不同季节中国蜂胶醇提物的化学成分及生物活性

季节是影响蜂胶化学组成和生物活性的生态因子之一。为了解季节对蜂胶品质的影响,以分别来自温带、亚热带和热带地区的不同季节中国蜂胶为材料,采用分光光度法测定其色度、特定吸收率(E1cm)以及总酚、总黄酮、黄酮-黄酮醇和黄烷酮的含量;并测定蜂胶醇提物的抗氧化及抑菌活性。实验结果相关性分析表明:季节对中国蜂胶醇提物(ethanol extract of propolis,EEP)的化学组成有显著影响,中国EEP中总酚、总黄酮、黄酮-黄酮醇和黄烷酮的含量均在7～8月为最高,9月份化学成分含量大多最低,说明其品质在8月总体最好,而9月份,中国蜂胶品质最差。不同季节EEP的总酚和总黄酮含量差异极显著,总酚最大值为(243.87±152.13)mg/g,最小值为(187.25±146.45)mg/g,总黄酮最大值为(189.34±107.51)mg/g,最小值为(122±81.02)mg/g;且季节对EEP的抗氧化活性也有显著影响;EEP的E1cm值与清除DPPH自由基活性和总酚、总黄酮的含量有显著正相关性。而季节对中国EEP的抑菌性没有显著影响。因此,季节对中国蜂胶品质有较大影响。

蜂胶醇提物脂质体制备及表征

以大豆卵磷脂和胆固醇为膜材,采用薄膜分散-动态高压技术制备蜂胶醇提物（ethanol extract of propolis,EEP）脂质体,通过粒度分析仪、透射电子显微镜、清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、低温贮存实验等进行性状表征。结果表明：制备的蜂胶脂质体为大小均匀的球形,粒径为（78±14）nm,包埋率和稳定性分别达到（97.80±5.21）%和（2.53±0.05）%。4℃条件下保存90 d和180 d后,包埋率分别下降了16.74%和28.77%,分散系数分别增加了6.61%和14.32%,DPPH自由基清除指数分别为2.78和2.71;高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）分析贮存180 d后EEP脂质体中7种物质变化分别为1.08%~6.63%,低于EEP的5.55%~19.42%,说明脂质体对EEP中的活性物质具有一定的保护作用。

HPLC测定两种中国蜂胶醇提物化学组成

建立了同时测定蜂胶醇提物(EEP)中23种多酚类化合物的高效液相色谱(HPLC)分析方法,并用该法测定了分别采自山东济宁和云南西双版纳的EEP。采用ZORBAX Eclipse XDB C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长256和280 nm,进样量20μL,柱温35℃。结果表明,所用的分离条件可以使混合对照品及EEP均实现良好分离。通过对比保留时间和紫外吸收光谱,从山东蜂胶中鉴定出20种化合物,云南蜂胶中鉴定出14种化合物。两地EEP的HPLC图谱相似度分别为0.417(256 nm)和0.499(280 nm),两者化学成分差异巨大。山东济宁和云南西双版纳分别地处温带和热带地区,不同的气候及植被可能是这种差异的主要原因。

蜂胶醇提物通过抑制C/EBP同源蛋白表达减轻氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞凋亡

目的:研究蜂胶醇提物(ethanol extract of propolis,EEP)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的血管内皮细胞凋亡的抑制作用,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),给予EEP(7.5、15和30 mg/L)、4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA;4 mmol/L)预处理1 h,再加入ox-LDL(100 mg/L)或衣霉素(tunicamycin,TM;4 mg/L)继续培养24 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞活力和凋亡情况;试剂盒测定培养液乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)和细胞内caspase-3活性。分别采用Western blot和real-time PCR技术检测内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡途径关键蛋白C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)和Bcl-2的表达变化。结果:与ERS抑制剂PBA相似,EEP呈剂量依赖性地减轻ox-LDL所诱导的HUVECs损伤,表现为细胞活力增加(P<0.01或P<0.05),LDH漏出、凋亡率和caspase-3活性降低(P<0.05或P<0.01),且可抑制ERS诱导剂TM所致的HUVECs活力下降(P<0.05),以及LDH漏出、细胞凋亡率和caspase-3活性增加(P<0.05或P<0.01);与PBA相似,EEP可抑制ox-LDL所诱导的CHOP上调和Bcl-2下调(P<0.05或P<0.01);另外,与TM组比较,EEP预处理组CHOP蛋白和mRNA表达上调也受到明显抑制(P<0.05或P<0.01)。结论:EEP可减轻oxLDL所诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与抑制CHOP介导的ERS凋亡途径有关。

蜂胶醇提物对扑热息痛致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的研究蜂胶醇提物对扑热息痛(Paracetamol,APAP)致小鼠急性肝损伤的保护作用并探讨其可能的作用机制。方法取C57BL/6MT(-/-)小鼠63只,随机分为9组,每组7只,各组于每天上午9点至10点称重,正常对照组和模型组给予NS20mL·kg-1,蜂胶醇提物组分别给予12.5,25,50和100mg·kg-1蜂胶醇提物,20%乙醇+A-PAP组和20%乙醇对照组给予20mL·kg-1乙醇,蜂胶醇提物对照组给予100mg·kg-1蜂胶醇提物,均为灌胃给药,每天1次,连续4d;最后1次给药30min后,除正常对照组,蜂胶醇提物对照组和20%乙醇对照组scNS10mL·kg-1之外,其余各组均scAPAP380mg·kg-1制备小鼠急性肝损伤模型。检测小鼠血清ALT、AST和LDH的活性;观察肝脏组织病理变化情况和肝体比;测定肝组织匀浆GSH,GSSG和MDA的含量。结果与APAP模型组相比,蜂胶醇提物可以明显降低小鼠血清中ALT、AST和LDH的活性,降低肝组织中MDA的含量,升高GSH、GSH/GSSG比值,肝组织病理损伤明显减轻;蜂胶醇提物对照组GSH的含量与GSH/GSSG比值升高;而20%乙醇对照组对上述指标均无明显影响。结论蜂胶醇提物对APAP致小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用。

蜂胶醇提物及其单体的抗氧化、降血糖作用研究

目的:考察蜂胶醇提物及从其中分离出的单体化合物(白杨素、高良姜素、乔松素)的抗氧化、降血糖作用。方法:将实验动物按体重随机分组,分为空白对照组、模型对照组、阳性药对照组、蜂胶醇提物组、白杨素组、高良姜素组、乔松素组。通过角叉菜胶致大、小鼠足趾肿胀模型和四氧嘧啶致小鼠高血糖模型的建立,通过测定动物血清中MDA含量和SOD活力、血糖值等指标,观察蜂胶醇提物及其分离单体对大、小鼠炎症模型各项指标及小鼠高血糖模型血糖值的影响。结果:蜂胶醇提物及白杨素、高良姜素、乔松素均能抑制角叉菜胶致大、小鼠足趾肿胀模型中血清MDA含量上升、提高SOD活性,抑制四氧嘧啶致小鼠高血糖模型中血糖升高。结论:蜂胶醇提物及其分离单体在抗氧化、降血糖方面具有一定活性。

蜂胶醇提物对大鼠肝脏线粒体氧自由基损伤的保护作用

目的研究蜂胶醇的提物对线粒体氧自由基损伤的保护作用。方法采用FeSO4/半胱氨酸(Fe2+/Cys)体系造成鼠肝脏线粒体损伤模型,测定线粒体肿胀、丙二醛(MDA)、琥珀酸脱氢酶(SDH)。结果Fe2+/Cys损失组与正常对照组比较,线粒体肿胀度和MDA均明显增加,SDH活力明显降低。结论蜂胶醇提物可剂量依赖性保护大鼠肝脏线粒体的氧自由基损伤。

不同提取工艺下蜂胶醇提物的GC-MS分析

用超临界CO2萃取+残渣醇提法提取毛胶,获得CO2提取物和CO2残渣醇提物,用GC-MS法分析两种提取物中醇提物化学成分,并与传统工艺醇提物比较,结果表明:湖南蜂胶的两种提取物分别有189个和200个成分,鉴定出其中88个和78个成分,与传统醇提物(仅有144个成分,鉴定出63个成分)相比均含有更多种类的烯、萜、醇、酚、酸、酯类和黄酮类等化学成分,醇提物总得率更高;黄酮类成分在残渣醇提物中含量更高,在CO2提取物的醇提物中为主要成分,在压力35MPa,温度32℃等超临界萃取条件下对蜂胶中部分黄酮类化合物的选择性较好。为蜂胶中更多活性物的深入研究和广泛开发应用提供实验依据。

蜂胶提取物的抗氧化活性研究

以菜籽油和猪油为实验油,采用schall烘箱法测定蜂胶及其乙醇提取物、超临界CO2提取物和CO2残渣醇提物的抗氧化活性,并与其他通用抗氧化剂比较。结果表明:总黄酮浓度0.01%以上的蜂胶提取物均能显著延长油脂氧化诱导期,是高效的油脂抗氧化剂;黄酮类化合物仍是各蜂胶提取物中主要含量成分和主要抗氧化活性成分之一,且随总黄酮浓度0.005%以上一定范围与其整体抗氧化活性呈现量效关系;在相同添加量0.02%(蜂胶提取物均以总黄酮计)和恒温60℃条件下,各抗氧化剂抗氧化效果按强弱顺序排列为:菜籽油中,TBHQ>蜂胶超临界CO2提取物>蜂胶CO2残渣醇提物≥蜂胶乙醇提取物>VE>甘氨酸>蜂胶>BHT;猪油中,TBHQ>蜂胶CO2残渣醇提物≥蜂胶乙醇提取物≥BHT>甘氨酸>蜂胶>蜂胶超临界CO2提取物>VE。本试验结果可望为各蜂胶提取物将来被用作含油脂食品的天然抗氧化剂提供一定的实验数据。

蜂胶提取物的抗氧化活性及其在牙膏中的应用研究

目的:研究蜂胶提取物的抗氧化活性及其在牙膏中的应用;方法:采用DPPH法考察蜂胶超临界提取物与醇提蜂胶的抗氧化能力,观察两种不同工艺制得的蜂胶添加到牙膏中的稳定性情况;结果:不同处理方式得到的蜂胶提取物抗氧化能力有一定的差异,制得的牙膏外观颜色相差较大,稳定性均通过测试;结论:首次对蜂胶提取物进行DPPH自由基清除能力的测定,结果显示蜂胶超临界提取物效果更佳;添加了蜂胶超临界提取物的牙膏,膏体颜色较浅基本不影响膏体外观,添加了醇提蜂胶的牙膏颜色较深,用不同工艺的两种蜂胶制得的牙膏稳定性均较好。

蜂胶提取物的抗氧化活性及其在牙膏中的应用研究

目的:研究蜂胶提取物的抗氧化活性及其在牙膏中的应用;方法:采用DPPH法考察蜂胶超临界提取物与醇提蜂胶的抗氧化能力,观察两种不同工艺制得的蜂胶添加到牙膏中的稳定性情况;结果:不同处理方式得到的蜂胶提取物抗氧化能力有一定的差异,制得的牙膏外观颜色相差较大,稳定性均通过测试;结论:首次对蜂胶提取物进行DPPH自由基清除能力的测定,结果显示蜂胶超临界提取物效果更佳;添加了蜂胶超临界提取物的牙膏,膏体颜色较浅基本不影响膏体外观,添加了醇提蜂胶的牙膏颜色较深,用不同工艺的两种蜂胶制得的牙膏稳定性均较好。

蜂胶的抗病原微生物作用

蜂胶的抗病原微生物作用是蜂胶最重要的生物学活性之一。不同提取方法得到的蜂胶提取物都有显著的抗病原微生物作用,包括抗细菌、真菌、寄生虫、病毒。对近十多年来蜂胶醇提物(EEP)、蜂胶水提物(WEP)和其他类型蜂胶提取物的抗病原微生物作用的相关研究进展进行综述,以期为蜂胶抗病原微生物活性的进一步研究以及开发利用提供参考。

中国不同地区蜂胶的抑菌性研究

蜂胶具有显著的抑菌性,常被做成药品或保健品.为了解中国蜂胶的抑菌性,本实验以采自中国23个省的29种蜂胶(根据采集地气候区域分为5类)为研究对象,分别提取获得蜂胶醇提物(EEP),并测定了EEP对枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、产气杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、毛霉、青霉、曲霉、根霉的抑菌圈大小和最小抑菌浓度,比较不同气候区域蜂胶的抑菌性差异.结果表明,EEP对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌均有明显的抑菌性,平均抑菌圈直径分别为:9.88mm±1.47 mm、8.75 mm±1.56 mm和10.01 mm±0.65 mm,EEP对真菌的抑菌性最强,其次为革兰氏阳性菌,最弱为革兰氏阴性菌;9个菌种中,EEP对变形杆菌的抑菌性最差,对根霉的抑菌性最好;不同气候区域蜂胶的EEP抑菌性没有显著差异.

蜂胶醇提物微胶囊的制备及表征

微胶囊具有保护物质免受环境条件影响、掩盖异味和颜色、降低毒性、延长挥发性物质的储存时间,延缓或控制囊心物的释放等功能。本文采用复凝聚技术制备蜂胶醇提物（EEP）海藻酸钠-壳聚糖微胶囊,利用粒度分析仪、激光共聚焦显微镜、红外光谱仪和X射线衍射仪分析、体外释放试验和加速试验等表征微胶囊性状。研究结果表明,制备的EEP微胶囊形状为大小均匀球体,粒径大小为265±25 nm,包埋率和载药量分别达到72.80±3.8%和19.96±2.4%,海藻酸钠和壳聚糖反应形成微胶囊。模拟胃液和肠液条件下体外释放8 h,释放率46.60±0.80%;HPLC分析加速试验EEP微胶囊中7种物质含量变化为14.01%-39.68%,显著低于EEP中37.01%-77.45%。制得的EEP微胶囊粒径小、稳定性良好、释放率符合肠溶体系要求,对EEP中的活性物质具有一定的保护作用。

蜂胶分级提取物的神经保护功效及成分研究

研究蜂胶中具有神经保护功效的活性成分,对N2a细胞进行氧糖剥夺(OGD)模拟体内缺血再灌注模型。采用CCK-8法检测细胞存活率并以其作为活性筛选指标,以吉姆萨染色法观测细胞形态学指标,对蜂胶分级醇提物进行抗脑缺血再灌注损伤的活性研究。结合HPLC进行成分分析。结果表明:蜂胶分级醇提物的最大作用质量浓度不超过20μg/m L,以ODG4h复糖复氧24 h为最佳模型条件,对蜂胶分级醇提物进行活性筛选,蜂胶70%醇溶物活性最高,5,10μg/m L和15μg/m L剂量组细胞存活率和细胞形态较模型组细胞均显示有极显著差异,且神经保护活性存在剂量依赖关系。HPLC分析表明,70%醇溶物中含量较高的黄酮类成分为白杨素和松属素,可作为评估蜂胶神经保护功效活性的指标。