IL-1β或TNF-α干预的子宫蜕膜细胞对母胎界面Th1/Th2及Th17/Treg平衡的影响

目的:探讨IL-1β或TNF-α干预的子宫蜕膜细胞对母胎界面Th1/Th2及Th17/Treg平衡的影响。方法:子宫蜕膜细胞经体外分离后,加入10–8 mol/L雌二醇(E2)+10–7 mol/L孕激素(P)培养7 d后,分别给予IL-1β或TNF-α干预24 h,收集上清液,制备条件培养液。应用条件培养液刺激子宫蜕膜T细胞72 h后,收集上清液,ELISA法检测上清液IFN-γ,IL-2,IL-17,IL-5,IL-10及TGF-1β的表达。收集子宫蜕膜T细胞,提取RNA,用实时定量PCR检测细胞因子m RNA的表达。通过T细胞分泌的细胞因子水平来评估子宫蜕膜细胞对Th1/Th2及Th17/Treg平衡的影响。结果:IL-1β或TNF-α干预子宫蜕膜细胞24 h后,其条件培养液能够促使子宫蜕膜T细胞Th1细胞因子IFN-γ分泌增加7~8倍,IL-2分泌增加6~7倍,Th17细胞因子IL-17分泌增加15~19倍,Th2细胞因子IL-10和IL-5的分泌无差异,Treg细胞因子TGF-1β的分泌无差异;其条件培养液促使IFN-γ和IL-17 m RNA表达增加,而IL-10及TGF-1βm RNA的表达无差异。结论:IL-1β或TNF-α刺激的子宫蜕膜细胞改变母胎界面Th1/Th2及Th17/Treg细胞的平衡,向Th1及Th17偏移。

自然流产中的早孕期蜕膜细胞Bcl-2/Bax比例异常

探讨早孕期蜕膜组织细胞凋亡异常与妊娠失败的关系。应用TUNEL法测定凋亡的发生及凋亡细胞的定位 ,免疫组化法检测Bcl 2、Bax蛋白的表达和相互关系。结果发现 :(1)正常早孕 4 0d蜕膜组织细胞大量凋亡 ,Bcl 2蛋白表达量较低 ,Bax蛋白有较强表达。 (2 )正常早孕 5 0d ,凋亡细胞明显减少 ,Bcl 2的表达显著增强 ,Bax蛋白表达减弱。 (3)早孕 5 0d自然流产组 ,蜕膜组织大量凋亡 ,与同时期正常蜕膜组织相比 ,P <0 0 1。Bcl 2蛋白表达明显降低 ,Bax蛋白表达明显增强 ,Bcl 2 /Bax比例降低。早孕期蜕膜组织凋亡异常可能是自然流产的机制之一 ,Bcl 2

米非司酮(RU486)、ZK98.734对离体培养人蜕膜细胞形态的影响

本文采用人早孕蜕膜细胞离体培养的方法,观察不同浓度的抗孕激素RU486(米非司酮)和ZK98.734 对蜕膜细胞生长发育的作用。结果表明,(1)在浓度为5×10^(-4)mol/l—5×10^(-6)mol/l的范围内,RU486(米非司酮)和ZK98.734对离体培养人蜕膜细胞生长发育具有抑制作用,作用的强度与浓度有关。(2)两种抗孕激素相比较,RU486的作用强于ZK98.734。(3)抗孕激素对蜕膜细胞的作用是暂时的、可恢复的。研究结果提示,抗孕激素除通过受体途径达到抗早孕目的外,对蜕膜组织的生长发育也有抑制作用,但由于这一作用具有可逆性,故只能在某一时期发挥作用。

蜕膜细胞条件培养液对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响

目的 探讨蜕膜细胞条件培养液（DCM）对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响。方法 用体外培养早孕、晚孕蜕膜细胞的方法制备DCM,然后将其处理体外培养的早孕滋养细胞。用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析早孕滋养细胞侵袭调节基因表达的变化。结果 正常培养的早孕滋养细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、基质金属蛋白酶抑制物（TIMP-1）、尿激酶型纤溶酶原激活因子（u-PA）mRNA均有表达;而TIMP-2、纤溶酶原激活因子抑制因子（PAI-1）mRNA未见表达。早孕和晚孕DCM均能下调滋养细胞MMP-2、MMP-9、u-PAmRNA的表达,而上调TIMP-1mRNA的表达。早孕、晚孕DCM均能诱导滋养细胞PAI-1mRNA的表达,但对TIMP-2mRNA的表达未见有影响。结论 蜕膜细胞可能通过调节滋养细胞中MMP-2、MMP-9与TIMP-1之间的平衡以及u-PA与PAI-1之间的平衡,而影响滋养细胞的侵袭能力。

肿瘤坏死因子α诱导蜕膜细胞凋亡模型建立及黄芩苷对蜕膜细胞凋亡的影响

目的:探索建立肿瘤坏死因子诱导蜕膜细胞凋亡模型,观察黄芩苷对早孕蜕膜细胞凋亡的影响,初步分析黄芩清热安胎作用机制。方法:实验于2006-04/09在湖南中医药大学国家重点二级实验室病理生理实验室完成。取湖南中医药大学第一附属医院门诊人流手术室正常妊娠40d健康孕妇人流组织,患者知情同意。体外常规进行蜕膜细胞培养,选取经鉴定的4、5代细胞蜕膜细胞,用不同浓度(0.5,2.0,10.0,50.0μg/L,共设4组,并设空白对照组)的肿瘤坏死因子α作用于蜕膜细胞,四甲基偶氮唑盐比色实验分析肿瘤坏死因子α对蜕膜细胞活力的影响,荧光细胞染色观察确定蜕膜细胞凋亡模型的建立。选取适宜浓度的黄芩苷作用于正常蜕膜细胞及肿瘤坏死因子α诱导的凋亡蜕膜细胞(设肿瘤坏死因子α模型组,黄芩苷组,肿瘤坏死因子α加黄芩苷组,并设空白对照组),培养24h后,四甲基偶氮唑盐比色实验分析黄芩苷对蜕膜细胞活力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:实验成功获取足够量的细胞,经泌乳素免疫组化鉴定为较高纯度的蜕膜细胞。①肿瘤坏死因子α作用后的蜕膜细胞活性均低于空白对照组,并且随着肿瘤坏死因子α浓度越大,活力越小。10.0,50.0μg/L肿瘤坏死因子α作用后蜕膜细胞活性与空白对照组比较,差异有显著性意义[(0.196±0.040),(0.106±0.020),(0.317±0.020),P<0.05]。但50.0μg/L时经形态学观察有部分细胞漂浮、死亡。②肿瘤坏死因子α模型组蜕膜细胞活性低于黄芩苷组和肿瘤坏死因子α加黄芩苷组,差异具有显著性意义[(0.27±0.03),(0.49±0.01),(0.38±0.02),P<0.05]。③流式细胞术示空白对照组蜕膜细胞凋亡率低于其他各组,差异均有显著性意义[(1.48±0.45)%,(16.40±0.82)%,(9.78±0.26)%,(10.96±0.92)%,P<0.05]。在荧光显微镜下,肿瘤坏死因子α作用后凋亡的蜕膜细胞细胞核变小皱缩,可见致密强荧光。结论:肿瘤坏死因子α能明显抑制人蜕膜细胞增殖分裂的过程,诱导该细胞凋亡,可用于人蜕膜细胞凋亡模型的建立。而黄芩苷对肿瘤坏死因子α诱导的蜕膜细胞凋亡具有一定对抗抑制作用。

Luminex液相芯片技术测定人早孕滋养层细胞及蜕膜细胞中基质金属蛋白酶的表达

目的研究人正常早孕滋养层细胞与蜕膜细胞中基质金属蛋白酶(MMPs)的表达特点,探讨子宫内膜蜕膜化进程中MMPs的变化及对胚胎着床的影响。方法收集正常妇女分泌期子宫内膜及人正常早孕绒毛和相应蜕膜标本各5例,分别进行离体培养,鉴定其纯度在98%以上后,收集培养上清液,利用Luminex(LumAvidinBeads)测定培养上清液中MMPs(MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-12、MMP-13)蛋白表达的变化,分析MMPs在不同培养条件下的表达差异及表达之间的相关性。结果①在不同培养条件下,MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9均有表达,MMP-12及MMP-13分别在ESC及DSC中无表达,且MMP-8、MMP-12、MMP-13表达均低。②与子宫内膜细胞相比,MMP-1、MMP-3、MMP-7在DSC,EVCT中表达均降低,降低有显著性差异(P<0.05),而MMP-2、MMP-8、MMP-9在DSC,EVCT中则显著升高,升高有显著性差异(P<0.05)。且在蜕膜细胞中,MMP-1、MMP-3、MMP-2、MMP-7高表达尤为显著。③与蜕膜细胞相比,MMP-1、MMP-3、MMP-7在EVCT中表达显著降低(P<0.05)。MMP-2、MMP-9、MMP-13在EVCT中升高有显著性(P<0.05)。且在滋养层细胞中,MMP-2、-9高表达尤为显著。④MMPs之间的相关性:MMP-2与MMP-9相关关系显著(P<0.05),且关系较密切(r=0.6645)。MMP-1,MMP-3,MMP-7两两间相关关系显著(P<0.05),且关系密切(r>0.7340)。其他MMP之间相关关系不显著。结论首次利用LuminexxMAP方法多通量的检测到子宫内膜间质细胞、早孕蜕膜细胞与滋养层细胞的多种MMPs的表达,它们均可分泌多种MMP,但是不同种类组织细胞的表达量不同;MMPs可能通过调控子宫内膜蜕膜化及母胎界面间MMPs的变化而影响胚胎着床,为成功妊娠创造条件。

钙调素拮抗剂对离体培养人蜕膜细胞形态和活力的影响

实验选用早孕人工流产蜕膜组织进行体外培养，观察钙调素桔抗剂——氯丙嗪（CP）和Ca2+整合剂——EGTA对蜕膜细胞形态和活力的影响。结果表明：高于20μmol／L的CPZ或高于2mmol／L的EGTA均可明显改变蜕膜细胞的形态，并对其活力产生显著的抑制作用。CPZ或EGTA浓度越大，抑制作用越明显。EGTA可增强CPZ对蜕膜细胞活力的抑制作用。由此推测，Ca2+－CaM激酶系统可能直接参与子宫蜕膜的发育与维持，这可能是CaM桔抗剂抗早孕的机理之一。

睾丸酮对离体培养人蜕膜细胞形态的影响

实验选用早孕人工流产蜕膜组织进行体外培养,观察睾丸酮对蜕膜细胞形态的影响并与RU 486加以比较。研究结果提示:(1)睾丸酮(6.9×10^(-5)mol/L)能抑制离体培养人蜕膜细胞的生长发育,但这种抑制作用是暂时和可恢复的且与用药剂量及持续时间有关。(2)睾丸酮对蜕膜细胞形态的影响与RU 486(4.7×10^(-4)mol/L)的作用效果相似。

生化止血饮对药物流产后大鼠子宫蜕膜细胞Fas mRNA及bcl-2 mRNA的影响

目的探讨生化止血饮对药物流产(药流)后大鼠子宫蜕膜凋亡基因Fas mR-NA及凋亡抑制基因bcl-2 mRNA的影响及作用机制。方法建立正常对照组、模型组、益母草组、生化止血饮组,用原位杂交的方法检测凋亡基因Fas mRNA及凋亡抑制基因bcl-2mRNA的表达。结果生化止血饮可显著增加子宫蜕膜细胞凋亡基因Fasm RNA的表达,减低凋亡抑制基因bcl-2 mRNA的表达,与益母草组和模型组比较均有显著性差异(P均<0.05)。结论生化止血饮能通过增加蜕膜组织中凋亡基因Fas的表达和降低凋亡抑制基因bcl-2的表达而加速残留蜕膜从子宫壁剥脱来达到止血的目的。

复发性流产患者子宫蜕膜细胞凋亡蛋白Fas、抑制凋亡蛋白Bcl-2表达的相关性研究

目的:探讨子宫蜕膜细胞凋亡蛋白Fas、抑制凋亡蛋白Bcl-2与复发性流产患者的相关性。方法:选择20例复发性流产患者作为研究组,以下称RAS组,同期正常计划外受孕者20例作为对照组。采用免疫组织化学方法测定各组子宫蜕膜细胞Fas、Bcl-2蛋白的表达。根据阳性表达率和表达强度进行量化评分,并进行相关性分析。结果:RAS组Fas的表达为(4.67±0.59)明显高于对照组(1.31±0.66)(P<0.001),而Bcl-2的表达为(1.76±0.51)明显低于对照组(4.89±0.41)(P<0.001),且两者的表达呈明显负相关(r=-0.61,P<0.05)。结论:①子宫蜕膜细胞Bcl-2低表达、Fas高表达与复发性流产患者的发生有关。②Fas与Bcl-2在子宫蜕膜细胞中的表达失衡可能是复发性流产患者发生的原因之一。

人胎盘蜕膜细胞5-羟色胺及其受体的免疫组织化学及原位杂交研究

目的 观察 5 -羟色胺 (5 - HT)及其受体在人胎盘的定位及其含量的周龄变化。 方法 采用免疫组织化学、原位杂交及图像分析技术。 结果 人胎盘蜕膜细胞呈 5 - HT及其受体免疫反应性 ,两种阳性反应物质均分布于胞质 ,胞核为阴性。蜕膜细胞同样含有 5 - HT1 A受体 m RNA杂交信号。蜕膜细胞 5 - HT及其受体免疫反应产物的相对含量随妊娠周龄的增加而增加。 结论 人胎盘蜕膜细胞既能产生 5 - HT,又能表达 5 - HT受体。说明 5 -HT对蜕膜细胞可能具有自调节作用。

蓖麻油甾醇组成及其对大鼠蜕膜细胞的影响

目的进一步探明蓖麻油中的抗生育物质成分。方法利用皂化和萃取,从蓖麻油中提取甾醇,用GC-MS分析蓖麻油甾醇成分;用MTT法检测蓖麻油甾醇对原代培养大鼠蜕膜细胞活力的影响。结果蓖麻油总甾醇的主要成分为γ-谷甾醇(43.02%)、豆甾醇(27.15%)、岩藻甾醇(11.43%)、麦角甾-5-稀-3-醇(6.00%)和普罗布考(7.46%)。蓖麻油甾醇对细胞活力有抑制作用,其半抑制剂(IC50)剂量为:(88.45±3.196)μg/ml,r=+0.9549;抑制作用具有量-效关系。结论在蓖麻油甾醇的主要成分中,γ-谷甾醇(r-Sitosterol)可能是抑制原代培养大鼠蜕膜细胞活力的主要成分,而豆甾醇(stigmasterol)可能起协助的作用。

菟丝子含药血清对TNF-α诱导下人蜕膜细胞凋亡的影响

目的:通过菟丝子含药血清对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人体外培养蜕膜细胞凋亡的影响,以期从蜕膜细胞凋亡角度探讨菟丝子可能的安胎机制。方法:体外培养人蜕膜细胞,通过TNF-α诱导蜕膜细胞凋亡,菟丝子含药血清干预,MTT比色实验分析TNF-α及菟丝子含药血清作用后人蜕膜细胞活力,并用流式细胞术分析菟丝子含药血清对人蜕膜细胞凋亡的影响。结果:TNF-α作用后的人蜕膜细胞活性均低于空白对照组,随着TNF-α质量分数的增加,活性越来越小;10,50μg/L的TNF-α作用后,与空白对照组对比,差别有统计学意义(P<0.05)。200 m L/L菟丝子含药血清干预后的人蜕膜细胞活性高于TNF-α凋亡模型组,差别有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术示菟丝子含药血清作用后的人蜕膜细胞凋亡率低于凋亡模型组,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:TNF-α能降低体外培养人蜕膜细胞活力,诱导细胞凋亡;菟丝子含药血清对TNF-α诱导培养的人蜕膜细胞凋亡有一定抑制作用。

腹膜蜕膜细胞样型弥漫性恶性间皮瘤1例并文献复习

目的因蜕膜细胞样型弥漫性恶性间皮瘤罕见,本文旨在探讨其临床病理特征、免疫组化及鉴别诊断要点,以减少漏诊及误诊。方法回顾性分析1例腹膜蜕膜细胞样型弥漫性恶性间皮瘤的临床资料、病理学特点并复习相关文献进行讨论。结果临床表现腹胀痛腹泻、大量腹水。抽吸腹水送细胞病理学检查,查见恶性肿瘤细胞。遂术中探查送病检,镜下见肿瘤细胞呈实体片状、巢团状或单个散在分布于纤维结缔组织中。瘤细胞类似蜕膜细胞,体积大,圆形、卵圆形或多角形,边界清楚。胞核圆形、卵圆形,居中,可见双核,偶见多核;核染色质大部分细腻,核仁明显;胞质丰富,嗜酸性,呈毛玻璃样改变或灰白透明。核分裂象0~2个/10HPF。免疫组织化学结果示Vim+,D2-40+,CK5/6局部+,CR灶+,WT-1灶+,AE1/AE3+,EMA+,E-cadherin-,HCG-,Inhibin-。病理诊断腹膜蜕膜细胞样型弥漫性恶性间皮瘤。结论蜕膜细胞样型弥漫性恶性间皮瘤临床罕见,免疫组织化学检测是诊断该肿瘤及鉴别其他病变的重要手段。常用间皮瘤标记有CK5/6、CR、Thrombomodulin、HBME-1、D2-40、WT-1、Vim、EMA等。预后与肿瘤染色体缺失数量有关。

菟丝子含药血清干预TNF-α诱导人蜕膜细胞异常凋亡后基因表达谱的变化

目的:观察菟丝子含药血清干预肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导建立人蜕膜细胞异常凋亡模型后基因表达谱的变化,以期从基因表达谱的变化探讨菟丝子安胎的分子机理。方法:体外常规进行人蜕膜细胞的培养,选用适宜浓度的TNF-α诱导建立人蜕膜细胞异常凋亡模型,用菟丝子含药血清干预,采用一步法抽提RNA,用人全基因组17Kc DNA基因芯片来分析菟丝子作用后的基因表达谱变化情况,分析基因的变化趋势。结果:菟丝子含药血清作用于TNF-α诱导的异常凋亡的蜕膜细胞后共检出基因10 230条,其中共检出表达差异基因128条,上调基因76条,下调基因52条;这些表达差异基因有细胞因子及受体、转录相关基因、凋亡相关基因、生长分化相关基因、信号转导相关基因、细胞周期相关基因、电子传递和氧化相关基因、转移酶相关基因、核酸酶相关基因等。结论:菟丝子可能通过以上基因的表达,调控蜕膜细胞的生长周期及异常凋亡,在免疫调节等方面发挥有一定的安胎作用。

催产素对妊娠末期大鼠蜕膜细胞内游离钙的刺激作用

妊娠末期催产素刺激子宫蜕膜细胞产生与分娩有关的前列腺素，但其作用方式仍未知。本实验分离妊娠１９ｄ大鼠蜕膜细胞，测定了催产素作用后蜕膜细胞内游离钙的变化，结果加入０．００１～１μｍｏｌ·Ｌ－１催产素后，蜕膜细胞内［Ｃａ２＋］ｉ出现瞬息增加，其峰值与催产素浓度呈剂量依赖关系，且此作用有自身钝化现象。说明催产素可能激活妊娠末期大鼠蜕膜细胞内的肌醇磷酯蛋白激酶Ｃ系统。给妊娠末期大鼠ｉｐ硫酸去氢表雄酮钠盐后分离的蜕膜细胞，催产素作用引起［Ｃａ２＋］ｉ瞬息增加峰值较对照升高。

猫网膜弥漫性蜕膜细胞样恶性间皮瘤的病理组织学观察

蜕膜细胞样间皮瘤（Deciduoid mesothelioma）是一种罕见的呈多样化的上皮型间皮瘤,由于它呈现蜕膜样的形态所以称为蜕膜细胞样间皮瘤[1]。国内外关于蜕膜细胞样间皮瘤的报道在人类疾病中可见有少数病例,是在犬猫疾病中的报道极少。本实验室与2014年9月接诊到1例犬的蜕膜细胞样间皮瘤病例报告如下。1材料与方法患病动物为11岁雌性猫,因严重的乳糜胸人院,剖检可见大网膜上广泛种植性肿瘤,肿瘤呈灰白色结节状。

Th1型/Th2型细胞因子对蜕膜细胞活性及其泌乳素分泌的影响

目的 :研究Th1型 /Th2型细胞因子对人孕早期蜕膜细胞活性及泌乳素 (PRL)分泌的影响。方法 :蜕膜细胞活性采用MTT法进行检测 ,蜕膜组织分泌PRL的活性采用放免法 (RIA)进行分析测定。结果 :Th1型细胞因子IFNγ低浓度时 (1～ 10ng/ml)对蜕膜细胞活性及PRL分泌有促进作用 (P <0 0 5 ) ,高浓度时 (10 0～ 10 0 0ng/ml)则有抑制作用 (P <0 0 1)。而Th2型细胞因子IL 4在一定浓度范围内 (1～ 10ng/ml)可明显促进蜕膜的上述功能 (P <0 0 1)。结论 :Th1型

菟丝子含药血清对TNF-α诱导凋亡蜕膜细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

[目的]观察菟丝子含药血清对TNF-α诱导人凋亡蜕膜细胞Bc1-2和Bax蛋白表达的影响,以期从蜕膜细胞凋亡的角度探讨菟丝子安胎的机理。[方法]体外常规进行人蜕膜细胞的培养,选用适宜浓度的TNF-α诱导建立人蜕膜细胞异常凋亡模型,用菟丝子含药血清干预,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测对照组、模型组(TNF-α)、治疗组(TNF-α+菟丝子含药血清)凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。[结果]与对照组比较,模型组细胞促凋亡蛋白Bax的表达明显增加,抑制凋亡蛋白Bc1-2的表达明显降低,均有显著性差异(P<0.05);与模型组比较,治疗组促凋亡蛋白Bax的表达明显降低,抑制凋亡蛋白Bc1-2的表达明显增加,均有显著性差异(P<0.05)。[结论]菟丝子含药血清可降低异常凋亡蜕膜细胞Bax水平,升高Bcl-2水平,从而可抑制早期蜕膜细胞的异常凋亡,起到保胎作用。