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蜂毒素基因重组腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用 被引量:6
1
作者 李柏 张晨 +3 位作者 李绍祥 万旭英 顾伟 凌昌全 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2003年第1期13-16,共4页
目的 :构建携蜂毒素基因及甲胎蛋白 (AFP)启动子 (rAFP)的重组腺病毒载体 ,探讨rAFP驱动的蜂毒素基因在体外对肝癌细胞的特异性杀伤作用。方法 :人工合成蜂毒素基因 ,置于rAFP之后 ,用细菌内高效同源重组法将目的基因重组入腺病毒质粒... 目的 :构建携蜂毒素基因及甲胎蛋白 (AFP)启动子 (rAFP)的重组腺病毒载体 ,探讨rAFP驱动的蜂毒素基因在体外对肝癌细胞的特异性杀伤作用。方法 :人工合成蜂毒素基因 ,置于rAFP之后 ,用细菌内高效同源重组法将目的基因重组入腺病毒质粒中 ,转染人胚肾 2 93细胞进行腺病毒包装 ;采用MTT法测定蜂毒素基因转染对AFP阳性、阴性肝癌细胞及正常肝细胞增殖的影响。结果 :携蜂毒素基因重组腺病毒载体构建成功 ,MTT实验证明携蜂毒素基因重组腺病毒转染后 ,AFP阳性肝癌细胞的增殖受到明显抑制 ,而对AFP阴性肝癌细胞及正常肝细胞无明显影响 ;无蜂毒素基因的重组腺病毒转染 ,则对各种细胞增殖均无抑制作用。结论 :表达rAFP驱动的蜂毒素基因的重组腺病毒在体外可特异性地杀伤AFP阳性肝癌细胞。 展开更多
关键词 蜂毒素基因 甲胎蛋白 腺病毒载体 肝癌 基因治疗
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改造的蜂毒素基因在毕赤酵母中分泌表达及培养条件研究 被引量:2
2
作者 赵亚华 董竟南 +1 位作者 崔红 白云 《生命科学研究》 CAS CSCD 2005年第2期124-128,共5页
对蜂毒素基因进行改造后,通过PCR方法获得新蜂毒素基因(MEA),将其克隆到表达载体pPICZa-A,而后将重组表达载体pPICZa-A-MEA转化GS115,筛选获得重组酵母菌.对GS115-ME经甲醇诱导表达并对培养条件进行优化探讨.对改造的蜂毒素进行了溶血... 对蜂毒素基因进行改造后,通过PCR方法获得新蜂毒素基因(MEA),将其克隆到表达载体pPICZa-A,而后将重组表达载体pPICZa-A-MEA转化GS115,筛选获得重组酵母菌.对GS115-ME经甲醇诱导表达并对培养条件进行优化探讨.对改造的蜂毒素进行了溶血活性、热稳定性及酸碱稳定性测定.结果表明,蜂毒素基因成功地在毕赤酵母中表达,经改造的蜂毒素在保留了抗菌活性的同时溶血活性降低20倍左右,同时还具有良好的热稳定性和酸碱稳定性. 展开更多
关键词 蜂毒素基因 毕赤酵母 分子改造 条件优化 溶血活性
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携蜂毒素基因重组腺病毒载体的构建 被引量:5
3
作者 李绍祥 凌昌全 李瑞利 《河北医科大学学报》 CAS 2003年第3期139-143,共5页
目的构建含巨细胞病毒 (cytomegalovirus ,CMV)启动子或甲胎蛋白 (α fetoprotein ,AFP)调控序列驱动下的蜂毒素基因的重组腺病毒 ,进行体外抗肿瘤效果的比较。方法人工合成蜂毒素基因时 ,用Kozak序列优化翻译起始区 ,并进行人类最适密... 目的构建含巨细胞病毒 (cytomegalovirus ,CMV)启动子或甲胎蛋白 (α fetoprotein ,AFP)调控序列驱动下的蜂毒素基因的重组腺病毒 ,进行体外抗肿瘤效果的比较。方法人工合成蜂毒素基因时 ,用Kozak序列优化翻译起始区 ,并进行人类最适密码子的转换 ,然后置于CMV启动子或AFP调控序列之后 ,用细菌内高效同源重组法构建腺病毒质粒 ,脂质体转染 2 93细胞进行包装。结果目的基因成功地重组人腺病毒质粒。结论上述蜂毒素 腺病毒载体构建时的几个特点 ,有助于载体的顺利构建 。 展开更多
关键词 蜂毒素基因 重组腺病毒 载体构建 巨细胞病毒启动子 甲胎蛋白
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含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒诱导HepG2细胞凋亡及相关机制研究 被引量:2
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作者 陈永安 张亚妮 +4 位作者 顾伟 李柏 张薇薇 董惠娟 凌昌全 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2010年第5期283-286,共4页
目的:探讨含有AFP启动子的携蜂毒素基因重组腺病毒诱导HepG2细胞凋亡的相关机制。方法:采用AnnexinV/PI双染法,流式细胞仪检测含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒(Ad-rAFP-Mel)感染HepG2细胞后的凋亡情况;采用罗丹明123、PI双染色法检测线粒... 目的:探讨含有AFP启动子的携蜂毒素基因重组腺病毒诱导HepG2细胞凋亡的相关机制。方法:采用AnnexinV/PI双染法,流式细胞仪检测含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒(Ad-rAFP-Mel)感染HepG2细胞后的凋亡情况;采用罗丹明123、PI双染色法检测线粒体膜电位的变化,Fura-2染色检测细胞内Ca2+变化。结果:Ad-rAFP-Mel感染HepG2细胞后发生明显的细胞凋亡,线粒体膜电位下降,细胞内钙离子的浓度升高。结论:结果提示感染后表达的内源性蜂毒素可能通过影响线粒体、内质网等结构,从而诱导AFP阳性的肝癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 蜂毒素基因 腺病毒 甲胎蛋白启动子 生物膜 细胞凋亡
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蜂毒素基因重组腺病毒对人肝癌Hep3B细胞增殖抑制作用 被引量:1
5
作者 李柏 张晨 +3 位作者 李绍祥 顾伟 万旭英 凌昌全 《中医药学刊》 2003年第3期357-359,共3页
采用现代分子生物学手段,将蜂毒素基因重组入复制缺陷型腺病毒骨架,并在蜂毒素基因上游插入特异性的甲胎蛋白启动子,构建成功携蜂毒素基因的重组腺病毒。体外实验证明,该重组腺病毒可特异性地杀伤分泌AFP的肝癌细胞。目的:观察携动物毒... 采用现代分子生物学手段,将蜂毒素基因重组入复制缺陷型腺病毒骨架,并在蜂毒素基因上游插入特异性的甲胎蛋白启动子,构建成功携蜂毒素基因的重组腺病毒。体外实验证明,该重组腺病毒可特异性地杀伤分泌AFP的肝癌细胞。目的:观察携动物毒素基因重组腺病毒在体外对人肝癌细胞的杀伤作用。方法:用X-gal染色法测定腺病毒介导基因转染的效率;将携蜂毒素基因重组腺病毒转染人肝癌Hep3B细胞,采用细胞计数及MTT法测定转染后对Hep3B细胞的增殖抑制作用,并采用流式细胞术测定基因转染后对增殖细胞核抗原(PCNA)的影响。结果:重组腺病毒对Hep3B细胞具有较高的转染效率;细胞计数及MTT实验证明携蜂毒素基因重组腺病毒转染后,人肝癌Hep3B细胞的增殖受到明显抑制,PCNA标记指数下降。结论:携蜂毒素基因重组腺病毒在体外可抑制肝癌细胞增殖,抑制PCNA的合成可能是其作用机理之一。 展开更多
关键词 蜂毒素基因重组腺病毒 肝癌 HEP3B细胞 细胞增殖 抑制作用
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含rAFP的蜂毒素基因重组腺病毒转染的HepG2细胞形态学变化
6
作者 陈永安 张亚妮 +3 位作者 顾伟 李柏 董惠娟 凌昌全 《安徽中医学院学报》 CAS 2010年第4期45-48,共4页
目的通过构建含有重组AFP(recombinant alpha-fetoprotein,rAFP)启动子的携蜂毒素(melittin,Mel)基因的重组腺病毒(adenovirus,Ad),观察感染Ad-rAFP-Mel的HepG2细胞形态学变化。方法采用倒置显微镜、苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)... 目的通过构建含有重组AFP(recombinant alpha-fetoprotein,rAFP)启动子的携蜂毒素(melittin,Mel)基因的重组腺病毒(adenovirus,Ad),观察感染Ad-rAFP-Mel的HepG2细胞形态学变化。方法采用倒置显微镜、苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、Hoechst 33258染色、透射电镜观察Ad-rAFP-Mel作用过的肝癌细胞死亡情况、细胞器的结构变化等形态学变化。结果倒置显微镜下观察结果显示,随着病毒感染复数的增加和时间的延长,活细胞数量减少;HE染色显示坏死与凋亡并存;Hoechst 33258染色显示确有凋亡存在;透射电镜证实Ad-rAFP-Mel作用于肝癌细胞后,肝癌细胞凋亡和坏死兼而有之。结论Ad-rAFP-Mel能够抑制HepG2细胞的生长,细胞死亡呈现坏死与凋亡兼有的特征。 展开更多
关键词 肝癌 蜂毒素基因 腺病毒 形态学 凋亡 坏死
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蜂毒素基因重组腺病毒诱导肝癌细胞凋亡的作用 被引量:4
7
作者 李柏 凌昌全 +5 位作者 张晨 顾伟 李绍祥 黄雪强 张亚妮 俞超芹 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 2004年第8期453-455,共3页
目的 观察蜂毒素基因重组腺病毒诱导肝癌细胞凋亡的作用。 方法 通过形态学观察、DNA电泳、原位缺口末端标记(TUNEL)、流式细胞仪等方法观察携蜂毒素基因重组腺病毒对肝癌细胞凋亡的影响。 结果 光镜下见部分肝癌细胞出现凋亡形态学变化... 目的 观察蜂毒素基因重组腺病毒诱导肝癌细胞凋亡的作用。 方法 通过形态学观察、DNA电泳、原位缺口末端标记(TUNEL)、流式细胞仪等方法观察携蜂毒素基因重组腺病毒对肝癌细胞凋亡的影响。 结果 光镜下见部分肝癌细胞出现凋亡形态学变化,DNA电泳可见梯形条带,TUNEL染色结果显示,Ad-rAFP-Mel组、Ad-rAFP组和对照组的凋亡率分别为(21.5±2.4)%、(10.5±4.4)%和(3.0±1.4)%,各组间差异有显著性(F=3 8.0,P<0.0 5)。流式细胞仪定量分析结果显示,3组凋亡率分别为(7.3±0.5)%、(3.9±0.1)%和(0.8±0.1)%,各组间差异有显著性(F=415.1,P<0.05)。 结论 诱导细胞凋亡可能是蜂毒素抗肿瘤的作用机制之一。 展开更多
关键词 蜂毒素基因 重组腺病毒 肝癌 癌细胞凋亡 甲胎蛋白
原文传递
重组蜂毒素-基因变构IL-2的纯化与生物活性 被引量:4
8
作者 刘明军 王斌 +3 位作者 钱冬萌 丁守怡 闫志勇 宋旭霞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期623-626,共4页
目的制备纯化重组蜂毒素-基因变构IL-2(Melittin-88ArgIL-2)嵌合蛋白,并检测其生物活性。方法将含表达载体的大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达。表达产物经离子交换层析与亲和层析进行纯化,SDS-PAGE鉴定,MTT染色法检测嵌合蛋白对Hela细胞... 目的制备纯化重组蜂毒素-基因变构IL-2(Melittin-88ArgIL-2)嵌合蛋白,并检测其生物活性。方法将含表达载体的大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达。表达产物经离子交换层析与亲和层析进行纯化,SDS-PAGE鉴定,MTT染色法检测嵌合蛋白对Hela细胞增殖的抑制作用。结果所表达的可溶性蛋白,纯化后纯度达95%,蛋白浓度0.5g/L。纯化后的嵌合蛋白在体外能抑制Hela细胞的增殖。结论已成功地制备并纯化了重组melittin-88ArgIL-2嵌合蛋白,该蛋白具有生物活性,为中试放大和纯化工艺研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蜂毒-基因变构IL-2 层析 生物活性
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蜂毒素与基因变构IL-2嵌合蛋白的体外生物活性研究 被引量:3
9
作者 宋旭霞 刘明军 +3 位作者 王斌 钱冬萌 闫志勇 丁守怡 《医学研究生学报》 CAS 2009年第5期464-468,共5页
目的:IL-2具有多种与增强免疫功能相关的生物学活性,蜂毒素对多种肿瘤细胞有杀伤作用。文中研究蜂毒素与基因变构IL-2(melittin-88ArgIL-2)嵌合蛋白在体外的生物学活性。方法:用甲基噻唑基四唑(MTT)法研究纯化制备的melittin-88ArgIL-2... 目的:IL-2具有多种与增强免疫功能相关的生物学活性,蜂毒素对多种肿瘤细胞有杀伤作用。文中研究蜂毒素与基因变构IL-2(melittin-88ArgIL-2)嵌合蛋白在体外的生物学活性。方法:用甲基噻唑基四唑(MTT)法研究纯化制备的melittin-88ArgIL-2嵌合蛋白在体外对T细胞增殖和NK细胞杀伤活性的影响及对人卵巢癌细胞SKOV3生长抑制的作用。结果:melittin-88ArgIL-2嵌合蛋白在体外可促进T细胞的增值,增强NK细胞的杀伤活性,抑制人卵巢癌细胞SKOV3的生长增殖。结论:melittin-88ArgIL-2嵌合蛋白在体外具有一定的增强免疫功能和抗肿瘤活性。值得进一步对其体内的生物学活性进行研究,为大规模制备的中试放大研究和临床前期研究提供了资料。 展开更多
关键词 蜂毒基因变构IL-2嵌合蛋白 T细胞 NK细胞的杀伤活性 人卵巢癌细胞SKOV3 抗肿瘤活性
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蛙皮素-蜂毒素杂合肽基因在大肠杆菌中的克隆与诱导表达 被引量:4
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作者 黄音 刘飞鹏 +1 位作者 周天鸿 朱嘉明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期207-210,共4页
A hybrid peptide gene was designed and synthesized. Its encoding peptide is constructed from residues 3~14 of magainin and residues 1~13 of melittin. The MA E gene was cloned into plasmids pUC18 and pBV220. By DNA s... A hybrid peptide gene was designed and synthesized. Its encoding peptide is constructed from residues 3~14 of magainin and residues 1~13 of melittin. The MA E gene was cloned into plasmids pUC18 and pBV220. By DNA sequencing, the whole sequences of this gene is confirmed to be correct. The recombinant plasmid pBMA\|E was expressed in \%E.coli\% DH5α. A gene product band can be seen with Tricine\|SDS\|PAGE. The MA E hybrid peptide was purified by immobilized metal affinity chromatography. Bioactivity assay was carried out in liquid turbidity method. The bactericide value to \%E.coli\% K 12 D 31 is 0.182. 展开更多
关键词 抗菌肽 MA-E基因 大肠杆菌 抗菌活性 表达 克隆 蛙皮-蜂毒杂合肽基因
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蜂毒素与基因变构IL-2嵌合蛋白对人卵巢癌细胞SKOV3的抑制作用及对NK细胞的杀伤活性的影响 被引量:1
11
作者 董军奎 鲁晓晴 +5 位作者 刘明军 钱冬萌 宋旭霞 闫志勇 丁守怡 王斌 《世界肿瘤杂志》 2008年第1期1-4,共4页
目的研究蜂毒素与基因变构IL-2(melittin-^88ArgIL-2)嵌合蛋白,在体外对入卵巢癌细胞SKOV3的抑制作用及对NK细胞的杀伤活性的影响。方法用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法研究已经纯化制备的melittin-^88ArgI... 目的研究蜂毒素与基因变构IL-2(melittin-^88ArgIL-2)嵌合蛋白,在体外对入卵巢癌细胞SKOV3的抑制作用及对NK细胞的杀伤活性的影响。方法用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法研究已经纯化制备的melittin-^88ArgIL-2嵌合蛋白,在体外对入卵巢癌细胞SKOV3生长抑制的作用,对NK细胞杀伤活性的影响。结果melittin-^88ArgIL-2嵌合蛋白在体外能抑制入卵巢癌细胞SKOV3的生长增殖,能增强NK细胞的杀伤活性。结论melittin-^88ArgIL-2嵌合蛋白在体外具有一定的增强免疫功能和抗肿瘤活性。为其在真核细胞系统的表达、纯化、体内的生物学活性研究以及大规模制备的中试放大研究和临床前期研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蜂毒基因变构IL-2嵌合蛋白 入卵巢癌细胞SKOV3 NK细胞的杀伤活性 抗肿瘤活性
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