蛹虫草固体发酵培养基多糖的分离纯化及组成分析

为研究蛹虫草固体发酵培养基中多糖的分离纯化及组成,本实验利用水提醇沉法与Sevage法相结合,得到蛹虫草固体发酵培养基粗多糖(CMSMP)。经DEAE-cellulose52柱层析分离得到纯化蛹虫草固体发酵培养基多糖组分(CMSMP1)后,采用紫外光谱、醋酸纤维素薄膜电泳和SephadexG-150凝胶柱层析鉴定其纯度,高效液相色谱及红外光谱分析其组成、结构。结果表明,CMMSP1为均一多糖,且由木糖、阿拉伯糖和葡萄糖三种单糖组成。同时红外光谱显示,CMSMP1具有典型多糖吸收峰。

青梅和蛹虫草培养基复合发酵酒的制备工艺及其抗氧化效果

为开发出一种新型的青梅酒产品,减轻蛹虫草在栽培过程中因废弃培养基而产生的资源浪费和环境污染,促进青梅和蛹虫草产业可持续发展。采用青梅与蛹虫草培养基作为发酵原料,运用单因素试验和正交试验,研究筛选并提出青梅和蛹虫草培养基复合发酵酒的最佳工艺。结果表明,在A_(3)B_(3)C_(3)(青梅和蛹虫草培养基比例为7:3、初始糖度为25%、果胶酶进行酶解)条件下,制得的青梅和蛹虫草培养基复合发酵酒口味独特,营养丰富,香气馥郁,具有典型的青梅果香。酒精度为8.14%vol,感官评分92.83,对于ABTS+·自由基、亚硝基、DPPH自由基、超氧阴离子和羟基自由基的清除率均在90%以上,表现出很强的抗氧化能力。采用模拟体内实验初步探究了青梅和蛹虫草培养基复合发酵酒与胆酸盐结合的能力,结合率均高于60%,说明果酒具有良好的降血脂功效。

蛹虫草-浙贝母-黑豆菌质固体双向发酵工艺及其抗肿瘤活性研究

为实现浙贝母、黑豆高值化利用,开发一种具有抗肿瘤功效的蛹虫草菌质,将浙贝母-黑豆(浙贝母黑豆=21,质量比)作为蛹虫草(Cordyceps militaris)菌株发酵基质,以多酚含量为评价指标,采用单因素及响应面试验方法优化蛹虫草-浙贝母-黑豆菌质固体双向发酵工艺,采用MTT法测定发酵菌质体外抗肿瘤活性。结果表明,最佳发酵条件为料液比11.2(g/mL),接种量20 mL/100 g,培养温度21℃,培养时间29 d。优化条件下,菌质中多酚含量(6.24 mg/g)与模型预测值(6.35 mg/g)偏差为1.78%,且显著高于基质中多酚含量(1.19 mg/g);发酵菌质具有一定的体外抗肿瘤活性,其水提物对S180肿瘤细胞体外增殖抑制率表现出良好的量效及时效关系,以质量浓度相当于生药量200 mg/mL的水提液作用48 h条件下的细胞增殖抑制率最强,达到了73.08%,且在相同质量浓度及作用条件下,发酵菌质对S180肿瘤细胞的体外增殖抑制率是基质的1.10~1.88倍。

关于蛹虫草菌多糖发酵及培养基的研究

研究了蛹虫草胞外多糖发酵过程,分析不同因素对胞外多糖得率的影响,获得了比较适宜的培养基组成和发酵条件。蛹虫草胞外多糖优化发酵培养基组成为:蔗糖12%,玉米浆2%,酵母膏2%,硝酸钾0.45%;发酵培养条件为:pH值6.5,温度20℃;此条件下蛹虫草胞外多糖得率为1.188g/100mL,菌丝体干重为1.221 g/100mL。

不同种类氨基酸对蛹虫草发酵液中虫草素含量的影响

[目的]研究液体培养基中添加氨基酸对蛹虫草发酵液中虫草素含量的影响,并确定8种氨基酸最佳添加浓度。[方法]考察24种氨基酸(添加浓度为1 g/L)对虫草素含量的影响,采用DPS V18.10软件进行差异显著性分析,并对促进虫草素合成作用显著的8种氨基酸添加浓度进行研究。[结果]L-赖氨酸、L-半胱氨酸、L-精氨酸、L-天门冬酰胺、L-甘氨酸、L-丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-组氨酸、肌氨酸对蛹虫草发酵液中虫草素含量具有不同程度的提高作用;4 g/L的L-甘氨酸对虫草素的合成促进作用最强,发酵液中虫草素含量为1022.25 mg/L。[结论]该研究为蛹虫草液体发酵生产虫草素提供参考依据。

蛹虫草培养基多糖的提取及抗肿瘤活性研究

为综合利用蛹虫草小麦培养基,研究培养基多糖的提取和开发。在热回流水提法和超声波水提法单因素试验的基础上,采用热回流水提法正交试验筛选蛹虫草小麦培养基粗多糖最佳的提取工艺;用MTT法检测了不同处理提纯多糖的抗肿瘤活性。结果表明热回流水提法提取培养基粗多糖效果优于超声波水提法;提取温度100℃、料液比1 g∶25 mL、提取3次、每次提取时间90 min,为最佳培养基粗多糖提取工艺;影响粗多糖提取效率的4个因素的主次关系是:提取温度>提取时间>提取次数>料液比;粗多糖的得率随着醇沉浓度的提高而提高。MTT试验发现质量浓度为5 mg/mL、培养时间72 h,培养基脱脂脱蛋白多糖A对HepG2肝癌细胞抑制率可达到83.02%,培养基脱脂多糖B的抑制率可达到75.39%,培养基未脱脂脱蛋白粗多糖C抑制率为30.61%,提纯多糖表现出较高的抑制率;100℃热回流水提蛹虫草子实体脱脂脱蛋白多糖F,质量浓度为5 mg/mL、培养72 h后,对Hepg2细胞抑制率平均值达到92.974%,与对照顺铂(SB)无显著差异,与多糖A差异显著。

蛹虫草(Cordyceps militaris)菌丝体液体培养基的优化和发酵条件的研究

采用二次回归通用旋转组合设计方法，对蛹虫草菌丝体液体发酵培养基的最佳组合进行了研究，建立了培养基的反应模型，并用实验数据验证了数学模型，对培养基最佳优化组合的各种因子、影响产量的反应规律及交互作用进行了探讨，并在此基础上进行了蛹虫草菌丝体液体发酵条件的研究。结果表明，蛹虫草菌丝体液体发酵的最适条件为：接种量６％（ｖ／ｖ），发酵初始ｐＨ７．０，培养基装量１００ｍｌ／５００ｍｌ三角瓶，发酵温度２４℃～２８℃，发酵周期９６ｈ。

蛹虫草发酵罐培养生产虫草多糖和虫草素条件的研究

采用摇瓶培养法通过单因素试验和正交设计试验初步拟定蛹虫草的发酵罐培养条件.基本上罐条件为初始pH6.5,温度21℃,转速150rpm,培养时间5d.在此基础上分别以菌量、多糖和虫草素为指标,调整通气量和装液量.当以获得菌量和多糖为目的时,通气量为0.9m3/h、装液量70%.若以得到虫草素为目的,通气量调整为0.7m3/h、装液量70%.

北虫草液体发酵产多糖培养基优化研究

通过单因子试验和正交试验确定了以蔗糖3%、蛋白胨1%、KH2PO40.1%为主的发酵培养基,在培养条件为25℃,转速150 r/min,接种量5%,摇床振荡培养4d,发酵液多糖产量较高。

蛹虫草无性型的研究 Ⅱ.液体发酵培养菌丝体及胞外多糖的提制

为开发利用蛹虫草及其制品提供新的思路，对蛹虫草液体深层发酵进行了研究．正交试验结果表明，最佳培养基组成是：５％大米粉、１．５％豆饼粉、１．５％麦芽粉、０．１％ＫＨ２ＰＯ４，０．０５％ＭｇＳＯ４７Ｈ２Ｏ．中试发酵液中干菌丝得率为３８．５１ｍｇ／ｍＬ，胞外多糖的质量浓度为４．９８ｍｇ／ｍＬ．此外，还探讨了胞外多糖的提制工艺．

蛹虫草产胞外多糖发酵培养研究

[目的]对蛹虫草产胞外多糖发酵培养进行研究。[方法]通过响应面方法分析蔗糖、蛋白胨和KH2PO43个主要因素对蛹虫草产胞外多糖得率的影响,以获得比较适宜的培养基组成。另外,对发酵培养的条件进行了研究。[结果]蛹虫草胞外多糖优化发酵培养基组成为:蔗糖2.00%,蛋白胨1.50%,KH2PO40.05%,酵母粉0.20%,硫酸镁0.01%;发酵培养的适宜条件为:pH值6.8,温度28℃。在上述条件下蛹虫草胞外多糖得率为19.4 g/L。[结论]得到蛹虫草产胞外多糖的优化工艺条件,为上罐提供理论依据。

蛹虫草大米培养基中多糖提取及初步纯化工艺

以蛹虫草培养基为材料,确定硝酸钙提取法去除其中淀粉的最佳条件,进而采用正交试验法提取多糖,Sevag法除蛋白,为培养基中多糖的提取及初步纯化提供依据。将80%Ca(NO3)2按料液比1∶20(g∶mL)在100℃条件下水浴提取3次,淀粉的去除率达42.57%。多糖提取的最优条件为料液比1∶30(g∶mL),在100℃浸提3 h,提取2次,提取率为3.31%。多糖溶液与Sevag试剂按1∶3比例提取1次,脱蛋白率可达94.2%,而多糖损失率仅为20.95%,效果较好。

蛹虫草大米培养基中活性多糖的提取及免疫调节功能研究

为探讨从蛹虫草大米培养基中提取其活性多糖的可行性、验证蛹虫草大米培养基活性多糖对小鼠免疫调节功能的调节作用。采用正交实验法优化蛹虫草大米培养基活性多糖提取工艺,用血凝法检测血清溶血素的水平,用M TT法测定了脾淋巴细胞的转化。结果表明,蛹虫草大米培养基活性多糖的最佳提取条件是乙醇浓度95%、提取4次、提取温度90℃,其提取率为0.74%;蛹虫草大米培养基活性多糖能显著提高小鼠的血清溶血素含量,促进小鼠的脾淋巴细胞转化能力。

响应面优化酶法提取蛹虫草培养基多糖的研究

[目的]通过响应面法优化酶提取蛹虫草培养基中虫草多糖的条件。[方法]测定蛹虫草培养基成分,并用酶法提取培养基中虫草多糖,对其提取条件进行单因素试验,筛选出最佳水解酶。在单因素试验的基础上,以响应面法优化温度、pH、酶加量和料液比等4个因素,并对试验结果进行数学模拟和预测,优化各因素水平,探讨因素间的交互作用。[结果]提取培养基中虫草多糖的最佳水解酶确定为酸性蛋白酶,其提取虫草多糖的最优条件为:温度39.89℃,pH 3.12,酶加量2.39%,料液比1∶75.78,水解时间4 h,在该条件下预测的多糖得率为10.11%。按该最佳条件进行验证试验,提取的多糖平均得率为9.96%,表明所得最佳提取条件比较可靠。[结论]该试验优化了蛹虫草培养基多糖的提取条件,对蛹虫草培养基的利用及虫草多糖的生产具有一定的理论指导价值。

蛹虫草培养基多糖的超声波提取及抗氧化性研究

研究用超声波提取蛹虫草培养基中粗多糖的工艺条件,并比较了该多糖与蛹虫草子实体多糖的抗氧化性。结果表明:在料液比1∶30(质量比),乙醇用量15 mL,超声波功率70 W,超声时间90 min的条件下,蛹虫草培养基中多糖含量为3.30%。在0.2 mg/mL～1.0 mg/mL浓度范围内蛹虫草培养基多糖与子实体多糖抗氧化能力相似,且具有一定的量效关系。红外显示两种多糖结构相同。

蛹虫草固体培养菌质粗多糖提取与分离工艺研究

为探明蛹虫草固体发酵新型培养基菌质中多糖的含量及结构,并探明回流提取方法对此类培养基中多糖提取的条件。采用正交实验确定最佳提取条件,采用苯酚-硫酸法测定菌质中的多糖含量,并用阴离子交换柱进一步分离粗多糖。结果:回流提取的最佳条件为80℃下,料液比1?20回流提取2h,提取次数为3次。在此条件下多糖含量为6.93%。其DPPH清除率可达50%以上,粗多糖经阴离子柱分离得到3种不同的糖蛋白。结论:该实验方法操作简易,条件易控制,结果精准,适合此种培养基中蛹虫草多糖的测定及分离纯化。

戴氏虫草产多糖的固体发酵工艺优化

以大米为原料进行戴氏虫草真菌发酵,通过优化发酵条件提高戴氏虫草多糖含量。采用单因素实验和多因素实验优化戴氏虫草产多糖的固体发酵条件。Plackett-Burman试验结果表明,影响戴氏虫草多糖含量的主要因素是发酵温度、接种量和料水比。最陡爬坡试验和Box-Behnken试验得出产戴氏虫草多糖的最适条件为:发酵温度25℃,接种量8%,料水比(g/mL)=1:1.5,基质重量10 g,发酵时间5 d,得到的戴氏虫草多糖含量为5.31%±0.11%,与理论值的误差为0.93%±1.8%。本文旨在为戴氏虫草多糖的工业化生产提供理论依据,同时为其它虫草真菌固体发酵生产虫草多糖提供理论参考。

蛹虫草菌深层发酵培养基正交试验

通过选择碳、氮、无机盐的三因素三水平正交试验 ,对蛹虫草 2 0 0 1-A深层发酵培养基进行优化。经过对菌丝体干重的测量及分析得出最适培养基组成为玉米粉 2 %、蛹粉 0 5 %、Mg SO4 0 0 5 %。菌丝体干重可达 0 812g/ 5 0ml (4天 )。

高产蛹虫草菌株发酵培养基的研究

在单因素试验初步确定高产蛹虫草菌株发酵培养基的基础上,以蛹虫草菌丝体中腺苷含量为指标,进行11因素2水平Plackett-Burman试验设计试验,结合多元一次回归模型和F检验方法,筛选出发酵培养基中影响显著的组分酵母浸粉、蔗糖和维生素B_1,采用旋转中心组合设计方法对这三个组分进行进一步优化,结合多元二次回归模型和响应面分析,获得高产蛹虫草菌株的最佳培养基(g/L):蔗糖18.85、蛋白胨10、酵母浸粉18.97、KH_2PO_4 3、MgSO_4 3、维生素B_1 0.235、ZnCl_2 0.011、(NH_4)_2SO_4 10。验证试验结果表明蛹虫草腺苷得率较单因素优化获得的发酵培养基提高了26.91%。

一株虫草类真菌的液体发酵产胞内多糖培养基的优化

采用液体发酵法培养虫草真菌菌丝体。以虫草真菌胞内多糖量为指标,通过单因素试验,表明玉米淀粉为最佳碳源,酵母粉为最佳氮源,酵母膏为最佳生物素,最适pH为7.0;正交试验表明最适虫草真菌产胞内多糖培养基配方为:玉米淀粉5%,酵母粉2%,酵母膏0.1%,KH2PO4 0.1%,MgSO4.7H2O 0.05%,pH 7.0。