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中华绒螯蟹蜕皮抑制激素基因全长cDNA克隆和重组表达
被引量:
7
1
作者
孙妍
张亦陈
+5 位作者
刘逸尘
王雪惠
王宇凡
耿绪云
孙金生
杨卫军
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第2期210-217,共8页
根据实验室分离自中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的一种蜕皮抑制激素(Molting-inhibiting hormone,MIH)N端氨基酸测序结果设计简并引物,采用RACE方法,首次从中华绒螯蟹眼柄中克隆到蜕皮抑制激素基因全长cDNA(Es-MIH,GenBank登录号:DQ34...
根据实验室分离自中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的一种蜕皮抑制激素(Molting-inhibiting hormone,MIH)N端氨基酸测序结果设计简并引物,采用RACE方法,首次从中华绒螯蟹眼柄中克隆到蜕皮抑制激素基因全长cDNA(Es-MIH,GenBank登录号:DQ341280),该基因全长为1457 bp,开放阅读框为330 bp,编码110个氨基酸(含有35个氨基酸的信号肽);其成熟肽包含C7-C44、C24-C40和C27-C53三个二硫键,有典型的CHH家族结构域。该cDNA编码的氨基酸序列与地蟹(Gecarcinus lateralis)MIH同源性最高,达到了85%。Northern杂交和半定量RT-PCR显示蜕皮间期成体蟹仅在眼柄中有MIH基因表达,提示该基因的表达具有一定组织特异性。利用pCR T7/NT TOPO TA系统重组表达MIH成熟肽,纯化的重组蛋白得率为0.3 g/L,纯化产物经质谱鉴定为中华绒螯蟹MIH。研究解决了CHH家族神经肽在机体中的表达量少,直接纯化较难的问题,为深入研究MIH的作用机制和在生产上控制中华绒螯蟹蜕皮和生长奠定了基础。
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关键词
中华绒螯蟹
蜕皮抑制激素基因
组织表达
重组表达
纯化
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职称材料
重叠延伸拼接法从基因组DNA中获得Ers-MIH1基因的编码区
2
作者
郭豫杰
鲁维飞
+1 位作者
韩立强
杨国宇
《河北渔业》
2006年第10期13-15,48,共4页
蜕皮抑制激素(molt-inhibiting hormone,MIH)产生于端髓X-器官(MTXO),储存在甲壳动物眼柄的窦腺中,抑制Y-器官蜕皮素的分泌,参与调控甲壳动物的生长和发育等重要的生理活动。提取中华绒螯蟹肌肉组织中的基因组DNA,以此为模板,采用重叠...
蜕皮抑制激素(molt-inhibiting hormone,MIH)产生于端髓X-器官(MTXO),储存在甲壳动物眼柄的窦腺中,抑制Y-器官蜕皮素的分泌,参与调控甲壳动物的生长和发育等重要的生理活动。提取中华绒螯蟹肌肉组织中的基因组DNA,以此为模板,采用重叠延伸拼接法(gene splicing by overlap extension,SOE)将中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1Eriocheir sinensismolt-inhibiting hormone-1(Ers-MIH1)成熟肽基因的编码区连接起来,克隆到pMD18-T载体中,随机挑取3个阳性克隆测序,测序结果与已知的Ers-MIH1基因编码区的序列相一致。从基因组DNA中克隆该基因的方法有效地解决了取材不便给研究中华绒螯蟹蜕皮抑制激素基因所带来的限制等问题。
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关键词
中华绒螯蟹
基因
组DNA
蜕皮抑制激素基因
1
重叠延伸拼接法
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职称材料
题名
中华绒螯蟹蜕皮抑制激素基因全长cDNA克隆和重组表达
被引量:
7
1
作者
孙妍
张亦陈
刘逸尘
王雪惠
王宇凡
耿绪云
孙金生
杨卫军
机构
天津师范大学生命科学学院
天津市水产养殖病害防治中心
浙江大学生命科学学院
出处
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第2期210-217,共8页
基金
国家自然科学基金(30571421
30871907)
+5 种基金
天津市应用基础及前沿技术研究项目(10JCZDJC18200
09JCYBJC15000
10JCYBJC09200)
国家科技支撑计划项目(2006BAD09A11)
天津市高等学校科技发展基金计划项目(20080618)
天津师范大学博士基金项目(52LX18119)资助
文摘
根据实验室分离自中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的一种蜕皮抑制激素(Molting-inhibiting hormone,MIH)N端氨基酸测序结果设计简并引物,采用RACE方法,首次从中华绒螯蟹眼柄中克隆到蜕皮抑制激素基因全长cDNA(Es-MIH,GenBank登录号:DQ341280),该基因全长为1457 bp,开放阅读框为330 bp,编码110个氨基酸(含有35个氨基酸的信号肽);其成熟肽包含C7-C44、C24-C40和C27-C53三个二硫键,有典型的CHH家族结构域。该cDNA编码的氨基酸序列与地蟹(Gecarcinus lateralis)MIH同源性最高,达到了85%。Northern杂交和半定量RT-PCR显示蜕皮间期成体蟹仅在眼柄中有MIH基因表达,提示该基因的表达具有一定组织特异性。利用pCR T7/NT TOPO TA系统重组表达MIH成熟肽,纯化的重组蛋白得率为0.3 g/L,纯化产物经质谱鉴定为中华绒螯蟹MIH。研究解决了CHH家族神经肽在机体中的表达量少,直接纯化较难的问题,为深入研究MIH的作用机制和在生产上控制中华绒螯蟹蜕皮和生长奠定了基础。
关键词
中华绒螯蟹
蜕皮抑制激素基因
组织表达
重组表达
纯化
Keywords
Eriocheir sinensis
Molt-inhibiting hormone
Cloning
Expression profile
Prokaryotic expression
分类号
Q781 [生物学—分子生物学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
重叠延伸拼接法从基因组DNA中获得Ers-MIH1基因的编码区
2
作者
郭豫杰
鲁维飞
韩立强
杨国宇
机构
河南农业大学牧医工程学院
出处
《河北渔业》
2006年第10期13-15,48,共4页
文摘
蜕皮抑制激素(molt-inhibiting hormone,MIH)产生于端髓X-器官(MTXO),储存在甲壳动物眼柄的窦腺中,抑制Y-器官蜕皮素的分泌,参与调控甲壳动物的生长和发育等重要的生理活动。提取中华绒螯蟹肌肉组织中的基因组DNA,以此为模板,采用重叠延伸拼接法(gene splicing by overlap extension,SOE)将中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1Eriocheir sinensismolt-inhibiting hormone-1(Ers-MIH1)成熟肽基因的编码区连接起来,克隆到pMD18-T载体中,随机挑取3个阳性克隆测序,测序结果与已知的Ers-MIH1基因编码区的序列相一致。从基因组DNA中克隆该基因的方法有效地解决了取材不便给研究中华绒螯蟹蜕皮抑制激素基因所带来的限制等问题。
关键词
中华绒螯蟹
基因
组DNA
蜕皮抑制激素基因
1
重叠延伸拼接法
Keywords
Eriocheir japonica sinensis genomic DNA molt- inhibiting hormone- 1 gene splicing by overlap extension (SOE)
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
中华绒螯蟹蜕皮抑制激素基因全长cDNA克隆和重组表达
孙妍
张亦陈
刘逸尘
王雪惠
王宇凡
耿绪云
孙金生
杨卫军
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
7
下载PDF
职称材料
2
重叠延伸拼接法从基因组DNA中获得Ers-MIH1基因的编码区
郭豫杰
鲁维飞
韩立强
杨国宇
《河北渔业》
2006
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
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