蛹虫草提取物对肾阳虚模型大鼠睾丸CYP19/CaM/CaMKⅡ信号的影响

目的明确蛹虫草提取物补肾阳的功效及潜在作用机理。方法60只SD大鼠分为正常组、模型组、睾丸片组(0.216 g/kg)、蛹虫草提取物高、中、低剂量组(0.72、0.36、0.18 g/kg),每组10只。除正常组外,其余组均采用腺嘌呤(200 mg/kg)灌胃的方法建立肾阳虚大鼠模型,于造模第15天起开始给予受试药,连续28 d。采用ELISA试剂盒检测大鼠血清促性腺激素释放激素(GnRH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)、雌二醇(E2)水平,HE染色观察肾、睾丸、附睾、精囊腺的组织形态,免疫组化和Western blot法检测睾丸CYP19、CaM、CaMKⅡ表达,RT-qPCR检测睾丸CYP19 mRNA表达。结果与正常组相比,模型组大鼠血清GnRH、LH、T水平均显著降低(P<0.05),肾、睾丸、附睾、精囊腺组织均有明显损伤,睾丸CYP19表达降低(P<0.01)、CaM和CaMKⅡ表达显著增加(P<0.01),CYP19 mRNA表达显著降低(P<0.01);与模型组相比,蛹虫草提取物高剂量组GnRH、LH、T含量均升高(P<0.05),组织损伤缓解,睾丸CYP19表达增加(P<0.05),CaM和CaMKⅡ降低(P<0.05),CYP19 mRNA水平增加(P<0.05)。结论蛹虫草提取物通过调控CYP19/CaM/CaMKⅡ信号发挥补肾阳功效。

蛹虫草提取物对高糖诱导内皮细胞衰老的影响

目的:探讨蛹虫草乙酸乙酯提取物(CME)对高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的影响。方法:用高糖(40mmol/L)诱导建立HUVECs衰老体外模型,以冬虫夏草提取物(CSE)(50μg/mL)为阳性对照,观察CME(12.5～100μg/mL)对内皮细胞衰老的干预作用。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖;SA-β-半乳糖酐酶(SA-β-gal)染色法检测细胞衰老特异性的SA-β-gal活性;流式细胞术检测细胞周期分布和细胞内活性氧(ROS)含量。结果:经高糖干预24、48、72h后,HUVECs增殖活性OD值明显低于对照组;而且在高糖孵育96h后,SA-β-gal染色阳性细胞率明显增加;孵育48h后,处于G0/G1期细胞的百分率和ROS相对水平明显增加(P<0.01)。与高糖组相比,CME(25～50μg/mL)孵育48和72h后细胞OD值显著提高(P<0.05);CME(12.5～100μg/mL)孵育96h后SA-β-gal染色阳性细胞率显著降低(P<0.01);孵育48h后G0/G1期的细胞百分率(P<0.01)、细胞内ROS水平显著降低(P<0.05);CME 25、50μg/mL效果优于CME 12.5、100μg/mL(P<0.05),且与CSE 50μg/mL作用相近(P>0.05)。结论:蛹虫草乙酸乙酯提取物可促进内皮细胞生长增殖,可能与其降低细胞内ROS水平,减轻细胞氧化应激损伤有关,从而减轻内皮细胞衰老。

蛹虫草水提物细胞毒性和抗氧化能力的评价

为了更好地利用蛹虫草资源,对鲜蛹虫草、干蛹虫草水提物的细胞毒性和抗氧化能力进行评价。按照体质量分别对6组试验小鼠腹腔注射200 mg/kg鲜蛹虫草水提物、200 mg/kg干蛹虫草水提物、10 mL/kg无菌水、4 mg/kg丝裂霉素C、200 mg/kg鲜蛹虫草水提物+4 mg/kg丝裂霉素C和200 mg/kg干蛹虫草水提物+4 mg/kg丝裂霉素C,测定试验组和对照组小鼠骨髓中嗜多染红细胞与成熟红细胞的比值,用于评价鲜、干蛹虫草的细胞毒性。按照体质量对阴性对照组小鼠灌饲生理盐水,模型对照组小鼠先后腹腔注射80 mg/kg的环磷酰胺并灌饲生理盐水,对试验组小鼠分别先后腹腔注射80 mg/kg的环磷酰胺及灌饲100 mg/kg、200 mg/kg的鲜蛹虫草和干蛹虫草水提物,测定对照组和试验组小鼠心脏、肝脏和肾脏组织中超氧化物酶歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶和丙二醛的含量,用于评价鲜、干蛹虫草抗氧化能力。试验结果表明,鲜、干蛹虫草水提物对细胞无遗传毒性,并具有抗细胞毒性和抗氧化能力,而且鲜蛹虫草抗氧化能力强于干蛹虫草,更适宜作为功能性食品资源。

蛹虫草菌株发酵液和菌丝提取物的抑菌活性初探

研究蛹虫草(Cordyceps militaris)的发酵液和菌丝提取物的抑菌效果,为蛹虫草抑菌活性物质的开发利用提供基础资料。采用滤纸柱、海绵柱和花泥柱3种方法检测其抑菌效果,结果表明蛹虫草发酵液及菌丝提取物对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)均有一定抑制作用,其中菌丝提取物抑菌作用较强;对大肠杆菌的抑制强于对金黄色葡萄球菌的抑制。抑菌效果检测方法以滤纸柱法检测效果较好,花泥柱法次之,海绵柱法较差。

蛹虫草提取物对H22小鼠抗氧化能力的影响

目的探讨蛹虫草提取物抗肿瘤作用的特点。方法采用化学比色法分别测定蛹虫草提取物对H22荷瘤小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),过氧化氢酶(CAT),丙二醛的影响(MDA),对肝脏中SOD,GSH-Px的影响。结果蛹虫草提取物可使小鼠血清中SOD,GSH-Px,CAT,肝脏中SOD,GSH-Px水平明显升高;使血清中MDA水平降低。结论蛹虫草提取物通过调整荷瘤动物的抗氧化能力而达到抗肿瘤作用的目的。

蛹虫草、山楂提取物固体饮料制备工艺研究

以水提醇沉法提取得到蛹虫草提取物和山楂提取物,分别对其主要活性成分进行测定。结果表明:蛹虫草提取物、山楂提取物均含总糖(44.53%、43.78%)、还原糖(6.90%、8.08%)、蛋白质(31.19%、3.87%)、黄酮(1.20%、2.16%)等活性成分。利用蛹虫草提取物、山楂提取物研制固体饮料,以感官评价为标准,采用单因素、正交试验方法优化蛹虫草、山楂提取物固体饮料配方,结果表明:将蛹虫草提取物0.5 g、山楂提取物2.0 g、木糖醇2.0 g、柠檬酸0.05 g溶于100 mL热水中,在此条件下,该固体饮料溶解度为98.35%,外观形态、色泽、风味、口感均为最佳,且符合GB/T29602-2013《固体饮料》标准。

蛹虫草提取物对大气细颗粒物PM2.5致小鼠肺损伤的干预作用研究

观察蛹虫草提取物对PM2.5致小鼠肺损伤的干预作用。采用气管滴注法构建PM2.5致肺损伤小鼠模型;收集小鼠肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)进行炎性细胞计数;测定BALF中酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性;酶联免疫法测定血清中免疫球蛋白IgA、IgG、IgM、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-2含量;测定小鼠肺组织总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxidase dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果表明,PM2.5染毒能够造成BALF中炎性细胞数目增加,蛹虫草提取物可以减少炎性细胞募集。PM2.5染毒后,肺泡灌洗液中ACP、AKP、LDH活性升高,不同剂量蛹虫草提取物可以减少上述酶渗漏。不同剂量蛹虫草提取物可显著提高PM2.5染毒引起的血清中IL-6、TNF-α、IgA、IgM、IgG水平。PM2.5染毒后,肺组织T-AOC、SOD、CAT、GSH-Px活性降低,MDA含量升高,蛹虫草提取物能够拮抗上述变化。PM2.5暴露可致小鼠肺组织炎性损伤和氧化损伤,蛹虫草提取物能够减轻此损伤作用,其保护机理与其抗氧化和抗炎活性相关。

蛹虫草提取物联合地塞米松抑制大鼠角膜新生血管

目的:观察蛹虫草提取物(cordyceps militaris extract,CME)联合地塞米松(dexamethasone,Dex)对大鼠角膜新生血管的抑制作用。方法:对48只大鼠采用碱烧伤法制作大鼠角膜新生血管模型,后随机分为3组:A组为模型对照组,B组为CME治疗组,C组为CME联合Dex治疗组。造模后每组均隔日注射给药,A组给予生理盐水结膜下注射,B组给予CME10mg球结膜下注射,C组给予CME10mg球结膜下注射,另外给予0.25g/L Dex滴眼液点眼,3次/d。于术后4,8,14d测量角膜新生血管的生长面积,并测量角膜组织中VEGF及其mRNA的表达情况。结果:造模后联合用药组的大鼠角膜新生血管生长面积较模型对照组及CME治疗组明显减少,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:CME联合Dex更能明显抑制碱烧伤所致大鼠角膜新生血管的生长。

蛹虫草提取物抑制大鼠角膜新生血管的实验研究

目的研究蛹虫草提取物(cordyceps militaris extract,CME)对碱烧伤所致大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)的抑制作用。方法采用碱烧伤法制作大鼠CNV模型,75只大鼠随机分为5组:A组为模型对照组,B组为阳性对照组,C组、D组、E组分别为高、中、低剂量CME治疗组,造模后每组均隔日给药,A组给予生理盐水结膜下注射,B组给予0.5g·L-1地塞米松结膜下注射,C组、D组、E组分别给予10.0mg、5.0mg、2.5mg CME结膜下注射。于造模后第4天、第8天、第14天测量CNV的生长面积,并检测角膜组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)蛋白及其mRNA的表达情况。结果造模后第4天,C组、D组、E组的CNV面积分别为(4.23±1.62)mm2、(6.15±3.52)mm2、(7.78±1.33)mm2,第8天分别为(6.89±1.93)mm2、(10.19±3.37)mm2、(11.51±3.70)mm2,第14天分别为(12.55±3.96)mm2、(17.14±2.71)mm2、(19.77±5.75)mm2,均较A组(12.03±2.09)mm2、(22.09±4.24)mm2、(25.19±2.22)mm2明显减少,差异均有统计学意义(均为P<0.05);C组与B组表达水平相当,差异无统计学意义(P>0.05)。C组、D组、E组角膜组织中VEGF蛋白及其mRNA的表达较A组明显减少,差异均有统计学意义(均为P<0.05);C组与B组表达水平相当,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CME能有效抑制碱烧伤所致大鼠CNV的形成,抑制角膜组织中VEGF的表达可能是其抑制CNV生长的机制之一。

蛹虫草提取物泡腾片的制备工艺优化及其质量分析

为制备蛹虫草提取物泡腾片,以感官评价、崩解时限、硬度为考察指标,利用正交试验优化蛹虫草提取物添加量、泡腾崩解剂酸碱比例、泡腾崩解剂总质量以及甜味剂添加量,采取酸碱混合非水制粒的方法制得蛹虫草提取物泡腾片,并对其进行质量分析.正交试验结果表明,制备泡腾片原辅料最佳配比为:蛹虫草提取物11%、柠檬酸和碳酸氢钠的比例1.3:1(质量比)、泡腾崩解剂总质量50%、甜味剂阿斯巴甜0.25%.按最佳工艺制得的泡腾片外观光滑完整,大小和色泽均匀,溶液澄清透明呈酸性,味道酸甜可口,并伴有蛹虫草特有香味,平均硬度在50 N以上,发泡量为23.95 mL/g,重量差异、崩解时限均符合2015年版中国药典要求,虫草多糖含量为10.01 mg/g,虫草素含量为0.65 mg/g.

硒对蛹虫草菌丝代谢和总抗氧化能力的影响

采用在培养基中添加亚硒酸钠的方法来研究硒对蛹虫草菌丝代谢和总抗氧化能力的影响。结果表明:培养基加硒浓度为1mg/L范围内,对蛹虫草菌丝生长有促进作用,加硒浓度为5mg/L^20mg/L时,对蛹虫草菌丝胞外多糖的分泌有促进作用,当培养基加硒浓度为20mg/L时胞外多糖产量最高;培养基加硒浓度为0mg/L^30mg/L时,对蛹虫草菌丝提取物总抗氧化能力均有显著的增强作用,当加硒浓度为15mg/L时,蛹虫草菌丝提取物总抗氧化能力达到最大。

人工蛹虫草子实体对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

目的:观察人工蛹虫草子实体及其不同提取物对正常小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,分析其影响免疫功能的有效提取部位。方法:以不同浓度提取物与脾细胞共孵育72h,采用MTT法测定淋巴细胞的增殖,观察提取物对淋巴细胞增殖的影响。另以10mg·kg^(-1),30mg·kg^(-1)剂量人工蛹虫草子实体的水提取物及微粉化原药水溶液小鼠ig给药11d。制备脾淋巴细胞悬液,培养72h后测定细胞增殖。结果:在体外,水提取物有显著增强脾淋巴细胞增殖效应,且与ConA和LPS有协同促增殖效应,水提醇沉提取物可促进正常淋巴细胞增殖,而对ConA、LPS活化后的增殖无明显影响;甲醇提取物对淋巴细胞增殖有抑制作用。体内给予水提物和子实体微粉水溶液两个剂量也均显示促进淋巴细胞的自然增殖作用(P＜0．05),但对ConA或LPS活化后的淋巴细胞无协同作用。结论:人工蛹虫草子实体含有免疫促进和免疫抑制的成分。其水溶性和中等浓度的醇溶性成分有免疫促进作用。甲醇提取物抑制淋巴细胞增殖。

蛹虫草MF27高抗氧化活性提取物筛选及保肝作用研究

本研究对一株优质蛹虫草菌株MF27不同提取物进行体外抗氧化活性比较,筛选得到高抗氧化活性提取物,并进一步探究该提取物对CCl_4诱导的小鼠肝损伤的修复作用。以DPPH自由基和羟自由基的清除率为抗氧化评价指标,从菌丝体发酵液、菌丝体水提物/醇提物、以及子实体水提物/醇提物中筛选菌株MF27的高抗氧化活性提取物;以CCl_4致小鼠急性肝损伤为模型,通过检测血清生化指标、肝功指标的变化,来评价该高活性提取物的体内抗氧化保肝效果。体外抗氧化实验结果表明,MF27的不同提取物均具有较好的体外抗氧化活性,但对清除DPPH和OH自由基能力最好的提取物是子实体水提物,其对DPPH自由基的半数有效浓度(EC50)为0.096mg/mL,对羟自由基的半数有效浓度(EC50)为0.196mg/mL,当在1mg/mL时对DPPH自由基的清除率为94.94%,对羟自由基的清除率为70.17%;体内抗氧化保肝结果显示,给药组(子实体水提物)相比模型组而言,小鼠血清中ALT、AST以及肝脏中MDA水平极显著降低(P<0.01)、SOD水平极显著升高(P<0.01),表明子实体水提物能有效改善氧化性肝损伤,同时与阳性对照(联苯双酯)对比,给药组在肝脏指数上表现出相当的作用(P>0.05)。本研究表明菌株MF27的最有效抗氧化活性提取物是子实体水提物,它对体内氧化性肝损伤有一定的修复能力,揭示MF27子实体水提物具有成为抗氧化性肝损伤功能产品的潜力。

产2，6-吡啶二羧酸的虫生真菌Watanabe N等

从蛹虫草（Cordyceps militaris）的培养基滤液中分离出一种蚕蛹提取物中酚氧化酶原活化系统的抑制剂，经鉴定该物质为吡啶二羧酸（DPA）。