诱导蜂房哈夫尼菌产L-赖氨酸脱羧酶条件的研究

用响应面法对蜂房哈夫尼茵(Hafina alvei)L-赖氨酸脱羧酶产酶诱导条件进行优化。首先通过单因素实验对产酶体系的pH、震荡培养时间、静置培养时间、诱导物添加量和VB6添加量进行优化。在此基础上,用部分因子重复试验筛选出对酶活影响显著的3个因素(静置培养时间,诱导物添加量,VB6添加量),再通过Box-behnken实验对这三个因素进行优化,得出最优值。最终得到产酶最佳诱导条件为:震荡培养阶段培养基pH6.5,静置培养阶段pH5.5;摇床震荡培养11h后静置培养7.5h,诱导物L-赖氨酸加入量为5.18g/L,维生素B6加入量为1.38g/L时酶活最高,达到71.2U/mL,为优化前(1.74U/mL)的41.8倍,在单因素的基础上提高了19%。

一例水貂感染蜂房哈夫尼菌的分离鉴定及药敏试验

为了对某发病水貂场的病死水貂进行病原学诊断,采用病原分离、生化试验、PCR扩增、基因序列比对等方法对分离细菌进行了鉴定,最终确定其病因为蜂房哈夫尼菌感染。在此基础上进行了药敏试验,发现蜂房哈夫尼菌对大多数药物敏感。

海产品中蜂房哈夫尼菌的鉴定及相关特性研究

从蜢虾酱和鱼露中分离出3株和1株细菌,命名为G1、G4、G5和Y1。经16S rRNA序列分析和相关生理、生化鉴定,4株菌均为蜂房哈夫尼菌。为探究海产品中蜂房哈夫尼菌的腐败相关特性,测定这4株以及另分离自腐败即食海参和大菱鲆的2株蜂房哈夫尼菌生物被膜的形成、泳动性、耐盐性、耐药性、TVB-N值和生物胺产生能力等相关特性。结果表明,6株蜂房哈夫尼菌具有较强的耐盐度,均在0.05 g/mL以上,培养一定时间后形成中等强度以上的生物被膜,并可在泳动性培养基表面扩散,表明其具有泳动性。该菌具有广泛的抗药性,对氨苄青霉素、壮观霉素、磺胺二甲嘧啶、磺胺嘧啶等抗菌药物有不同程度的抗性,然而对庆大霉素、四环素、氯霉素、卡那霉素、氧氟沙星、环丙沙星和呋喃唑酮较为敏感。将6株菌分别接种到其相应来源的海产品后,其TVB-N值随着贮藏时间的延长而明显增加。此外,6株蜂房哈夫尼菌均能产生3种生物胺,分别为腐胺、尸胺和组胺,并且产生腐胺和尸胺的能力明显高于组胺,说明蜂房哈夫尼菌具有腐败特性,在海产品腐败过程中起重要作用。本研究在探索蜂房哈夫尼菌导致的海产品腐败方面具有重要意义。

蜂房哈夫尼菌群体感应对其生物膜及泳动性的调控作用

在腐败即食海参中分离腐败菌蜂房哈夫尼菌H4(Hafnia alvei H4),研究其群体感应对生物被膜的形成以及泳动性的调控作用。采用基因敲除方法构建群体感应基因luxR和luxI缺失型菌株?luxRI,并采用结晶紫染色的方法测定其生物膜形成的变化,进一步采用扫描电镜对其生物膜进行观察,同时运用平板扩散的方法测定其泳动性的变化,实时聚合酶链式反应法检测生物膜相关基因flgA、flgE、fliA、flhD和flhC相对表达量的变化。研究表明:lux RI基因缺失后,不影响H. alvei H4的生长,但不能分泌高丝氨酸内酯类信号分子。除此之外,?lux RI菌株生物膜的形成显著降低(P<0.05),扫描电镜结果显示黏附到介质上的菌落数明显减少,且其在介质表面分泌的胞外多糖形成的网状结构物明显少于野生型菌株。?lux RI菌株泳动能力明显减小(P<0.05),flgA、flgE、fliA、flhD和flhC基因的相对表达量亦出现显著下调(P<0.05)。结果表明H. alvei H4的生物膜的形成和泳动性受到群体感应系统的调控。

白藜芦醇对蜂房哈夫尼菌生物膜形成的影响

为研究白藜芦醇对水产品优势腐败菌蜂房哈夫尼菌生物膜形成的影响,检测了白藜芦醇对紫色杆菌CV026中紫色杆菌素产量的影响以及对蜂房哈夫尼菌生物膜形成能力的抑制作用。结果表明,与未处理的对照组相比,白藜芦醇能够显著抑制由群体感应控制的紫色杆菌CV026中紫色杆菌素的产量而不抑制其生长,抑制率达74.9%。白藜芦醇以浓度依赖的方式抑制蜂房哈夫尼菌游动能力(74.1%)和生物膜的形成(79.1%),表明白藜芦醇可能作为一种群体感应抑制剂或抗生物膜制剂来控制食品腐败,从而提高食品安全性。

蜂房哈夫尼菌胞外蛋白酶的特性

从即食海参中分离到一株条件性致病菌—蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei H4),对该菌所产胞外蛋白酶进行了初步研究。结果表明,菌株生长达到对数期时检测到最大酶活力,硫酸铵质量分数为50%时提取的胞外蛋白酶活力最大,该菌所产胞外蛋白酶的最适反应条件为45℃、pH 7.5、0.5%NaCl;Cu^2+、Zn^2+、Fe^2+对胞外蛋白酶活力具有抑制作用,而Ca^2+、Mn^2+对胞外蛋白酶活力具有促进作用。丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF对胞外蛋白酶的活性具有抑制作用,说明该胞外蛋白酶主要是丝氨酸蛋白酶。红外光谱图显示蛋白酶在1663 cm^-1处有吸收峰,表明其具有高级结构。

二烯丙基二硫醚对蜂房哈夫尼菌群体感应的抑制作用

以从海参中分离的优势腐败菌蜂房哈夫尼菌为对象,研究了二烯丙基二硫醚(DADS)对受其群体感应调控的生物膜及泳动性的抑制作用。采用CV026报告菌定性检测DADS的抗群体感应活性,利用96微孔板法、扫描电镜(SEM)和琼脂扩散法分析DADS对蜂房哈夫尼菌生物膜及泳动性的抑制作用。结果表明,DADS作用于蜂房哈夫尼菌和CV026的最低抑菌浓度是48 mmol/L。在亚抑菌浓度下,与未处理对照组相比,DADS能够抑制由群体感应调控的CV026中紫色素的分泌而不抑制其生长。在0~12 mmol/L,随着浓度增加,DADS对生物膜的抑制率可达49.6%,对泳动性的抑制率达到73.5%。在12 mmol/L时,DADS能够抑制生物膜的形成。DADS能够抑制蜂房哈夫尼菌的群体感应活性、生物膜及泳动性,从而发挥防腐功效。

贵州中蜂蜂房哈夫尼菌的分离鉴定及药敏试验

为准确诊断贵州某蜂场发生的细菌性中蜂疾病,并提供防制方案,本试验进行了细菌分离纯化、形态学观察、生化试验,应用细菌16SrRNA基因通用引物进行基因扩增测序,测序结果在NCBI上进行比对分析,选取同源性较高的5个属的30株细菌的16SrRNA序列进行同源性分析并构建系统进化树,并对该分离菌进行动物回归试验和药敏试验。结果显示,分离菌为革兰氏阴性短杆菌,生化试验初步鉴定为蜂房哈夫尼菌;16SrRNA序列与哈夫尼杆菌属同源性最高,在97.0%~99.6%之间;遗传进化树表明,分离菌在哈夫尼菌菌属这一分支;动物回归试验显示,分离菌对中蜂有一定致病性,表明该蜂场受到蜂房哈夫尼菌感染,造成了蜜蜂的副伤寒;药敏试验结果表明,分离菌对青霉素、红霉素、克林霉素等耐药,对阿米卡星、复方新诺明、氧氟沙星等敏感。本试验结果为中蜂感染蜂房哈夫尼菌病的研究提供了一定参考,并能对蜂场提供合理用药意见。

基于电子鼻和HPLC分析蜂房哈夫尼菌对海参腐败的影响

为研究蜂房哈夫尼菌对即食海参腐败的影响,采用微生物菌落计数、电子鼻分析和HPLC等方法,对接菌前后海参品质变化进行了分析。结果表明,蜂房哈夫尼菌可在海参基质中生长,接菌4 h进入稳定期,12 h后趋于下降,12 h的菌落数达到最高,为6.67×10^6 CFU/mL。海参基质的挥发性盐基氮在接菌后120 h质量分数为(175.3±2.9)mg/kg。接菌后的1~5 d内,海参产生了多种挥发性气体,H2S和氮氧化合物较为明显。蜂房哈夫尼菌可代谢7种氨基酸,生成对应的胺类物质,初步判定25℃是生物胺产生的最适温度,在24 h产生的腐胺量最多,为(45.85±2.9)mg/kg。研究结果表明蜂房哈夫尼菌可导致海参的腐败变质,造成品质下降,影响食用价值。

C_6-HSL对蜂房哈夫尼菌生物学特性的影响

研究了蜂房哈夫尼菌野生株及Lux I基因缺失株(ΔLux I)所产生的群体感应信号分子对细菌生物学特性的影响。利用高效液相色谱法分析蜂房哈夫尼菌及ΔLux I不同时间所产生的C_6-HSL含量,并通过添加4、8、16、32μmol/L和64μmol/L的C_6-HSL来研究其对蜂房哈夫尼菌野生株及ΔLux I菌体生长、泳动性、生物膜形成的影响。蜂房哈夫尼菌野生株产生的C_6-HSL随培养时间的延长呈现先上升后下降的趋势,并在16 h达到最高浓度16.1μmol/L,ΔLux I不产生C_6-HSL。添加C_6-HSL并不会明显的改变蜂房哈夫尼菌野生株及ΔLux I的生长;但是会促进菌体的泳动能力;C_6-HSL会抑制蜂房哈夫尼菌野生株及ΔLux I生物膜的形成能力。

棘胸蛙新型病菌蜂房哈夫尼菌的分离、鉴定与药敏试验

为了对某养殖场患病棘胸蛙(Quasipaa spinosa)进行病原学诊断,采用病原分离、革兰染色、质谱分析、人工感染试验等方法对分离的病菌进行鉴定,最终鉴定该致病菌株为蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei)。同时,用纸片扩散法测定该菌对11种抗生素的敏感性,结果显示该菌对阿米卡星、左氧氟沙星、多粘菌素、氯霉素表现为高度敏感,对链霉素、庆大霉素、红霉素、复方新诺明、氨苄西林表现为中度敏感,对青霉素、头孢唑林表现为不敏感。

甲型肝炎合并蜂房哈夫尼菌败血症1例

1病例报告 患儿男,8岁.因发热2天,乏力、食欲下降,尿黄5天,于2002年4月11日入院.患儿于入院5天前开始发热、体温38℃左右,伴乏力、食欲下降、尿黄,曾恶心呕吐数次.起病2天后退热,但其他症状加重.发病前曾经常食用半生熟田螺.

生牛乳中蜂房哈夫尼菌的分离鉴定及其生物学特性

为探究蜂房哈夫尼菌的生物学特性,通过细菌分离纯化、形态特征、生理生化鉴定和16S rRNA序列分析等从生牛乳中分离鉴定出1株蜂房哈夫尼菌HY-1,并测定其耐药性、耐盐性、耐酸碱、泳动性及生物被膜形成等生物学特性。结果表明:牛乳源蜂房哈夫尼菌HY-1具有广泛的耐药性,对四环素、红霉素、青霉素G、头孢他啶、头孢呋辛酯中度敏感,对麦迪霉素、克林霉素、克拉霉素、苯唑西林、头孢噻吩、头孢唑林耐药;该菌的生存范围比较广,能够在4~37℃条件下以及0.2~0.5 g/mL NaCl和pH 5.0~8.0的培养基上正常生长,并且可以在泳动培养基表面扩散,表明其具有泳动性;此外,蜂房哈夫尼菌HY-1能够形成较强的生物被膜,而2 mg/mL牛乳具有促进蜂房哈夫尼菌HY-1生物被膜形成的潜在能力,进而增强菌株的传播和污染,引发食品质量和安全问题;但是,当NaCl质量浓度在0.4 g/mL及以上时,显著抑制蜂房哈夫尼菌HY-1生物被膜形成能力,表明可以通过适当提高NaCl质量浓度阻断蜂房哈夫尼菌HY-1的传播和污染。

环境因素对即食海参蜂房哈夫尼菌群体感应的影响

本文探究了即食海参腐败菌蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei H4)生长阶段N-酰基高丝氨酸内酯(AHLs)的分泌规律及环境因素对AHLs分泌的影响。以紫色杆菌CV026为报告菌,采用报告菌平板法检测H4分泌AHLs含量;以根癌农杆菌KYC55为报告菌,采用β-半乳糖苷酶法检测AHLs的活性。研究表明菌株H4分泌的AHLs含量及其活性具有密度依赖性,在细菌对数生长后期(OD600≈1.6)AHLs的分泌量达到最高,此时培养液的pH为5.71。环境因素对AHLs分泌影响的结果显示,在一定浓度范围内,添加Na Cl对H4分泌AHLs有促进作用;弱酸和弱碱都能使AHLs的分泌能力降低,pH为7.0时AHLs分泌量最大;H4分泌AHLs的最适温度为30℃,低温下AHLs分泌能力较弱。经不同碳源或氮源培养时,H4分泌AHLs的能力有明显差异,以果糖为碳源时,AHLs的活性最高,以硫酸铵为氮源时,AHLs的活性最高。综上所述,蜂房哈夫尼菌的群体感应系统具有密度依赖性,并且受环境因素影响,呈现规律性变化。

稻虾共养病虾肠道细菌群落变化与病原细菌分离及药物敏感性

病害是影响稻虾共养农民经济收入的重要因素。为明确稻虾共养发病塘口中致病菌的种类及其防治方法,以健康虾和病虾为研究材料,运用Illumina MiSeq全基因组测序技术,对健康虾和病虾肠道内细菌的群落组成进行测定和分析,预估出病原菌的种类。在此基础上,使用选择性培养基对病虾肠道内疑似病原菌进行分离。将分离所获疑似病原菌注射至健康虾体肠道内,并观察虾体死亡情况,最终确定所选病原菌菌株。通过显微观察、16S rDNA序列分析,最终确定该病原菌的分类地位。最后利用药敏性试验,筛选出对该病原菌有抑制效果的抗生素和中草药种类。试验结果表明,健康虾与病原虾肠道内的细菌群落结构具有显著性差异。在门水平上,健康虾肠道内细菌主要是柔壁菌门,其相对丰度为74.23%;而病虾肠道内细菌主要是变形菌门,其相对丰度为67.39%;在属水平上,健康虾肠道内主要是柔膜菌属,其相对丰度为48.30%;病虾肠道内主要是非保密气单胞菌属,其相对丰度为13.50%。分离结果显示,所获8株细菌均为革兰氏阴性菌,在选择性培养基上均呈黄色。病原菌回接感染结果表明,1.5×10;CFU/mL注射后1 d内,致死率高达100%。分子学鉴定结果表明,该病原菌为哈夫尼菌属蜂房哈夫尼菌。该菌对所选的卡那霉素、诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、氯霉素这5种抗生素比较敏感;对黄芩、苦参、艾叶等3种中草药水提物比较敏感。本研究可为稻虾共养流行病的诊断及防治,以及小龙虾的健康养殖提供理论依据。

在蜂房哈夫尼菌中稳定的重组表达质粒载体及其应用

本发明所公开的内容涉及到一个稳定的重组表达质粒载体，包括一段编码重组型抗毒素基因的聚核苷酸，其表达一种多肽，来中和对宿主细胞有毒的多肽，该有毒的多肽由一段编码毒素基因的聚核苷酸在宿主细胞中表达；一段编码多肽表达产物的聚核苷酸，其中，该稳定的重组表达质粒载体由在蜂房哈夫尼菌中可复制骨架质粒衍生而成。本发明所公开的内容还包括带有上述稳定的重组表达质粒的转化子，和利用该转化子制造生物基戊二胺的方法，以及按本发明所述方法制备的生物基戊二胺。本发明公开的内容还包括用上述方法制造的生物基戊二胺为原料制造的聚酰胺及含有该物质的组合物。本发明公开的内容也包括制备五亚甲基-1，5-异氰酸酯的方法，包括用本发明中的方法制备生物基戊二胺，再将生物基戊二胺转化为五亚甲基-1，5-异氰酸酯。