蜂毒明肽对Aβ_(25-35)诱导的阿尔茨海默病模型的体内外作用研究

目的初步探讨蜂毒明肽对Aβ_(25-35)诱导的阿尔茨海默病(AD)模型的体内外干预作用。方法侧脑室注射Aβ_(25-35)构建AD小鼠模型。连续5 d腹腔注射0.2 mg/kg蜂毒明肽。小鼠跳台测试认知功能,免疫组化检测海马CA1区Aβ_(1-42)表达。10μmol/L Aβ_(25-35)诱导海马神经元构建细胞损伤模型。100 nmol/L蜂毒明肽干预24 h后,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33342染色检测细胞凋亡率,全细胞膜片钳技术检测海马神经元小电导钙激活性钾通道介导的中间后超极化电流(I_(mAHP))。结果动物实验显示,与模型组比较,蜂毒明肽组小鼠学习成绩错误次数减少,潜伏期延长、记忆成绩错误次数减少,Aβ_(1-42)表达减低(P<0.05)。细胞实验显示,蜂毒明肽组较模型组海马神经元存活率增加,凋亡率下降,I_(mAHP)减小(P<0.05)。结论蜂毒明肽对Aβ_(25-35)诱导的AD模型具有保护作用,其机制可能与减少Aβ表达,降低I_(mAHP)有关。

大鼠背根节神经元后超极化中Ca^(2+)激活K^+电流的蜂毒明肽敏感成分I_(AHP)

为了明确大鼠背根节（DRG）神经元中存在慢的Ca2+激活K+电流成分，本实验在新鲜分散的DRG神经元胞体上，采用全细胞电压箝技术，给予DRG神经元一定强度的去极化刺激，记录刺激结束后30ms时的尾电流幅度。结果发现：（1）随着去极化时间从1ms延长至180ms时，尾电流幅度由9．3±2．8pA逐渐增大至64.1±3．4pA（P＜0．001）；（2）当去极化结束后的复极化电位降低时，尾电流幅度先逐渐下降到零，然后改变方向，逆转电位约为-63mV；（3）细胞外施加500μmol／LCd2+或细胞内液中施加11mmol／LEGTA时尾电流明显减小甚至完全消失；（4）尾电流中慢成分的幅度在细胞外给与200nmol／L蜂毒明肽后，减小了约26.32±3。9％（P＜0。01）；（5）细胞外施加10mmol／LTEA，可明显降低尾电流中的快成分。结果提示，在DRG神经元启超极化中存在Ca2+激活K+电流的蜂毒明肽敏感成分──IAHP。

蜂毒明肽对重症急性胰腺炎合并肾损伤大鼠肾功能的保护作用

目的探讨蜂毒明肽对重症急性胰腺炎(SAP)合并肾损伤大鼠肾功能的影响。方法将32只SD大鼠分为假手术组(SO组)、SAP组、蜂毒明肽组(Apamin组)、溶剂对照组(DMSO组)各8只。采用胆胰管逆行注射牛黄胆酸钠构建重症急性胰腺炎大鼠模型,其中并对Apamin组大鼠应用蜂毒明肽进行干预,测定术后12 h各组大鼠的血清淀粉酶,脂肪酶及血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)及白细胞介素-6(IL-6)水平,并观察大鼠胰腺及肾脏病理改变。结果 Apamin组及SAP组的淀粉酶、Scr、BUN、TNF-α、IL-1、IL-6水平以及胰腺及肾脏病理评分均高于SO组(P<0.05),Apamin组的以上指标均低于SAP(P<0.05)。结论蜂毒明肽能够减轻SAP所致的炎症反应进而缓解其引发的肾损伤。

中华蜜蜂蜂毒明肽基因克隆及生物信息学分析

【目的】掌握中华蜜蜂蜂毒明肽基因的生物信息,为进一步深入研究其生理功能及通过生物工程技术生产蜂毒明肽产品奠定基础。【方法】采用PCR技术克隆中华蜜蜂蜂毒明肽基因,并对所获得的基因组序列进行详细的生物信息学分析。【结果】从蜜蜂头部和胸部组织中成功扩增获得511bp的蜂毒明肽基因序列,该序列GC碱基含量仅为24%,包含一个141bp的开放阅读框,编码46个氨基酸残基;该序列与肥大细胞脱颗粒肽的同源性高达58%,存在较明显的信号肽序列和跨膜区结构。【结论】蜂毒明肽是一种小分子抗菌肽,存在较明显的信号肽序列和跨膜区结构,具有生物抗菌肽的典型特性,但需进一步加工切除信号肽序列后才能发挥作用。

蜂毒明肽的原核表达及纯化

目的原核表达并纯化蜂毒明肽。方法人工合成蜂毒明肽基因,与肠激酶识别序列基因串联,插入原核表达载体pGEX-2T中,构建蜂毒明肽与谷胱甘肽硫转移酶的融合表达载体pGEX-APAM。将重组质粒转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并进行纯化和肠激酶切割。结果经Western blot鉴定,表达产物具有良好的反应原性。在优化的表达条件下,融合蛋白的表达量约占菌体总蛋白的25.8%,且大部分以可溶性形式存在。纯化的融合蛋白纯度大于95%,每毫克融合蛋白经肠激酶切割后,可得蜂毒明肽58.5μg,回收率为81.9%。结论已成功地原核表达并纯化了蜂毒明肽。

蜂毒明肽对阿尔茨海默病小鼠认知功能的影响

目的观察蜂毒明肽对阿尔茨海默病(AD)小鼠认知功能的影响。方法 10周龄昆明种雌性小鼠60只,随机分成6组,每组10只,分别为正常对照组、假手术组、AD模型组、蜂毒明肽低剂量组、蜂毒明肽中剂量组、蜂毒明肽高剂量组。正常对照组不做任何处理,假手术组小鼠侧脑室注射生理盐水。采用侧脑室注射β-淀粉样肽25-35(β-amyloid protein,Aβ25-35)法构建AD小鼠模型。造模14 d后,蜂毒明肽干预的各组小鼠分别腹腔注射不同剂量的蜂毒明肽,连续5 d。Morris水迷宫测试认知功能,免疫组化染色观察海马CA1区Aβ25-35的表达。结果与正常对照组相比,蜂毒明肽各组和AD模型组小鼠逃避潜伏期时间较长,目标象限停留时间较短,穿越平台次数降低,海马CA1区Aβ25-35阳性表达增强(P均<0.05),而假手术组无统计学差异(P均>0.05)。蜂毒明肽中、高剂量组小鼠与AD模型组小鼠相比,前者逃避潜伏期有所缩短,目标象限停留时间增加,穿越平台次数有所增多,海马CA1区Aβ25-35阳性表达有所减低(P均<0.05)。结论蜂毒明肽能提高AD小鼠认知功能,减少海马CA1区Aβ25-35的表达。

蜂毒与蜂针疗法的作用机制及其在类风湿关节炎和骨关节炎治疗中的应用

蜂毒与蜂针疗法是外治法中的一种,具有良好的抗炎及镇痛作用,主要通过影响炎症细胞因子释放、调节疼痛信号传导等起效,临床常用于治疗类风湿关节炎和骨关节炎。虽然有关蜂毒与蜂针疗法的基础研究较多,对其作用机制的阐述较为详细,但临床研究较少。开展蜂毒与蜂针治疗骨伤科疾病的临床研究,为临床提供循证医学证据,是未来研究的重点。

蜂毒肽通过阻止NF-κB和AP-1依赖MMP-9的表达抑制PMA诱导肿瘤细胞浸润

MMP-9(基质金属蛋白酶)在肿瘤细胞的浸润和转移中其中重要作用。本项研究检测了BV(蜂毒素)及其主要肽类,蜂毒肽(melittin)和蜂毒明肽(apamin),在Caki-1(肾癌细胞)中由PMA(乙酸肉豆蔻佛波酯)诱导的MMP-9的表达抑制作用。在Caki-1细胞中,BV和蜂毒肽,而非蜂毒明肽,可以通过阻止MMP-9表达,从而显著抑制PMA诱导浸润。而且,通过MMP-9启动子的分析也证实了,蜂毒肽通过阻断PMA激发的AP-1(激活蛋白-1)和NF-κB(核因子kappa B)活性,从而抑制了MMP-9基因的表达。除此之外,蜂毒肽也抑制了PMA诱导的MAPK(丝裂原活化蛋白激酶)ERK(细胞外调节蛋白激酶)和JNK(c-Jun氨基末端激酶)的磷酸化,从而上调了NF-κB和AP-1的活性。试验结果表明,MMP-9表达的抑制成就了蜂毒肽的抗肿瘤特性。

蜂毒治疗免疫相关性疾病的研究进展

蜂毒是一种成分复杂的混合物,除含有80%~88%的水分外,还含有蜂毒肽、蜂毒明肽、磷脂酶A2（PLA2）、透明质酸酶、肥大细胞脱颗粒肽等,具有多种药理学活性,现已广泛应用于临床治疗类风湿关节炎（RA）,多发性硬化（MS）,各种顽固性神经痛,哮喘等疾病。最新研究表明,蜂毒在抗人类获得性免疫缺陷病毒（HIV）以及抗肿瘤方面也有较好的治疗前景,引起了医学界极大的关注。

蜂毒肽抗肿瘤研究新进展

蜂毒是蜜蜂工蜂毒腺分泌出来的一种具有芳香气味成分复杂的混合物,主要含有蜂毒肽、蜂毒明肽、肥大细胞脱粒肽等多肽类;另外还有透明质酸酶、磷脂酶A2等50多种活性酶类,以及组织胺、多巴胺等生物活性物质。蜂毒中研究较多的是蜂毒肽,它是一种水溶性阳离子两亲性细胞毒肽。蜂毒肽占蜂毒比重的45~50%,是蜂毒中的主要功能物质。蜂毒肽呈碱性和正电性,易溶于水,相对分子质量为2800左右,具有消炎、降压、镇痛、抑制血小板凝集、抗辐射、抗菌、抗病毒(如抗HSV—l病毒、抗HIV)、抗风湿性关节炎及抗肿瘤等多种药理活性[1-2]。近年来研究较多的抗肿瘤、抗艾滋病毒的作用。

小电导钙激活钾通道的研究进展

小电导钙激活钾通道（SKca）是钙激活钾通道家族成员之一，它具有K^＋选择性、Ca^2＋高敏性和电压不依赖性等特性，以及调节神经元放电的功能，可能与学习记忆失调、小脑共济失调、癫痫等疾病有关。深入地了解小电导钙激活钾通道，将有助于揭示某些疾病的发病机制，并为临床治疗提供依据。