明：ｐ￣２１蛋白在鳞癌中最高，达８１．５％（２２／２７），在腺癌中较低，为６５．２％（１５／２３），２例大细胞癌和１例腺鳞癌均为阳性，５例小细胞肺癌均为阴性，提示ｐ￣２１蛋白是非小细胞肺癌的一个较好标志物。在高分化肺癌，ｐ￣２１蛋白表达的阳性率为８７．５％（１２／１４），在中、低分化的肺癌，则分别为７５．０％（１８／２４）和６６．７％（１０／１５），三者之间无显著差异（Ｐ＞０．０５），提示ｐ￣２１蛋白和肺癌分化的关系尚需进一步研究。

p53、p21^(WAF1)蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨原发性非小细胞肺癌中p5 3、p2 1WAF1蛋白表达与临床病理及预后的关系。方法 应用免疫组织化学 (SP法 )方法。共检测非小细胞肺癌 147例 ,其中腺癌 6 6例 ,鳞癌 6 3例 ,腺鳞癌 14例 ,大细胞癌 4例。结果 p5 3蛋白总阳性率为 6 1.2 % (90 / 147) ,腺癌为 5 7.6 % (38/ 6 6 ) ,鳞癌阳性率为 6 3.5 % (4 0 / 6 3) ,腺鳞癌为 71.4% (10 / 14) ,大细胞癌 2例阳性。p2 1WAF1蛋白总阳性率为40 1% (5 9/ 147) ,腺癌为 42 .4% (2 8/ 6 6 ) ,鳞癌为 41.3% (2 6 / 6 3) ,腺鳞癌 2 8.6 % (4 / 14) ,大细胞癌 1例阳性。肺腺癌p5 3蛋白阳性表达与其预后相关 ,6 6例腺癌中 ,生存率低于 3年组和高于 3年组的p5 3蛋白阳性率分别为 75 % (2 1/ 2 8)和 44 .7% (17/ 38) ,差异有显著性意义 (P <0 .0 2 5 )。p2 1WAF1阳性表达与肺癌预后有关 ,p2 1WAF1阳性表达者 3年生存率 (6 4.4% )高于阴性表达者 (4 6 .6 % ) (P <0 .0 5 )。p5 3阳性而p2 1WAF1阴性的非小细胞肺癌患者的预后比p5 3阴性而p2 1WAF1阳性者差 (P <0 .0 1)。结论 检测p5 3蛋白表达可作为判断肺腺癌预后的指标之一 ;检测p2 1WAF1蛋白表达有利于对非小细胞肺癌预后的判断 ;联合检测p5 3、p2 1WAF1蛋白对判断非小细胞肺癌的预后有重要的意义 。

维生素D衍生物EB1089对胰腺癌细胞系生长抑制作用的实验研究

目的:观察维生素D衍生物EB1089对人胰腺癌细胞系BxPC-3的生长抑制作用及其可能机制。方法:应用MTT比色法、流式细胞术、Westernblot法免疫印记电泳进行检测。结果:EB1089抑制人胰腺癌细胞系BxPC-3的生长,抑制50%细胞生长的药物浓度(IC50)为10-7mmol/L。癌细胞在EB1089作用下,G0/G1期细胞比例增加23%,S期细胞比例下降12%。胰腺癌细胞系BxPC-3的P21蛋白的表达随EB1089的作用时间和药物浓度的提高而增强。结论:EB1089对胰腺癌细胞系BxPC-3具有生长抑制作用,其作用机制可能与P21表达上调有关。

ras癌基因与肺癌

ｒａｓ癌基因与肺癌杨青综述刘学泽詹承烈审校一、癌基因概述癌基因（ｏｎｃｏｇｅｎｅ）是指在自然或实验条件下具有诱导细胞恶性转化的潜在活性基因。目前，在脊椎动物包括人类中已检测到近百种原癌基因。各种外源性因素，如辐射、化学致癌物、病毒等能使正常细胞中癌基...