水产养殖用蛭弧菌类生物制剂的检测

通过双层平板法以不同细菌为宿主测定了8个厂家蛭弧菌类生物制剂的噬斑含量及噬斑分离物的宿主裂解范围;以3对靶向不同类群蛭弧菌类生物的特异引物对各产品及其噬斑分离物进行了PCR检测;对两株代表性蛭弧菌分离物的16S rRNA基因进行了测序,并通过构建蛭弧菌科进化树分析了它们的系统地位。结果表明,被检测的8个蛭弧菌类生物制剂中有6个质量明显不合格,仅两个样品被蛭弧菌科特异引物检测为阳性,被双层平板法证实有噬斑出现。其中一个样品JSF中存在两种形态和宿主范围不同的噬斑分离物,且不同宿主菌计数结果存在明显差异。16S rRNA基因序列分析表明这两种噬斑分离物JSF1和JSF2,分别属于蛭弧菌科的类群1(噬菌蛭弧菌)和未定种的类群5。但另一样品的噬斑分离物则被证实为非蛭弧菌类生物。

一株海洋蛭弧菌类生物对海水细菌的生物控制和水质的影响

研究了一株海洋蛭弧菌类生物(Bdellovibrio-and-like organisms,BALOs)DA5与溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)在海水中共培养时的相互作用;并研究了DA5对添加营养的自然海水中细菌的生物控制效果及对水体pH、化学需氧量(COD)、氨氮(NH3-N)和亚硝酸氮(NO2-N)含量的影响。结果表明DA5在振荡培养条件下对溶藻弧菌具有明显的裂解作用,较高的感染比有助于快速减少寄主菌,但长时间的共培养也不能完全清除溶藻弧菌。DA5对自然海水中异养细菌和弧菌均有一定的清除作用,且对弧菌的消减作用更明显,但对水体pH、COD、NH3-N和NO2-N含量均无显著影响,且BALOs含量总体上与细菌或弧菌的含量呈正相关。

海洋蛭弧菌类生物DA5对凡纳滨对虾育苗期幼体和水质的影响

以热灭活的溶藻弧菌Vibrio alginolyticus培养海洋蛭弧菌类生物菌株DA5,将其以高(11500pfu.mL-1)、低(1150pfu.mL-1)两种浓度加入凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei育苗用水中,研究了无节幼体培育到糠虾幼体期间DA5对幼体变态和存活、水体中异养细菌和弧菌含量、pH、化学需氧量(COD)和氨氮(NH3-N)含量的影响。结果显示,高浓度DA5可显著提高幼体存活和变态率,并在加入后3d内降低或显著降低水体异养细菌和弧菌含量,而低浓度DA5对试验期间幼体成活、变态及水体异养细菌和弧菌含量均无显著影响。除糠虾幼体Ⅰ—Ⅱ期高浓度处理组水体NH3-N含量有显著升高外,试验期间各组水体pH、COD和NH3-N含量均无显著差异。表明海洋蛭弧菌类生物DA5可作为一种较理想的生物控制因子应用于对虾育苗中。

蛭弧菌类生物噬菌特性及在畜禽养殖中的应用研究

作为一种普遍存在于自然界中的"细菌杀手",蛭弧菌类生物(BALOs)可裂解绝大部分的革兰阴性致病菌,具有不会产毒素的脂多糖和极低的外源DNA插入水平,所有这些都是作为"活抗生素"的有利条件;但不同来源BALOs的噬菌谱、对宿主菌的裂解程度、与宿主菌共同培养时各自数量的变化及其相互关系,以及各个环境中BALOs和细菌数量间的相关性都因地域和生长环境的不同而有显著差异,各种BALOs菌株最易感染,裂解率最高的宿主菌群尚不明确,不同来源BALOs噬菌范围和噬菌机制亦不很清楚。

四个类群海洋蛭弧菌类生物生长特性的比较

研究了噬菌弧菌科(Bacteriovoracaceae)4个类群共12株海洋蛭弧菌类生物(Bdellovibrio-and-like organisms,BALOs)的生长温度和盐度范围及其对6种常见对虾病原弧菌的裂解能力,并通过透射电镜分析了其中4个代表菌株的形态特征。结果表明,同一群或亚群内菌株的生长温度或盐度相同,即类群IV、VI、IX、X菌株的生长温度范围分别为20°C～35°C、15°C～35°C、15°C～40°C和10°C～40°C,最适生长温度为30°C或35°C;生长盐度范围分别为5‰～40‰、2.5‰～30‰、5‰～60‰和5‰～60‰,最适生长盐度分别为10‰、5‰、20‰和20‰。测试的6种弧菌中有3种可被全部BALOs裂解,而其它弧菌仅被部分BALOs裂解,但即使同一类群菌株,对某些弧菌也表现不同的裂解能力。形态上,4株不同类群BALOs均呈典型的弧状细胞,具极生单鞭毛。

湛江海水虾池免培养蛭弧菌类生物的多样性

【目的】揭示湛江地区海水虾池蛭弧菌类生物(Bdellovibrio-and-like organisms,BALOs)多样性特点,为了解BALOs在虾池生态系统中的作用与合理应用其防治养殖对虾细菌病害提供基础。【方法】从8个热带海水虾池采集水样,提取总DNA,利用BALOs科特异引物对水样总DNA进行扩增,通过构建16S rRNA基因克隆文库与系统发育分析,对虾池水体BALOs多样性和种群结构进行研究。【结果】从嗜盐噬菌弧菌科(Halobacteriovoracaceae)和吞菌弧菌科(Peredibacteraceae)克隆文库中分别获得726个和664个有效克隆子,在16S rRNA基因序列99.5%相似性水平上分别划分为68和44个OTUs(operational taxonomic units)。在16S rRNA基因序列97%相似性上,嗜盐噬菌弧菌可划分为37个种群,且绝大多数属于未培养型,但仅有的5个可培养类群占总文库克隆数量43.5%,其中可培养类群IX和未培养类群B28分别是最优势和次优势者;吞菌弧菌文库共包含28个种群,未培养类群pa12最为优势,唯一可培养类群A3.12是第2优势者。嗜盐噬菌弧菌与吞菌弧菌多样性大小随盐度高低呈相反趋势,但两者合起来的总BALOs多样性大小在不同虾池间则比较接近。【结论】湛江地区海水虾池中普遍存在高度多样的嗜盐噬菌弧菌和吞菌弧菌种群,盐度显著影响虾池BALOs种群结构组成。

刺参消化道中蛭弧菌类的生物多样性分析

研究了刺参消化道中蛭弧菌类生物多样性。用刺参肠道内容物提取微生物总DNA,分别使用蛭弧菌类生物特异性引物Bd、Bac扩增获得16S r DNA目的片段,连接p MD19-T载体,转化到大肠埃希菌DH5α感受态细胞,经蓝白斑筛选及阳性克隆筛选,通过核糖体DNA扩增片段限制性内切酶分析(ARDAR)对阳性克隆进行分型,使用HaeⅢ和MspⅠ双酶切各60个阳性克隆,选取不同ARDAR型的阳性克隆测序,并进行生物学分析。结果显示:引物Bd、Bac的16S r DNA扩增产物分别分离获得3个和2个差异性序列,各属于一个类群,分属于蛭弧菌属(Bdellovibrio)和噬菌弧菌属(Bacteriovorax)。这些序列与数据库中相应菌株序列的最大相似性均为95.0%,这5个序列的菌株可能为潜在的新种。

ARDRA分型测定刺参养殖环境中蛭弧菌多样性

【目的】研究刺参养殖环境中蛭弧菌类微生物的多样性及其组成特征。【方法】对刺参养殖用水进行过滤,获得微生物并提取其总DNA,分别采用两对特异性引物Per和Bac扩增蛭弧菌类微生物相应的16S r RNA基因目的片段。通过核糖体DNA扩增片段限制性内切酶分析(ARDRA)方法,使用HaeⅢ和MspⅠ,双酶切各60个目的基因的单克隆,选不同条带克隆进行测序并对测序结果的多重序列分析比对。【结果】确定两对引物分别存在8和9种碱基差异序列,均属于噬菌弧菌属,分属于3个类群中。类群Ⅰ、Ⅱ为优势类群,且均为已知类群,类群Ⅲ为潜在的新类群;Per1(KP214541)和Bac44(KP214551)代表菌株分别为优势种。【结论】刺参养殖环境中蛭弧菌具有较高的多样性,包括已知类型和未知类型的蛭弧菌;可进一步进行蛭弧菌的分离、培养,用于刺参养殖中病害防治研究。