噬菌蛭弧菌对荷斯坦公犊牛生长性能及粪便微生物区系的影响

在我国的牛场,犊牛腹泻是犊牛死淘的第一大原因。腹泻不仅可以在短期内造成犊牛直接死淘,而且发生腹泻的犊牛最终生产性能也会显著下降。由于犊牛腹泻在感染初期不易被发现,导致犊牛因腹泻营养缺乏生长受阻,免疫力降低进而并发多种疾病。疾病一旦发生就不可避免产生损失,因而畜牧产业对于疾病的态度始终是防大于治。

海洋噬菌蛭弧菌对对虾病原菌及其他细菌的寄生作用

用宿主双层琼脂平板法，测定海洋噬菌蛭弧菌对２５株对虾病原菌和大肠杆菌、枯草杆菌、绿脓杆菌及金黄色葡萄球菌的寄生作用，结果表明噬菌蛭弧菌菌株不同寄生的范围不同，但所有供试寄主细菌都能被某些蛭弧菌寄生，形成清晰的噬斑．

蛭弧菌对污水生物净化效果的实验观察

通过蛭弧菌与污水的混合培养,采用平板菌落计数法及双层平板法检测其细菌总数和蛭弧菌菌斑,观察消长变化,为开设创新教学实验奠定基础。平板菌落计数结果显示,加蛭弧菌培养的污水细菌随时间的增加而明显减少,而未加蛭弧菌的污水细菌却没有显著变化;双层平板法结果显示,蛭弧菌菌斑随着培养时间而增加。验证了蛭弧菌对污水中细菌具有较好的侵染能力和净化作用,可利用蛭弧菌净化鱼塘污水,改善水质条件,减少致病性细菌污染。该实验贴近生活,有助于激发学生的实验兴趣和拓宽科研思维。同时,也为今后在微生物实验开设污水生物净化创新实验创造了条件。

噬菌蛭弧菌防治犊牛细菌性腹泻的潜力分析

犊牛细菌性腹泻是困扰犊牛饲养的普遍问题,致病菌耐药性使犊牛细菌性腹泻的预防和治疗更困难,成本更高。噬菌蛭弧菌是一种捕食革兰氏阴性菌的细菌,其捕食范围广,捕食原理使其不受猎物耐药能力影响,有望成为防治犊牛细菌性腹泻的新途径。本文收集近5年国内犊牛腹泻致病菌及其耐药性研究及近10年国内外噬菌蛭弧菌捕食、安全性和应用研究,从犊牛腹泻防治的角度进行综述,为噬菌蛭弧菌在犊牛细菌性腹泻的防治和研究提供理论依据和新思路。

噬菌蛭弧菌对鱼类常见致病菌裂解作用的研究

调查了北京地区２５份水样，其中２４份检出噬菌蛭弧菌。本次试验选用４株鱼类主要致病菌为宿主菌，检出的蛭弧菌对上述４种细菌的裂解范围有所不同。其中嗜水气单胞菌可被全部检出的蛭弧菌裂解（２４／２４），其他３株菌仅部分被裂解，依次为肠型点状气单胞菌（１７／２４），荧光假单胞菌（９／２４），鳗弧菌（７／２４）。本次试验直接从水样中检出６株对４种宿主菌均有裂解作用的蛭弧菌，为进一步利用蛭弧菌防治鱼类常见细菌性疾病提供了可用资料。

蛭弧菌BDH21-02对鱼类细胞及病原菌的作用

蛭弧菌BDH21-02在双层琼脂平板上能裂解所有检测的17种共36株宿主菌，在水中蛭弧菌对受试病原菌的裂解程度在2．96±0．13～4．46±0．28lg值之间。其中，BDH2J-02使嗜水气单胞菌浓度下降4．32±0．25lg值的同时，自身浓度上升3．40±0．30lg值。BDH21-02对PCK、CIK、EPC、FHM等鱼类细胞的毒性实验表明，实验组和对照组没有显著差异（P〉0．05）。由实验结果可以看出蛭弧菌BDH21-02在生物防治鱼病方面具有良好的应用价值。

异育银鲫肠道蛭弧菌的分离及其生物学特性的研究

以一株具有致病力的温和气单胞菌作为筛选宿主菌，从异育银鲫肠道中分离到一株蛭弧菌，暂命名为BDF-H16。通过光学显微镜、相差显微镜、电子显微镜对蛭弧菌BDF-H16进行形态观察，并研究了其部分生物学特性。结果表明：蛭弧菌BDF-H16为革兰氏阴性菌，杆形或弧杆形，端生一根鞭毛，菌体大小多为0．2μm-0．5μm×0．8μm—1.2μm；蛭弧菌BDF-H16对实验所选用的革兰氏阴性菌和部分革兰氏阳性菌均有裂解作用；以大肠杆菌为宿主菌，其最佳生长条件为宿主菌浓度6．75×10^9cfu／mL、pH7．0—7．5、温度28℃；在NaCl含量0．85％-5．00％的培养基中能够生长；恩诺沙星、诺氟沙星对其有抑制作用。

蛭弧菌对鲤感染嗜水气单胞菌预防效果的观察

以不同浓度的蛭弧菌 (Bdellovibriobacteriovorus) (简称Bd)Bd - 9- 2 592 2投放水族箱中 ,对鲤用浸泡法进行人工感染嗜水气单胞菌 (Aeromonashydropila) (简称SC)SC- 96- 2 4试验 ,并观察蛭弧菌与病原菌、水质状况及鱼类发病情况变化之间的关系。试验结果表明 ,蛭弧菌对嗜水气单胞菌有较强的裂解和净化作用 ,对水中氨氮有一定的降解作用 。

蛭弧菌消除海产品中潜在致病性弧菌的研究

噬菌蛭弧菌具有裂解病原菌的特殊功效,可以用作生物净化因子。本实验从海洋环境中分离到4株Bh04系列蛭弧菌(Bh04-4,Bh04-41a,Bh04-A+和Bh04-1f)。以41株弧菌为蛭弧菌的宿主菌,本文研究了蛭弧菌对海产品中常见弧菌的裂解消除能力,以探索其对由弧菌所引起的食物中毒等流行性传染疾病的预防效果。实验结果表明,41株弧菌中共有36菌株可被4株蛭弧菌(Bh04-4,Bh04-41a,Bh04-A+和Bh04-1f)中的任一株所裂解,占总试验菌株的87.8%;对副溶血弧菌、非01非0139群霍乱弧菌、溶藻胶弧菌这三种常见致病弧菌的裂解率分别达88.9%、83.3%、81.8%。本研究结果揭示了蛭弧菌作为生物消除剂在由弧菌所引起的食物中毒等流行性传染疾病的防治方面有潜在应用价值。

蛭弧菌对草鱼免疫相关酶活性的影响

对草鱼基础饲料喷洒蛭弧菌制剂，喷洒量分别为0（对照）．2mg／g，5mg／g．8mg／g．10mg／g．于第21d，42d分别测定草鱼血清和肝脏中免疫相关酶的活性。结果表明．AKP活性变化特点是：肝脏中AKP活性在第2ld，42d时．实验组与对照相比，均有显著升高（P〈0．05）。血清中AKP活性，第21d时．实验组均呈现上升趋势．但与对照组相比无显著差异（P〉0．05）。第42d时．实验组与对照组相比．均有显著差异（P〈0．05）。ACP活性变化特点是：血清中ACP活性，第21d．42d时．实验组与对照组相比，均有显著差异（P〈0．05）。肝脏中ACP活性．第21d，42d时，实验组与对照组差异极显著（P〈0．01）。SOD活性变化特点是：第21d，42d时，肝脏和血清中SOD活性均有小幅度升高．但是实验组与对照组相比．均无显著差异（P〉0．05）。综合本次研究结果表明，饲料中添加蛭弧菌能对草鱼体内免疫相关酶系统产生积极地调理改善作用．使其非特异性免疫力得到改善与提高．结合养殖成本，建议其适宜添加量为5～8mg／g。

两株海洋蛭弧菌的分离及生物学性质

[目的]从深圳湾海泥中分离鉴定蛭弧菌，并对其生物学性质进行初步研究。[方法]通过稀释营养肉汤（dilute nutrient broth，DNB）双层平板法分离蛭弧菌，对所分离的菌株进行电镜形态观测，并进行16S rDNA测序分析，之后结合1994年版伯杰氏鉴定细菌学手册对菌株进行鉴定，最后通过生理试验对其生物学性质进行研究。[结果]从深圳湾海泥中分离出2株蛭弧菌，分别命名为5#-12和5#-sh06，它们可在20℃-35℃范围内生长，最适温度分别是25℃和30℃；生长pH范围6.1-8.6，最适pH均为7.2；2株蛭弧菌可分别裂解46和48株试验菌，各占总试验菌株数（58）的79.3%和82.8%；联合2株蛭弧菌，可裂解56株试验菌，占总试验菌株数的96.6%；同时，它们一起能将所有试验弧菌裂解。[结论]研究结果揭示了蛭弧菌作为一种生物净化因子具有极大的潜在应用价值。

应用蛭弧菌清除海产品潜在致病弧菌的研究

以从海洋环境中分离到4株蛭弧菌作为生物净化因子,对16株常见海产品潜在食源性致病弧菌进行裂解(消除)试验。结果表明,Bh04-41a、Bh04-4、Bh04-A+和Bh04-1f等4株蛭弧菌分别可裂解4、7、11、12株致病弧菌,裂解率为24%、43.8%、68.8%、75%;4株一起,则可裂解15株弧菌,裂解率高达93.8%。研究结果展示了蛭弧菌在消除海产品中潜在食源性致病弧菌的可行性。

噬菌蛭弧菌预防和治疗斑点叉尾鮰细菌性败血病的初步研究

进行噬菌蛭弧菌预防和治疗斑点叉尾鱼回细菌性败血病试验 ,结果 :在试验水体中加入嗜水气单胞菌对斑点叉尾鱼回进行感染 ,同时在水体中加入噬菌蛭弧菌 ,当水中的噬菌蛭弧菌浓度达到 10 5个 /ml以上时有预防斑点叉尾鱼回败血病的效果 ;采用背肌注射嗜水气单胞菌的方法对斑点叉尾鱼回进行感染 ,然后在水体中加入噬菌蛭弧菌 ,结果试验鱼全部死亡 。

噬菌蛭弧菌预防对虾弧菌感染的应用研究

采用16S rDNA特异引物对63F和842R对蛭弧菌标准菌株Bdellovibrio bacteriovorus 109-J和实验菌株Bd-9913进行了PCR鉴定,使用Bd-9913菌株分别对3株虾类病原菌溶藻弧菌Vibrio alginolysticus LS01、HF09,副溶血弧菌V.parahaemolyticusV28以及1株大肠埃希氏菌Escherichiacoli CH-42进行裂解。结果表明,105PFU/ml的Bd-9913对于109CFU/ml的宿主菌具有较好的裂解效果。采用3.0×105PFU/ml Bd109-J和Bd-9913分别与饲料混合(v/w)后投喂3.0g左右的凡纳滨对虾幼虾,14d内未发现对虾异常,且在对虾肠道内检测不到Bd109-J及Bd-9913,证明二者对于凡纳滨对虾幼虾是安全的。对正常养殖了50d的室外集约化虾池水体分别泼洒终浓度0.3mg/L的二氯异氰脲酸、0.3mg/L季胺盐络合碘和3.0×105PFU/ml蛭弧菌,后者对于抑制水体弧菌活菌浓度的效果明显优于化学消毒剂。当每隔20d左右分别进行一次上述水体处理,通过比较体内弧菌感染的对虾个体数,发现从肝胰腺分离到弧菌的对虾数量二者无显著差异,但从血淋巴分离到弧菌的对虾数量,蛭弧菌处理组显著少于化学消毒剂处理组,显示了蛭弧菌在预防对虾弧菌感染方面的优越性。

微生物实验创新教学中开设蛭弧菌实验研究

通过双层平板法分离蛭弧菌,经硝酸银染色法对蛭弧菌的形态进行观察,让学生在现有微生物实验教学条件下认识和了解蛭弧菌的生物特性。实验结果显示:双层平板法成功分离到能形成明显噬菌斑的蛭弧菌;通过制片和银染,在普通光学显微镜检下可清晰辨析蛭弧菌侵蚀大肠杆菌和鞭毛等显微结构。该实验为拓展蛭弧菌综合实验和充分发挥高校微生物实验教学平台服务于学生的作用奠定了基础。

大口鲶病原菌蛭弧菌的分离及其生物学特性研究

从患病南方大口鲶分离得到病原菌N1、N2、N3、N4,以N3为宿主菌,从鱼塘淤泥中分离到三株蛭弧菌。其中蛭弧菌Bd-tw7的宿主菌范围广泛,不仅能降解嗜水气单胞菌、N1、N2、N3、N4等鱼类病原菌,而且能降解大肠杆菌C600、金黄色葡萄球菌等细菌。其在1/10NB双层琼脂平板上形成圆形透明的噬菌斑,最适温度35℃,最适pH为7.5,短杆状,单极生鞭毛。在水体防病试验中,试验组的鱼存活率明显高于对照组(P<0.05)。

噬菌蛭弧菌和粘红酵母对中国对虾生长及非特异免疫因子的影响

将噬菌蛭弧菌(Bd)、粘红酵母(Rh)及二者混合物分别以1%的比例添加到中国对虾基础饲料里,同时以基础饲料为对照。采用连续投喂的方法,饲喂1.5cm左右的稚虾25d,分别测定第5、10、15、20和25天的酚氧化酶、超氧化物歧化酶、溶菌活力等免疫因子活性。试验结束后,试验组中Rh组存活率达到63%,Bd组和Bd+Rh组分别为45%和40%,二者间无显著差异(P>0.05)。投喂Rh组的增长率、增重率至少高于其他组10.72%和105.05%,比对照组高出36.37%和320.22%。试验组酚氧化酶活力、超氧化物歧化酶活力、溶菌活力从第10天起均高于对照组两倍左右。试验结果表明,饲养实验结束7d后,用鳗弧菌攻毒,在8d内,对照组的死亡率显著高于试验组(P<0.05),试验组免疫保护率为50%～65%,以Rh组最为显著。试验结果表明,微生态制剂能有效促进对虾的生长及提高免疫因子的活性;从免疫水平和生长水平综合考虑,建议单独使用粘红酵母,添加量为1%左右为宜。

蛭弧菌研究进展

蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)是一类专性捕食革兰氏阴性菌的寄生细菌,在自然界分布广泛。蛭弧菌研究集中在蛭弧菌分类和基因组分析上,并以此指导蛭弧菌噬菌机制的研究,同时在生态学研究方面也有进展。蛭弧菌的噬菌性质可能作为一种行使杀菌功能的"活抗生素"成为目前研究热点。但在应用方面还存在一些需进一步研究和解决的问题。

蛭弧菌AS212菌株的分离、鉴定及其裂解特性

从中华鳖(Trionyx sinensis)养殖池水中分离纯化到一株能裂解细菌的细菌AS212菌株,对其进行了形态观测和16S rRNA基因序列分析,构建了系统进化树,测定了其对不同来源菌株的裂解谱,分析了其对水体中细菌的裂解能力。结果表明,AS212菌株呈短杆状,端生单根鞭毛,直径0.6～0.7μm、长度1.0～1.2μm;该菌株不仅能裂解大肠埃希氏菌(Escherichia coli)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、弧菌等革兰氏阴性菌,还能裂解无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、芽孢杆菌等革兰氏阳性菌;基于细菌16SrRNA基因序列的同源性分析结果表明,该菌株与未得到培养物(uncultured bacterium)的2株细菌AB286342和AM490748同源性最高,为96%,但与所选的典型蛭弧菌亲缘关系较远,不能将其分类到已有的蛭弧菌相关的属中;其对养殖水体细菌裂解能力优于消毒剂。

应用蛭弧菌清除牡蛎中潜在致病弧菌的研究

本实验以从深圳湾海底沉积物中分离得到的两株蛭弧菌菌株506、菌株512,对31株常见的牡蛎致病弧菌进行了裂解能力实验,探索了它们的裂解谱。结果表明,蛭弧菌506可裂解31株试验宿主菌中的29株,512则可以裂解其中24株,而两株蛭弧菌的协同裂解能力高达100%。该结果展示了蛭弧菌在消除牡蛎致病菌及牡蛎活体内残留食源性致病菌的可行性。此外,我们测定了盐度对这两株蛭弧菌生长情况的影响,结果表明在10-45‰的盐度范围内,蛭弧菌均能生长,最适盐度为30‰;同时我们还研究了其对牡蛎养殖水体和肠道中副溶血弧菌的清除作用,数据表明蛭弧菌可以有效地清除牡蛎养殖环境和体内的副溶血弧菌,试验第7d,实验组水体中和牡蛎肠道副溶血弧菌浓度对数值比对照组分别低5.59和3.39,显示了其在清除牡蛎中弧菌的能力。