纳洛酮在细胞信号传递系统中对蛋脑啡肽的拮抗作用

目的 :探讨蛋脑啡肽 (MENK)在细胞信号传递系统的作用及其方式。方法 :用蛋脑啡肽及纳洛酮处理小鼠的骨髓瘤细胞 (NS-1 ) ,之后测定蛋白激酶 A(PKA)和蛋白激酶 C(PKC)活性。结果 :表明蛋脑啡肽可以升高 NS-1细胞胞浆 PKA活性 ,却降低胞浆 PKC活性 ,而且这 2种作用均能被不同浓度的纳洛酮所拮抗。结论 :蛋脑啡肽通过传统的阿片受体机理参与了 2条 (c AMP-PKA途径及 DG-PKC途径 )细胞外信号传递系统的信号传递。

抗delta阿片受体单克隆抗体对蛋脑啡肽的拮抗作用

目的 :探讨蛋脑啡肽 (MENK)对体外培养的小鼠的骨髓瘤细胞 (NS-1 )增殖的作用及抗阿片受体单克隆抗体对该作用的影响。方法 :用3H-Td R掺入法测定不同给药组细胞的增殖。结果 :1 μmol/ L MENK可促进 NS-1细胞增殖 ,促进作用达 1 0 9.5 % ,而 0 .1～ 1 0 nmo1 / L的抗体可抑制MENK的作用。结论 :抗 delta阿片受体单克隆抗体能拮抗 MENK促进细胞增殖的作用 ,提示MENK促进细胞增殖作用可能是通过阿片受体机理所介导。

蛋脑啡肽对猴免疫缺陷病毒感染CEM×174细胞kappa阿片受体表达的调节作用(英文)

目的：研究蛋脑啡肽对猴免疫缺陷病毒（ＳＩＶ）感染ＣＥＭ×１７４ 细胞ｋａｐｐａ 阿片受体表达的调节作用。方法：用ＳＩＶ 感染ＣＥＭ×１７４ 细胞并加入不同浓度蛋脑啡肽。在２４ ｈ 提取ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ 方法扩增ｋａｐｐａ 阿片受体ｍ ＲＮＡ 并且进行定量分析。结果：显示ＳＩＶ 能够抑制ＣＥＭ×１７４ 细胞的生长。在１０－ ７ｍ ｏｌ／Ｌ蛋脑啡肽存在下，ＳＩＶ 对细胞的损害减轻。１０－ ７ｍ ｏｌ／Ｌ和１０－ ６ｍ ｏｌ／Ｌ蛋脑啡肽不能改变正常细胞ｋａｐｐａ 阿片受体的表达，但是在ＳＩＶ 感染组的表达显著增高。结论：实验结果提示蛋脑啡肽能够维持正常淋巴细胞的生长。Ｋａｐｐａ

不同浓度阿片吗啡及蛋脑啡肽对病毒感染细胞生长与凋亡的影响

目的分析不同浓度阿片吗啡和内源性阿片物质脑啡肽对病毒感染细胞凋亡影响,并分析影响机制。方法采用猴免疫缺陷病毒(SIV)感染CEM×174细胞,分析感染病理过程,分别采用0、1-8、10-7、10-6 mol/L阿片吗啡和蛋脑啡肽作用正常细胞和SIV病毒感染细胞,分析吗啡和脑啡肽对细胞生长和P53蛋白的影响,并比较不同浓度下P53蛋白相对变化。结果 SIV病毒能够抑制CEM174细胞生长,吗啡对正常细胞无明显影响,但是能够维持感染细胞的存活,脑啡汰处理情况与吗啡相一致;正常细胞P53蛋白无明显变化,SIV病毒感染细胞P53蛋白显著增加,吗啡能够抑制SIV感染细胞P53蛋白表达,蛋脑啡肽也对P53蛋白的合成产生一定影响,30h后抑制情况更加明显;不同浓度阿片对正常细胞P53蛋白无明显影响,SIV感染细胞P53蛋白不同浓度吗啡处理P53表达均显著高于SIV病毒感染组,与正常细胞比较,10-6、10-7 mol/L蛋脑啡肽处理P53表达显著提高(P<0.05),SIV感染组P53表达无明显差异。结论蛋脑啡肽对正常细胞P53含量也存在明显影响,吗啡可能引起病毒感染细胞P53含量增加,加速病毒病理过程进展。

赛庚啶治疗偏头痛和对血浆内β内啡肽和蛋氨酸脑啡肽的影响

目的 :观察赛庚啶对偏头痛疗效及血浆 β_内啡肽和蛋氨酸脑啡肽的影响。方法 :采用前瞻性、双盲法给 10例健康志愿者和 38例偏头痛病人 (男性15例 ,女性 2 3例 ,年龄 37a±s 10a)分别服用赛庚啶 4mg ,8mg和 12mg ,bid× 12wk。于wk 4,wk8,wk 12后观察头痛日数和指数的改变 ,并测定发作期和间歇期血浆内上述 2种阿片肽。结果 :赛庚啶和安慰剂均使头痛日数和指数明显下降 ,使发作期和间歇期 2种阿片肽血浆浓度显著升高。结论 :赛庚啶可促进 β_内啡肽分泌 ,减少活性物质释放 ,促进蛋氨酸脑啡肽分泌使对疼痛的抑制增强 ,在

蛋氨酸脑啡肽(MEK)联合干扰素γ抗肿瘤作用研究

观察蛋氨酸脑啡肽(MEK)和注射用重组人干扰素γ(IFN-γ)单独和联合应用的抗肿瘤效应。应用动物移植性肿瘤的体内试验法,分别观察MEK、IFN-γ和MEK+IFN-γ对肿瘤的抑瘤作用及小鼠生命延长率情况。结果显示,MEK组、IFN-γ组和MEK+IFN-γ组的抑瘤作用分别为129.11%(P<0.001)、78.11%(P<0.001)、231.10%(P<0.001),均有显著差异;生命延长率MEK组20.28%(P<0.001)有显著差异,IFN-γ组13.50%(P>0.001)无显著差异,MEK+IFN-γ组41.25%(P<0.001)有显著差异。可见,MEK、IFN-γ和MEK+IFN-γ都对小鼠移植性瘤有一定的抑制作用,MEK和MEK+IFN-γ能够延长小鼠生命,而IFN-γ单独应用不能延长小鼠生命。MEK和IFN-γ联合应用时作用相加。而不良反应未相加。

蛋氨酸脑啡肽对树突状细胞表型及功能的影响

目的:通过体外细胞株研究蛋氨酸脑啡肽(Methionine-enkephalin,MENK)对树突状细胞(Dendritic cell,DC)功能调节的机制,为进一步阐明蛋氨酸脑啡肽的免疫活性提供依据。方法:应用扫描电镜技术、酸性磷酸酶活性检测、流式细胞仪检测技术、酶联免疫吸附试验检测DC表型和功能的各种指标。结果:本实验应用小鼠髓系DC2.4细胞株,电镜观察DC的超微结构,可见10-12mol/L蛋氨酸脑啡肽处理组DC突起增多,形态上更加成熟;DC表面MHCⅡ、CD86和CD40的表达增加;酸性磷酸酶活性降低;DC白细胞介素12(IL-12)的表达增加(P<0.05)。结论:本实验结果证明了适宜浓度的蛋氨酸脑啡肽促进小鼠髓系DC2.4的表型及功能的成熟。

生物活性肽-蛋氨酸脑啡肽对成骨细胞增殖的影响

蛋氨酸脑啡肽(Methionine Enkephalin,MENK)作为内源性物质,通过与阿片受体结合,发挥阿片样物质的生物学作用。研究表明,MENK在成熟的骨组织和成骨细胞中均有分布,并且在成骨细胞表面发现了阿片受体。实验旨在进一步研究MENK对成骨细胞增殖的影响。体外培养MC3T3-E1成骨细胞,MTT方法检测MENK对成骨细胞增殖的影响。结果表明,10-7、10-8、10-9mol/L的MENK对成骨细胞的增殖具有促进作用(P<0.05)。提示MENK可在骨缺损疾病中发挥促进骨组织重建的作用。

细胞生物活性肽-蛋氨酸脑啡肽对小鼠CD4^+T细胞mRNA的影响

从基因水平探讨蛋氨酸脑啡肽对小鼠CD4'T细胞mRNA转录的影响。6～8周龄BALB/c雌性小鼠体内、外不同浓度MEK刺激。采用RT-PCR技术检测mRNA,所得不同浓度MEK刺激的CD4+T细胞mRNA和β-actin条带密度比值作为相对表达强度,所得数据采用SPSS11.5软件进行统计分析。4mg/mLMEK体内刺激及10-9～10-12mol/mL的MEK体外刺激促进小鼠CD4'T细胞mRNA转录;10-1～10-8mol/mL的MEK抑制小鼠CD4+T细胞mRNA的转录。10-13～10-14mol/mL的MEK对小鼠CD4'T细胞mRNA的转录无明显变化。适量浓度的MEK体内、外刺激能促进小鼠CD4+T细胞mRNA转录的高效表达。

蛋氨酸脑啡肽对免疫系统恢复作用的研究(英文)

采用固相合成法合成蛋氨酸脑啡肽,制备成注射液。对经放化疗后免疫系统受到伤害的晚期肿瘤志愿者进行治疗,经静脉滴注15 d。患者免疫系统指标全面迅速恢复,淋巴细胞亚群间比例趋于合理,证明蛋氨酸脑啡肽可以用于癌症患者的免疫系统的恢复治疗。

蛋氨酸脑啡肽对神经母细胞瘤细胞生长周期的影响及其机制研究

目的:研究蛋氨酸脑啡肽(Met-ENK)对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的生长抑制作用及细胞周期的抑制机制。方法:采用MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞术检测Met-ENK作用后肿瘤细胞周期变化;Real-time PCR法检测Met-ENK作用后细胞内P21,P53基因转录量变化;Western blot法检测细胞内P21,P16,磷酸Rb蛋白表达量的变化情况。结果:MTT法结果显示,Met-ENK对SH-SY5Y细胞有生长抑制作用,在Met-ENK浓度为10-5mol·L-1时抑制率为40%;流式细胞术证实Met-ENK作用后大多数细胞被抑制于细胞周期的G0/G1期,该期细胞数由63.97%变为87.73%;P21的基因转录量是用药前的3倍,P53基因转录量是用药前的5倍;P21,P16蛋白表达量明显增加,磷酸Rb蛋白表达量明显降低。结论:Met-ENK可以通过上调细胞周期蛋白依靠性激酶抑制因子P21及抑癌基因P53的转录和蛋白表达量,下调Rb蛋白的磷酸化水平将SHSY5Y细胞的增殖抑制于生长周期的G0/G1期,表明Met-ENK的G0/G1期特异性周期抑瘤作用可以通过调节该途径产生。

蛋氨酸脑啡肽小鼠体内抗癌活性初探

目的研究蛋氨酸脑啡肽(MEK)是否具有抗癌、增加化疗药物疗效和增强或保护免疫功能的作用。方法 BALB/c小鼠40只,右腋皮下接种H22癌细胞,接种24h后随机分为5组,依次为阴性对照组(生理盐水0.2mL/kg)、5-Fu组(10mg/kg)、MEK组(200mg/kg)、5-Fu+MEK联合给药组(10mg/kg+200mg/kg)和阳性对照组(20mg/kg 5-Fu)。腹腔注射受试药品,每日1次,连续给药8d,处死动物。计算肿瘤抑制率、胸腺和脾脏脏器指数以及测定CD3+和CD4+T细胞表达。结果单独给予MEK 200mg/kg或5-Fu 10mg/kg时两组对肿瘤的抑制作用相近,对肿瘤的抑制率分别为75.13%和74.26%;联合给予MEK和5-Fu时,其抑瘤率为88.25%,明显高于单独使用5-Fu。MEK对小鼠脾脏及胸腺无明显抑制作用,与5-Fu合用时能显著减轻5-Fu对免疫脏器胸腺的抑制作用。单独给予MEK 200mg/kg时,能明显提高荷瘤小鼠的CD3+和CD4+T细胞表达,与阴性对照组和5-Fu各剂量组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 MEK具有良好的抗肿瘤活性及增强机体免疫功能的作用,与化疗药物合用能增强其疗效同时减轻其毒性,对免疫脏器有保护作用。

蛋氨酸脑啡肽联合低剂量纳曲酮治疗胰腺癌的实验研究

目的:通过单独应用MENK、NTX与联合应用MENK与NTX的体内外实验,探讨MENK、NTX及二者联合时对胰腺癌的抑制作用。方法:体外实验中,MTS方法检测各实验组中胰腺癌增殖细胞的抑制情况;体内实验中,通过建立胰腺癌荷瘤小鼠模型,检测各实验处理组中胰腺癌的抑制情况。WB法检测荷瘤小鼠胰腺癌组织阿片受体蛋白表达量;流式细胞术检测荷瘤小鼠淋巴细胞亚群(CTL、Treg、NK、γδT)的增殖情况。结果:在体外实验中,MENK在浓度为10^(-6)mol/L时对胰腺癌细胞的抑制作用最强;NTX在浓度为10^(-5)mol/L时对胰腺癌细胞的抑制作用最强;二者相比较,MENK的作用更加显著,具有统计学意义(P<0.05);在体内实验中,MENK与NTX联合应用在48小时后与对照组相比较,具有统计学意义(P<0.05),在96小时,与MENK组和NTX组相比较抑癌率升高,具有统计学意义(P<0.05);在体内实验中,在1次/24 h的给药方式下,MENK在剂量为20 mg/kg时抑癌效果最显著;NTX在剂量为5 mg/kg时抑癌效果最显著;MENK组与NTX组相比较作用更加显著,具有统计学意义(P<0.0 5);MENK与NTX联合应用时,MENK在剂量为20 mg/kg 1次/24 h与NTX在剂量为5 mg/kg 1次/96 h给药方式时,抑癌效果最显著,与对照组相比具有统计学意义(P<0.05);Western-blot技术检测荷瘤小鼠肿瘤组织阿片受体的蛋白的表达含量,NTX组与MENK+NTX组肿瘤组织阿片受体蛋白表达量增加,NTX组高于MENK+NTX组,具有统计学意义(P<0.05);流式细胞技术检测荷瘤小鼠淋巴细胞亚群增殖情况,MENK组、NTX组与MENK+NTX组都可以促进淋巴细胞亚群(CTL、NK、γδT)增殖,抑制Treg增殖,与对照组相比具有统计学意义(P<0.05)。结论:MENK在体内外能够抑制胰腺癌细胞增殖,NTX在体内外能够抑制胰腺癌细胞增殖,两者相比MENK作用更加显著;MENK与NTX联合应用,在NTX给药72小时后具有协同作用;NTX在体内能够上调肿瘤组织阿片受体的蛋白表达;MENK和NTX均能在体内能够促进CTL、NK、γδT细胞的增殖,抑制Treg细胞的增殖,二者联合具有协同作用。

蛋氨酸脑啡肽联合白细胞介素-2抗肿瘤作用研究

观察蛋氨酸脑啡肽(MEK)和注射用白细胞介素-2(IL-2)单独和联合应用的抗肿瘤效应。应用动物移植性肿瘤的体内试验法,分别观察MEK、IL-2和(MEK+IL-2)对肿瘤的抑瘤作用及小鼠生命延长率情况。MEK组、IL-2组和(MEK+IL-2)组的抑瘤作用分别为131.38%(P<0.01)、69.63%(P<0.01)、229.170%(P<0.01),都有显著差异;生命延长率为:MEK组18.27%(P<0.01),有显著差异;IL-2组9.31%(P>0.01),无显著差异;(MEK+IL-2)组32.07%(P<0.01),有显著差异。结果表明:MEK、IL-2和(MEK+IL-2)都对小鼠移植性瘤有一定的抑制作用,MEK和(MEK+IL-2)能够延长小鼠生命,而IL-2单独应用不能延长小鼠生命;MEK和IL-2联合应用时作用相加,而不良反应未相加。

蛋氨酸脑啡肽对MCF-7/ADR生长抑制作用机制的初步研究

目的研究阿片生长因子蛋氨酸脑啡肽(Met-ENK)对MCF-7/ADR肿瘤细胞的抑制作用的效果及机制的初步研究。方法采用CCK-8法检测不同剂量的Met-ENK(10-3、10-4、10-5、10-6、10-7 mol/L)对乳腺癌细胞MCF-7/ADR作用48 h后的肿瘤抑制率;采用细胞计数法绘制Met-ENK孵育0、24、36、48及72 h后的MCF-7/ADR的生长曲线;采用流式细胞术及PI染色法记录用药孵育48 h后,MCF-7/ADR细胞周期变化情况。结果结果显示与空白对照组相比,Met-ENK对MCF-7/ADR细胞的生长有明显的抑制作用,呈时间依赖性,但不呈剂量依赖性,10-6mol/L浓度时,Met-ENK抑制肿瘤细胞生长效应最强;在Met-ENK作用后主要将细胞抑制于生长周期的G0/G1期。结论 Met-ENK对MCF-7/ADR肿瘤细胞有明显的抑制作用,且主要是通过影响细胞周期阻滞来发挥抑制肿瘤细胞生长的作用。但其机制仍需进一步研究及证实。

蛋氨酸脑啡肽研究进展及其应用前景

由于蛋氨酸脑啡肽联系着神经、免疫两大系统,具有独特的生物学活性,多年来一直受到广泛重视。目前,蛋氨酸脑啡肽应用于免疫相关疾病治疗的研究已经取得显著进展。本文综述了蛋氨酸脑啡肽的生物学功能的研究进展及其作用机制,并展望了其应用于癌症、艾滋病等重大免疫相关疾病的广阔前景。

蛋氨酸脑啡肽(MEK)抗B型流感病毒感染作用的研究

研究MEK抗B型流感病毒感染的作用。采用MDCK细胞和9～10日龄鸡胚,按不同的顺序加入不同剂量MEK和B型流感病毒,共培养72 h后做血凝实验。所有加入B型流感病毒的MDCK细胞均培养出病毒,HA滴度为1：64。在鸡胚尿囊腔中,先注入MEK孵育24 h后,再注入B型流感病毒的鸡胚也培养出病毒,HA滴度为1：6.8,与病毒对照组比较P〈0.01,有统计学意义。实验结果未见MEK直接抗B型流感病毒感染MDCK细胞株的作用,但可见MEK抗B型流感病毒感染鸡胚的作用。

HPLC法测定蛋氨酸脑啡肽含量

目的建立高效液相色谱法测定蛋氨酸脑啡肽含量。方法采用RP-HPLC法。色谱柱为J.T.Baker C18柱（250 mm×4.6 mm, 5μm）；流动相A 为含体积分数0.1% 三氟乙酸的去离子水，流动相B为含体积分数0.1%三氟乙酸的体积分数为60%的乙腈水溶液；流速为1.0 mL·min^-1； 检测波长为210 nm。结果蛋氨酸脑啡肽质量浓度在7-280 mg·L^-1内线性关系良好（r =0.9998），平均回收率为98.54%，RSD 为0.89%。结论此方法快捷、精确、重复性好，可用于蛋氨酸脑啡肽的含量测定。

蛋氨酸脑啡肽对GM-CSF诱导的小鼠骨髓来源树突状细胞TLR-4和TNF-α表达影响

观察蛋氨酸脑啡肽(MENK)对巨噬细胞-粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导的小鼠骨髓来源树突状细胞TLR-4和TNF-α表达的影响,探讨蛋氨酸脑啡肽对小鼠骨髓来源树突细胞免疫功能的调节机制。体外制备小鼠骨髓细胞用GM-CSF协同MENK诱导培养7 d后用RT-PCR法检测TLR-4和TNF-α的mRNA表达,用Western-Blot和ELISA法分别检测TLR-4和TNF-α蛋白的表达。结果表明,MENK协同诱导组TNF-α和TLR-4表达高于正常对照组(P<0.01)和GM-CSF诱导组(P<0.05)。显示MENK可以促进树突状细胞TLR-4和TNF-α的表达。

蛋氨酸脑啡肽与多柔比星联用对神经母细胞瘤SH-SY5Y的生长抑制及凋亡作用研究

目的:探讨蛋氨酸脑啡肽(Met-ENK)与多柔比星联用对神经母细胞瘤SH-SY5Y的生长抑制及凋亡作用,为Met-ENK临床联合用药的可行性提供参考。方法:采用CCK-8法检测协同生长抑制率;采用流式细胞术法检测细胞凋亡情况;根据生长抑制率情况运用金氏公式求出协同指数(q),明确Met-ENK与多柔比星的协同作用;采用SAS9.0软件对不同组别产生的生长抑制率、凋亡数据进行统计分析。结果:Met-ENK与多柔比星分别单独使用及联合用药作用于神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的抑制率依次为0.29%、0.71%、0.82%,且Met-ENK与多柔比星的协同指数q=2.19(q>2.0);单用Met-ENK几乎不引起肿瘤凋亡,单用多柔比星的肿瘤凋亡率为49.1%,二者联用的肿瘤细胞凋亡率为65.2%,与单用多柔比星比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:Met-ENK可显著提升神经母细胞瘤SH-SY5Y对多柔比星的敏感性,增强其对肿瘤细胞生长的抑制作用及肿瘤细胞凋亡率。