蜈蚣提取液治疗肝癌Bel-7404细胞后的差异表达蛋白研究

目的筛选蜈蚣提取液(ECP)治疗肝癌Bel-7404细胞后的相关差异表达蛋白,探讨其药物治疗机制。方法一步抽提法制备肝癌Bel-7404细胞株治疗组ECP浓度(10 mg/mL)和对照组(RPIM1640完全培基培养)的总蛋白质,双向凝胶电泳建立两组总蛋白的双向凝胶电泳图谱,PDQuest软件对其图谱比较,MAL-DI-TOF-MS对差异表达的蛋白质进行分析并获取肽质量指纹图谱,数据库搜索鉴定主要差异表达蛋白质。结果共发现76个差异表达蛋白点(P<0.05)。治疗组中41个表达下调,35个表达上调。选择最明显的14个蛋白质斑点作质谱分析,其中肽基脯氨酰顺反异构酶A(PPIA)、核纤层蛋白-B1(Lamin-β1)、黄素还原酶(FRase)、转铁结合蛋白2(Tbp2)、唾液酸合成酶(SAS)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、周期素依赖激酶抑制蛋白1(P21)和半乳凝素(Gal-7)在治疗组中表达上调,角蛋白(CK-19)、肌动蛋白(Actin)、转内质网ATP(三磷酸腺苷酶)酶(TER ATPase)、ω-1谷胱甘肽转移酶(GSTO1-1)、抑制蛋白(PFN1)及碱性磷酸酶(ALP)在治疗组中表达下调。结论 ECP能诱导肝癌Bel-7404细胞内某些蛋白异常表达,能多途径抑制肝癌细胞的生长,诱导其凋亡或直接死亡。

蜈蚣提取液对肝癌Bel-7404细胞体外抗癌作用的研究

目的研究不同浓度蜈蚣提取液(ECP)对肝癌(HCC)Bel-7404细胞株的敏感性。方法通过MTT实验、细胞药物浓度—时间生长曲线研究不同浓度ECP对Bel-7404细胞株的敏感性;利用光学与电子显微镜观察细胞形态及其超微结构变化。结果①MTT法揭示各浓度ECP对人HCC细胞Bel-7404生长均有抑制作用。②细胞生长曲线图显示Bel-7404活细胞数目与ECP浓度及药物作用时间相关。ECP在5 g/L时,Bel-7404活细胞数先增多,48 h后细胞数开始减少;浓度在10 g/L与20 g/L时,用药后24 h活细胞数就显著减少。各组间活细胞数比较有显著性差异(P<0.01)。③光镜下见ECP作用48 h后,浓度低于5 g/L对Bel-7404细胞无明显的抑制作用,浓度在10 g/L以上时,Bel-7404活细胞数减少,细胞形态改变,细胞坏死。电镜下见治疗组细胞密度增高,染色质凝集固缩,染色质边集,核固缩、核碎裂,及凋亡小体的形成。结论①ECP能抑制人HCC细胞Bel-7404的增殖,且抑制作用呈剂量和时间依赖效应;②ECP低浓度有诱导肿瘤细胞凋亡作用,中、高浓度有直接杀肿瘤细胞作用。

蜈蚣提取液对裸鼠移植肝癌治疗作用研究

目的探讨蜈蚣提取液体内对肝癌的治疗作用及其机制。方法建立裸鼠Bel-7404人异位肝癌移植模型,以蜈蚣提取液予以灌服,观察肿瘤生长、裸鼠胸腺与脾质量及肝癌转移情况。结果裸鼠Bel-7404人异位肝癌移植模型成功率100%。蜈蚣提取液对裸鼠Bel-7404移植瘤有明显抑制作用,在移植后第31天,对照组的肿瘤体积为(1 187.5±117.4)mm3,治疗组为(506.1±65.7)mm3;裸鼠处死后,对照组的肿瘤质量为(1 059±125.2)mg,治疗组为(647±122.89)mg,抑制率达38.91%。治疗组胸腺指数为(2.15±0.43)%,脾指数为(10.63±3.7)%,对照组胸腺指数(0.81±0.27)%,脾指数为(7.90±2.58)%,2组比较有显著差异性。结论蜈蚣提取液能抑制裸鼠Bel-7404移植瘤的生长,机制为其能提高荷瘤裸鼠的胸腺指数及脾指数,具有增强裸鼠免疫功能作用。

蜈蚣提取液对局灶性脑缺血再灌注大鼠血浆vWF和TPO的影响

目的:研究蜈蚣提取液对局灶性脑缺血再灌注大鼠血浆血管假血友病因子(vWF)和血小板生成素(TPO)的影响。方法:将雄性SD大鼠采用线栓法建立大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、蜈蚣提取液高、中、低剂量组(0.7,0.35,0.175 g.kg-1)和益气活血方组(8.54 g.kg-1),造模后连续ig给药14 d,采用ELASA法测定大鼠血浆vWF和TPO含量。结果:模型组大鼠血浆vWF和TPO含量明显高于假手术组,蜈蚣提取液高剂量组大鼠血浆vWF和TPO含量较模型组明显降低(P<0.05或P<0.01),益气活血方组大鼠血浆TPO含量较模型组明显降低(P<0.01),益气活血方组大鼠血浆vWF较模型组降低但无显著性差异,蜈蚣提取液中、低剂量组大鼠血浆vWF和TPO含量较模型组降低,无显著性差异。结论:蜈蚣提取液能通过降低局灶性脑缺血再灌注大鼠血浆vWF和TPO的含量,改善脑缺血再灌注造成的损伤。

蜈蚣提取液对裸鼠移植肝癌抑癌作用及机制的研究

目的探讨蜈蚣提取液对裸鼠移植肝癌的治疗作用及机制。方法建立裸鼠Bel-7404人异位肝癌移植模型,以蜈蚣提取液灌胃31d后,用免疫组化法对肿瘤组织标本进行X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、Bax基因、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和促血管生成素2(Ang-2)的检测。结果对照组XIAP,VEGF与Ang-2的染色细胞数、染色强度及OD值均较治疗组多而强,而Bax的染色强度、染色细胞数及OD值较治疗组少而弱,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论蜈蚣提取液能抑制裸鼠Bel-7404移植瘤的生长,其机制与抑制肿瘤血管生成、促进肿瘤细胞凋亡有关。