超声辅助酶法提取金环胡蜂蜂房多糖的工艺优化及抗氧化性研究

优化超声辅助酶法提取金环胡蜂蜂房多糖(vespa mandarinia nidus polysaccharides,VMNP)工艺条件,并分析其多糖抗氧化性,为开发利用VMNP提供参考依据。在单因素实验考察液料比、超声温度、超声时间、纤维素酶用量对VMNP提取量影响的基础上,采用响应面法优化VMNP的最佳提取条件;并以维生素C为对照,通过测定VMNP对DPPH自由基(DPPH·)和羟基自由基(·OH)的清除率,考察VMNP的抗氧化活性。结果表明:超声辅助酶法提取VMNP的最佳条件为液料比43∶1(mL/g)、超声温度46℃、超声时间47 min、纤维素酶用量4.10%,在该条件下VMNP提取量为(31.86±0.08)mg/g;所提取的VMNP对DPPH·和·OH均表现出较好的清除能力,当VMNP溶液质量浓度为0.03140 mg/mL时,对DPPH·和·OH的清除率分别达到同浓度下维生素C的80.26%和69.38%。采用超声辅助酶法能够有效提取VMNP,VMNP具有一定的抗氧化性,VMNP可作为一种抗氧化剂进行开发利用。

基于药智网数据库挖掘中药露蜂房的配伍规律及应用特点

目的:基于数据挖掘探讨含露蜂房方剂的配伍规律及应用特点,为露蜂房合理用药提供参考。方法:收集药智网数据库中含露蜂房的方剂,构建露蜂房方剂数据库,运用Microsoft Office Excel 2019、IBM SPSS Modeler 18.0、IBM SPSS Statistics 23.0等软件统计方剂所含中药的性味、归经、功效、主治等,并进行高频中药的关联规则分析及聚类分析。结果:147首符合纳入要求的方剂涉及中药353味,1597次的累计使用频次中以攻毒杀虫止痒药、清热药、活血化瘀药最为常用,药性以温性、寒性为主,药味多甘、辛、苦,主要归肝、胃、脾、心经。21味高频中药的29项关联规则中支持度、置信度依次位列前三是“露蜂房-蛇蜕”、“露蜂房-当归”、“露蜂房-穿山甲”。含露蜂房方剂主治痈疽、牙疼、痔疮、风湿等疾病,分析露蜂房治痈疽方剂得到19味高频中药及其4个类方。结论:该研究通过数据挖掘分析了含露蜂房方剂的配伍特点及组方规律,可为露蜂房的临床应用及新药开发提供参考。

超声萃取-免疫亲和柱净化-柱后光化学衍生高效液相色谱法同时测定蜂房药材中4种黄曲霉毒素

建立超声萃取-免疫亲和柱净化-柱后光化学衍生高效液相色谱同时测定蜂房药材中黄曲霉毒素B_(1)、黄曲霉毒素B_(2)、黄曲霉毒素G_(1)、黄曲霉毒素G_(2)含量的分析方法。样品经粉碎,过孔径为120μm筛后,采用70%甲醇溶液超声处理30 min,经免疫亲和柱净化、高效液相色谱分离、光化学柱后衍生,通过荧光检测器测定4种黄曲霉毒素的含量。黄曲霉毒素B_(1)的线性范围为0.0104~0.0520 ng,相关系数为0.9999;黄曲霉毒素B_(2)的线性范围为0.0038~0.0190 ng,相关系数为0.9998;黄曲霉毒素G_(1)的线性范围为0.0108~0.0540 ng,相关系数为0.9998;黄曲霉毒素G_(2)的线性范围为0.0038~0.0190 ng,相关系数为0.9998。4种黄曲霉毒素检出限分别为0.42、0.15、0.43、0.15μg/kg,测定结果的相对标准偏差不大于2.5%(n=6),样品加标回收率为92.9%~96.9%。该方法操作简便,灵敏度高,可用于蜂房中黄曲霉毒素含量的测定。

蜂房药材中5种重金属元素的残留检测

目的建立了蜂房药材中Pb、As、Hg、Cd、Cu 5种重金属元素的残留检测方法。方法样品经微波消解后,以锗(^(72)Ge)、铟(^(115)In)、铋(^(209)Bi)混合溶液作为内标,采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)进行5种重金属元素的残留量测定。结果Pb、As、Hg、Cd、Cu 5种重金属元素的线性关系良好(r≥0.9996),回收率在83.26%~99.89%(RSD≤4.8%)范围内,方法的检出限在0.0100~0.0920mg·kg^(-1)范围内。10批样品不同程度的检出了Pb、As、Hg、Cd、Cu。结论该检测方法准确,灵敏度高。为蜂房药材质量的把控提供了相关参考依据。

金环胡蜂蜂房总黄酮提取工艺及抗氧化活性分析

优化金环胡蜂蜂房总黄酮(Vespa mandarinia nidus total flavonoids,VMNTF)的提取工艺,并分析其抗氧化性,为VMNTF产品的开发利用提供参考依据。在单因素试验基础上,以VMNTF提取率为评价指标,通过L_(9)(3^(4))试验优化VMNTF提取工艺条件,同时测定VMNTF对Fe^(3+)还原能力、羟基自由基(·OH)、1,1-苯基-2-苦肼基自由基(DPPH·)的清除能力。结果表明:VMNTF最佳提取工艺条件为乙醇体积分数55%、超声温度60℃、液料比60:1(mL/g)、超声时间70 min、纤维素酶用量2%,在此条件下VMNTF平均提取量为20.132 mg·g^(-1);VMNTF质量浓度为0.0644 mg·mL^(-1)时,使Fe^(3+)还原产生的吸光值为1.262,对·OH和DPPH·的清除率分别为94.46%和95.02%,并且Fe^(3+)还原能力、清除·OH和DPPH·能力均强于阳性对照维生素C。VMNTF具有很强的抗氧化性,是一种具有极大开发前景的天然抗氧化剂。

蜂房炮制历史沿革及临床应用情况

总结蜂房的炮制历史沿革及临床应用情况,为蜂房后续炮制研究和临床应用提供参考。查阅相关古籍及临床研究文献,对蜂房有关的炮制方法和临床辨证治疗情况进行整理归纳。蜂房古代炮制方法有净制、炒制、煅制、酒制4种炮制方法。现代又增加了甘草制和蜜炙2种方法。古代与现代人们对蜂房的药性认识基本一致,临床应用病症也一致。现阶段对于蜂房的炮制方法及质量标准提高还有待加强。蜂房临床应用广泛,但疾病的靶向治疗机制还有待深入研究。

蜂房药材中4种黄曲霉毒素的含量检测

建立高效液相色谱-免疫亲和柱净化-柱后光化学衍生法同时测定蜂房药材中黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)的含量测定方法。样品采用70%甲醇超声处理30 min,经免疫亲和柱净化、高效液相色谱分离、光化学柱后衍生,通过荧光检测器测定4中黄曲霉毒素的含量。黄曲霉毒素B_(1)的线性范围为0.0104~0.0520 ng(r=0.9999)、黄曲霉毒素B_(2)的线性范围为0.0038~0.0190 ng(r=0.9998)、黄曲霉毒素G_(1)的线性范围为0.0108~0.0540 ng(r=0.9998)、黄曲霉毒素G_(2)的线性范围为0.0038~0.0190 ng(r=0.9998),线性关系良好。该方法检出限分别为0.42、0.15、0.43、0.15μg·kg^(-1),回收率在90.00%~99.49%之间,RSD≤3.1%(n=6)。该方法操作简便、灵敏度高、重复性好、结果准确,可用于蜂房中黄曲霉毒素含量的测定。

柯布西耶宫——帐篷母题与蜂房体系

帐篷神庙母题和蜂房体系是柯布西耶作品中隐藏的两条线索。早在《走向新建筑》中,柯布西耶就已流露出对建筑永恒精神的无限向往。正因如此,他一次次回到帐篷神庙原型,反复操作那片屋顶;而“蜂房体系”虽早早申请了技术专利,但较少独立表现。在柯布西耶宫中,帐篷母题和蜂房体系既独立表现又相互媾和,成就了一段诗篇。

生牛乳中蜂房哈夫尼菌的分离鉴定及其生物学特性

为探究蜂房哈夫尼菌的生物学特性,通过细菌分离纯化、形态特征、生理生化鉴定和16S rRNA序列分析等从生牛乳中分离鉴定出1株蜂房哈夫尼菌HY-1,并测定其耐药性、耐盐性、耐酸碱、泳动性及生物被膜形成等生物学特性。结果表明:牛乳源蜂房哈夫尼菌HY-1具有广泛的耐药性,对四环素、红霉素、青霉素G、头孢他啶、头孢呋辛酯中度敏感,对麦迪霉素、克林霉素、克拉霉素、苯唑西林、头孢噻吩、头孢唑林耐药;该菌的生存范围比较广,能够在4~37℃条件下以及0.2~0.5 g/mL NaCl和pH 5.0~8.0的培养基上正常生长,并且可以在泳动培养基表面扩散,表明其具有泳动性;此外,蜂房哈夫尼菌HY-1能够形成较强的生物被膜,而2 mg/mL牛乳具有促进蜂房哈夫尼菌HY-1生物被膜形成的潜在能力,进而增强菌株的传播和污染,引发食品质量和安全问题;但是,当NaCl质量浓度在0.4 g/mL及以上时,显著抑制蜂房哈夫尼菌HY-1生物被膜形成能力,表明可以通过适当提高NaCl质量浓度阻断蜂房哈夫尼菌HY-1的传播和污染。

中药蜂房的化学成分及临床药理研究进展

中药蜂房是一味重要的常用动物药,在历代中医药古籍中都有其相关记载。该味动物药临床上有祛风止痛、攻毒杀虫等功效,可单用,也可在复方中与其他中药配伍应用,应用广泛。本文以国内外发表的文献作为依据,对蜂房的化学成分及临床应用进行综述,并介绍其在治疗疾病过程中的药理作用机制,为蜂房的进一步开发利用提供借鉴和参考。

露蜂房纯化蛋白对急性髓系白血病患者骨髓细胞的影响

目的研究中药露蜂房纯化蛋白(nidus vespae protein-Ⅱ,NVP-Ⅱ)对急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)的作用并探讨其机制。方法采用NVP-Ⅱ在体外作用于AML患者BMMNC,经光镜、电镜、Hochest33258染色法、TdT缺口末端标记(TUNEL)技术等方法检测NVP-Ⅱ对AML患者BMMNC的影响。结果不同浓度NVP-Ⅱ对AML患者BMMNC有不同程度的生长抑制和诱导凋亡作用。①光镜下观察到,与生理盐水对照组比较,NVP-Ⅱ处理组AML患者BMMNC数量明显减少,胞质内颗粒增多,并有较多的细胞碎片。②透射电镜下发现,NVP-Ⅱ处理组AML患者BMMNC细胞核染色质浓缩、碎裂,靠核膜边集呈块状,并形成凋亡小体;线粒体基质深染,呈现空泡样变及髓样变。③Hochest33258染色法显示,NVP-Ⅱ处理组AML患者BMMNC核染色质高度凝聚,致密浓染,或裂解呈碎块状,边缘光滑清晰。④TUNEL检测见阳性细胞核深染,NVP-Ⅱ处理组与生理盐水处理组比较,凋亡细胞明显增多(P<0.05)。结论NVP-Ⅱ可抑制AML患者BMMNC生长并诱导其凋亡。

露蜂房提取物对H22肝癌小鼠防治作用及其机制的实验研究

目的观察露蜂房提取物对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及对腹水瘤小鼠生存期的影响,并探讨其抗肿瘤作用机制。方法将80只小鼠随机分为2批次,每批次40只,分别于右腋下及腹腔接种H22肝癌细胞制作实体瘤和腹水瘤模型。各批次随机分为四组,盐水对照组、5-FU组、露蜂房提取物高剂量组(简称露峰房高剂量组)、露蜂房提取物低剂量组(简称露峰房低剂量组),每组10只。实体瘤模型组连续用药14 d,次日处死取瘤称重,计算抑瘤率,免疫组化技术检测Histone H1、Cy-clin B1的表达。腹水瘤模型组连续用药14 d,记录各组小鼠生存天数,计算生命延长率。结果露蜂房高剂量组对小鼠肝癌细胞的生长抑制率为38.06%,Histone H1表达增加,而Cyclin B1表达降低,与盐水对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。并可明显延长腹水瘤小鼠生存期。结论露蜂房提取物对肝癌细胞有抑制作用,其抑瘤作用机制可能与Histone H1、Cyclin B1调控有关。

中药五倍子、蜂房提取物对早期釉质龋再矿化作用的实验研究

目的通过pH循环实验研究中药五倍子、蜂房提取物对人工早期釉质龋的再矿化作用。方法应用离体牛切牙制备人工釉质龋标本40例,随机分为4组:(a)去离子水组(阴性对照)、(b)五倍子组、(c)蜂房组、(d)NaF组(阳性对照),进行体外pH循环实验后,采用显微硬度计测定标本脱矿前后和pH循环后的硬度值,观察釉质表面显微硬度的变化。通过偏光显微镜观察早期釉质龋损再矿化后的病理学改变。结果NaF组(阳性对照)和五倍子组能明显的提高早期釉质龋的表面显微硬度(P<0.05),蜂房组虽然也能提高釉质龋的表面显微硬度,但与去离子水组(阴性对照)比较无统计学意义(P>0.05)。偏光显微镜下,pH循环后NaF组(阳性对照)和五倍子组表层明显增厚,密度增加,病损体部出现呈负性双折射的再矿化条带,病损深度也明显变浅。结论五倍子能有效促进早期釉质龋再矿化,因而具有防龋功效。

中药蜂房对口腔常驻菌形成人工致龋生物膜影响的实验研究

目的 研究蜂房对口腔常驻菌形成人工致龋生物膜的影响 ,探讨其防龋应用前景。方法 在体外模型中的羟磷灰石片上定植 4种口腔常驻菌 ,以形成实验性生物膜。实验组定时给予含 4g L蜂房提取物的蔗糖溶液处理生物膜 ,观察其pH的动态变化 ,以及生物膜表面微结构与微生物组成的改变。以同浓度的蔗糖溶液与蒸馏水分别作为阳性与阴性对照。结果 ①实验组培养室内pH值呈先下降 ,再逐步恢复正常的波浪形变化。②蜂房的加入能抑制变链对羟磷灰石片的黏附。③蜂房的加入可使生物膜表面胞外基质的量减少。结论 蜂房作为一种潜在的防龋药物可能有着良好的应用前景。

中药露蜂房蛋白对人红白血病K562细胞增殖的影响

目的研究中药露蜂房蛋白(NVP)抗白血病的作用,为中药露蜂房治疗白血病和开发新的抗白血病药物提供实验和理论依据。方法采用细胞培养和透射电子显微镜技术,观察NVP对人红白血病细胞(K562细胞)的生长抑制作用和形态结构的影响;运用免疫组织化学方法和图像分析系统,研究NVP对K562细胞凋亡相关信号转导蛋白NF-κBp65、-βcatenin及iNOS表达的影响。结果1.NVP处理组K562细胞生长饱和密度降低,表示细胞增殖减弱。2.透射电镜下发现,NVP处理组K562细胞呈典型的凋亡形态学改变。3.免疫组织化学和图像分析系统测定光密度值(A值)显示,NVP处理组K562细胞中NF-κBp65、-βcatenin细胞核内转导减少,iNOS表达减弱。结论NVP有明显抑制K562细胞增殖的作用,其作用机制可能通过调节凋亡相关信号传导因子NF-κBp65、-βcatenin及iNOS的表达,从而诱导白血病细胞凋亡。

天然药物蜂房化学成分提取物对口腔细菌生长的实验研究

目的研究蜂房中分离得到的不同组分对致龋菌生长的影响,寻找蜂房抑龋的有效成分。方法通过溶剂分段和层析技术对蜂房进行分离,得到4个组分,采用液体稀释法研究蜂房不同组分对口腔常居细菌——血液链球菌、唾液链球菌,以及4种主要致龋菌——变形链球菌、内氏放线菌、粘性放线菌和乳酸杆菌生长的影响,使用活菌计数法测量五倍子总鞣质及各组分对变形链球菌生长曲线的影响。结果蜂房提取物中1、2和3组分对实验菌有较强的抑菌作用,蜂房提取物3组分对于变形链球菌生长曲线的抑制作用最强。结论蜂房各组分对实验菌都有一定的抑菌作用,其抑菌作用可能和其中的甾醇类化合物有关。

中药露蜂房醇提取物对人红白血病K562细胞的生长抑制及凋亡诱导作用

目的 :研究中药露蜂房 (NidusVespae,NV)醇提取物对K5 62细胞的作用及其机制。方法 :利用3H TdR掺入、透射电镜、原位末端标记 (TUNEL)技术、免疫组织化学和图象分析等方法。结果 :不同浓度NV醇提取物对K5 62细胞生长具有明显抑制作用 ( 2 7%～ 5 6% )。NV醇提取物组K5 62细胞呈典型的凋亡形态学改变 ,其Bcl 2蛋白表达显著减弱、Bax蛋白表达显著增强。结论 :中药NV醇提取物可明显抑制K5 62细胞增殖 ,其作用机制可能是通过Bcl 2、Bax的表达 ,从而诱导白血病细胞凋亡。

中药蜂房的化学成分研究

目的研究中药蜂房（nidusvespae）的化学成分。方法利用各种色谱技术进行分离，根据理化性质和光谱分析鉴定结构。结果从蜂房中分离得到6个已知成分，分别鉴定为8-羟基喹啉-4-酮（1）、对苯二酚（2）、原儿茶酸（3）、对羟基苯甲酸（4）、咖啡酸（5）、胸腺嘧啶脱氧核苷（6）。结论化合物1为首次分离得到的天然产物，化合物2～6均为首次从蜂房中分离得到。