人早孕期蜕膜基质细胞对蜕膜NK细胞分泌IL-22的调节作用

目的:探讨蜕膜基质细胞(Decidual stromal cells,DSCs)与蜕膜NK细胞(dNK)共培养后IL-22的分泌水平。方法:收集早孕蜕膜组织,分离蜕膜基质细胞(DSCs)及蜕膜免疫活性细胞(Decidual immunocytes,DICs),磁珠分选蜕膜CD56brightCD3-NK细胞,再与DSC按不同比例直接接触共培养(dNK∶DSC为1∶1、1∶2、1∶3)24小时,收集上清。ELISA检测上清中IL-22的表达。结果:与对照组相比,DSC能上调dNK分泌IL-22。结论:蜕膜基质细胞可以促进蜕膜NK细胞分泌IL-22。

重度子痫前期蜕膜NK细胞Tim-3的表达及其相关作用

目的探讨重度子痫前期Tim-3+CD56^+CD16^-NK细胞的表达及其对滋养细胞侵袭及血管内皮细胞成管能力的影响。方法分离重度子痫前期患者(sPE组)及正常妊娠孕产妇(Normal组)的胎盘蜕膜组织中单个核细胞,细胞流式检测蜕膜NK细胞(decidual NK cell,dNK)细胞所占比例;免疫磁珠分选CD56^+CD16^-NK细胞,细胞流式及RT-PCR实验检测Tim-3在其中的表达;将分选出的CD56^+CD16^-NK细胞分为3组:正常对照(Control)组,即来源于正常妊娠胎盘蜕膜组织中的dNK细胞;重度子痫前期(sPE)组,即来源于重度子痫前期胎盘蜕膜组织中的dNK细胞;Tim-3封闭(Tim-3-Fc)组,即加入Tim-3-Fc融合蛋白进行处理的正常妊娠胎盘蜕膜组织中的dNK细胞。采用ELISA、Transwell侵袭及小管形成实验分别检测上述3组细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-8、VEGF及IFN-γ的表达及其对HTR8侵袭能力及血管内皮细胞成管能力的影响。结果与Control组相比,sPE组中CD56^+CD16^-NK细胞占蜕膜组织单个核细胞比例显著减少(P<0.05);免疫磁珠可分选出纯度达90%以上CD56^+CD16^-NK细胞,且sPE组中Tim-3的表达丰度及Tim-3 mRNA表达水平均较Control组显著降低(P<0.05);ELISA结果显示与Control组相比,sPE组与Tim-3-Fc组dNK细胞上清液中TNF-α、IFN-γ表达均显著增加(P<0.05),而IL-6、IL-8、VEGF表达均明显降低(P<0.05);Transwell侵袭实验及成管实验结果表明,sPE组与Tim-3-Fc组HTR8细胞侵袭能力及HUVEC成管能力较Control组显著降低(P<0.05),但Tim-3-Fc组HTR8细胞侵袭能力及HUVEC成管能力较sPE组明显增强(P<0.05)。结论重度子痫前期患者Tim-3+CD56^+CD16^-NK的表达显著降低,其可能通过损害蜕膜NK细胞的分泌功能来抑制滋养细胞的侵袭及血管内皮细胞的成管能力,从而促进子痫前期的发展。

蜕膜NK细胞KIR的基因分型与原因不明习惯性流产发病机制的研究

目的探讨免疫因素中蜕膜NK细胞KIR的基因分型对原因不明习惯性流产的发病机制。方法选择正常妊娠组28例孕产妇作为对照组,选择同期住院治疗的原因不明习惯性流产(三次以上不明原因的早期流产、并无活胎及中期流产史)为代表的病理妊娠组28例,分析两组的基因位点分布情况。结果发现14种KIR基因在URSA组与对照组蜕膜组织中均以不同频率表达,其中KIR2DL1、KIR2DL4、KIR3DL2、KIR3DL3的基因频率均为100%;与对照组相比,RSA组蜕膜组织中KIR3DS1、KIR2DS5的基因频率显著升高,KIR2DL2的基因频率显著降低,其他KIR基因位点未发现有统计学差异。结论蜕膜NK细胞KIR的基因分型与原因不明习惯性流产密切相关。

子痫前期蜕膜基质细胞通过CX3CL1/CX3CR1途径协同dNK细胞抑制滋养细胞的增殖与侵袭

目的:在子痫前期(PE)蜕膜组织中探究CX3CL1/CX3CR1的表达及其对dNK细胞功能的影响和对滋养细胞增殖与侵袭的调控。方法:取40例2018年9月至2019年10月于海南医学院第二附属医院产科住院分娩的孕产妇胎盘蜕膜组织,其中20例为PE患者(PE组),20例为正常妊娠女性(NP组),应用RT-PCR、ELISA及免疫组化(IHC)实验检测CX3CL1在两组胎盘蜕膜组织中的表达;分离早孕原代蜕膜基质细胞与蜕膜自然杀伤(dNK)细胞,细胞经形态学与流式细胞术鉴定,利用上调或沉默CX3CL1的腺病毒载体(ad-CX3CL1或ad-shCX3CL1)感染蜕膜基质细胞,RT-PCR验证感染效率;将蜕膜基质细胞与dNK细胞进行共培养,并将其分为4组:ad-vector+dNK组、ad-CX3CL1+dNK组、ad-shCX3CL1+dNK组和ad-CX3CL1+CX3CR1+dNK组;ELISA检测各组共培养体系上清液中炎症因子TNF-α与IFN-γ表达;取上述4组共培养体系的上清液处理滋养细胞系HTR8,EdU增殖实验与Transwell侵袭实验检测处理后的HTR8细胞增殖与侵袭能力的改变。结果:与NP组相比,CX3CL1在PE组胎盘蜕膜组织中的表达异常升高(P<0.01);成功分离了早孕蜕膜基质细胞与dNK细胞;与ad-vector相比,感染ad-CX3CL1或ad-shCX3CL1能显著促进或抑制蜕膜基质细胞中CX3CL1在mRNA水平的表达(P<0.01);与ad-vector+dNK组相比,ad-CX3CL1+dNK组上清液中TNF-α与IFN-γ表达明显升高(P<0.05),且共培养体系的上清液能显著抑制滋养细胞的增殖与侵袭能力(P<0.05),而ad-shCX3CL1+dNK组与ad-CX3CL1+anti-CX3CR1+dNK组上清液中TNF-α与IFN-γ表达均显著降低(P<0.05),共培养体系的上清液能显著促进滋养细胞的增殖与侵袭能力(P<0.05);且与ad-CX3CL1+dNK组相比,ad-CX3CL1+anti-CX3CR1+dNK组上清液中TNF-α与IFN-γ的表达明显降低(P<0.05),但滋养细胞的上述功能明显增加(P<0.05)。结论:CX3CL1在PE患者的胎盘蜕膜组织中的表达呈异常增高现象,且蜕膜基质细胞能够通过CX3CL1/CX3CR1途径协同dNK细胞调控滋养细胞的增殖与侵袭能力,而这一作用可能与其影响dNK细胞对TNF-α与IFN-γ的分泌相关。

不明原因复发性自然流产患者外周血NK细胞与蜕膜NK细胞检测价值分析

目的研究不明原因复发性自然流产患者外周血与蜕膜NK细胞数量和活性。方法选择不明原因复发性自然流产患者作为研究组(RSA组),人工流产中止早期妊娠妇女为对照组,分别检测外周血和蜕膜NK细胞数量和活性。结果非孕期,RSA组外周血NK细胞数量和活性均高于对照组(P<0.05);RSA组非染色体因素再次自然流产妇女,外周血NK细胞数量和活性也高于成功妊娠组(P<0.05);RSA组非染色体因素再次自然流产妇女,蜕膜NK细胞数量和活性则显著低于对照组(P<0.05)。结论外周血NK细胞数量和活性可作为RSA免疫治疗监测的指标,外周血NK细胞和蜕膜NK细胞可能在RSA中发挥了不同的作用。

人早孕期蜕膜基质细胞下调蜕膜NK细胞杀伤活性

通过分析人早孕期蜕膜基质细胞(decidual stromal cell,DSC)对蜕膜NK细胞(dNK)表面趋化因子受体CXCR4与细胞内颗粒酶B表达水平的影响,研究早孕蜕膜基质细胞对局部NK细胞的训导作用。收集早孕蜕膜组织,分离DSC及蜕膜免疫活性细胞,进一步通过磁珠分选蜕膜CD3-CD56bright NK细胞,将分离的蜕膜NK细胞与DSC按1∶1比例共培养24h,收集蜕膜NK细胞,流式细胞仪检测其表面趋化因子受体CXCR4和细胞内颗粒酶B(granzyme B)的表达水平。结果显示,与对照组相比,在与DSC细胞共培养之后,趋化因子受体CXCR4+NK细胞的百分率明显上升,而蜕膜NK细胞内颗粒酶B阳性率显著下降(P<0.05)。结果表明,人早孕母-胎界面DSC细胞上调蜕膜NK细胞表面趋化因子受体CXCR4的表达,下调NK细胞内颗粒酶B的表达水平,可能抑制其杀伤活性。

母-胎界面趋化因子及其受体表达与NK细胞在蜕膜中选择性聚集的关系

目的探讨母-胎界面中自然杀伤细胞(NK细胞)募集机制及生物学意义.方法留取8～10孕周正常孕妇行人工流产术后滋养层、蜕膜组织及外周血标本.采用免疫磁珠法分离、纯化外周血及蜕膜中NK细胞,逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测蜕膜和滋养层组织中的趋化因子,检测外周血、蜕膜NK细胞中相应的趋化因子受体及血源性生长因子.结果获得了高纯度的NK细胞;蜕膜和滋养层组织中可检测到某些趋化因子的表达;在蜕膜与外周血NK细胞中检测到有相应的趋化因子受体的表达及血源性生长因子.结论蜕膜中的NK细胞可能来源于外周血NK细胞,并由趋化因子募集而来,其可能参与母-胎界面血管形成.

不明原因复发性流产患者早孕期流产蜕膜组织CD3^-CD(56+16)^+NK细胞数量改变及分析

目的分析不明原因复发性流产(URSA)患者及人工流产患者流产蜕膜组织CD3^-CD (56+16)^+NK细胞数量的变化,探讨早孕期蜕膜组织CD3^-CD (56+16)^+NK细胞与稽留流产的关系。方法选取不明原因复发性流产患者20例作为URSA组,人工流产患者10例作为人工流产组,流式细胞仪检测两组的蜕膜组织CD3^-CD (56+16)^+NK细胞数量。结果 URSA组患者的流产蜕膜组织CD3^-CD (56+16)^+NK细胞比例显著少于人工流产组患者(P <0.05)。结论早孕期蜕膜组织CD3^-CD (56+16)^+NK细胞比例失调可能是孕早期胚胎丢失的病因之一。

蜕膜NK细胞协同miR-18a对人正常滋养细胞浸润能力的影响

目的研究蜕膜NK细胞(decidual natural killer,dNK)能否作为母-胎界面中与滋养细胞直接接触的细胞介质,通过其分泌的相关细胞因子,协同子痫前期相关微小RNA-18a(miR-18a)影响人正常滋养细胞(HTR8)浸润能力,参与子痫前期(pre-eclapmpsia,PE)发病。方法收集2017年9月-12月于西安医学院第一附属医院妇科行人工流产患者的早孕蜕膜组织(11例),梯度密度离心联合流式细胞术分选、纯化dNK细胞;在HTR8细胞中转染miR-18a前体分子,共分3组:miR-18a过表达组、miR-18a抑制组、NC组(对照组);将dNK与上述3组HTR8细胞分别共培养;实时定量PCR(RT-qPCR)检测转染后HTR8细胞中miR-18a mRNA的表达。ELISA检测共培养24 h后各组上清液中白细胞介素8(interleukin 8,IL-8)的表达;Transwell实验分3组:共培养组、单纯培养组、对照组;检测dNK与miR-18a抑制组HTR8细胞共培养上清对滋养细胞浸润能力的影响。结果与对照组相比,miR-18a过表达和抑制均获得明显效果(均P<0.001);dNK与抑制组HTR8共培养24 h后,上清液中IL-8的表达低于对照组[(508.35±28.22)ng/L,P<0.001];与单纯培养组相比,共培养组HTR8细胞浸润能力增强(367.11±88.26,P<0.001)。结论 dNK细胞能够通过其分泌细胞因子IL-8,并协同miR-18a共同影响滋养细胞浸润能力,从而可能参与PE发病过程。

复发性自然流产过程中蜕膜自然杀伤细胞相关受体的作用机制研究进展

复发性流产(RSA)是指和同一性伴侣有多次自发性流产,2020年我国专家共识建议将之定义为与同一个性伴侣连续2次或者2次以上,在妊娠28周前胚胎或者胎儿的丢失,这其中包括连续多次发生的生化妊娠。RSA的发病机制复杂多样,目前已被业界广泛认可的发病因素包括有遗传因素、内分泌因素、解剖学异常、感染因素及免疫因素等,其中免疫因素如T淋巴细胞、树突状细胞、自然杀伤(NK)细胞等在RSA的发生发展中的作用受到广泛关注与重视,尤其是NK细胞。NK细胞是人类免疫系统的重要组成部分,蜕膜NK细胞的特定表面分子在滋养层细胞的侵袭过程及妊娠期子宫螺旋动脉的重塑过程中起免疫调节作用,这在妊娠早期尤为重要。蜕膜NK细胞的功能受其表达的各种家族受体(NK细胞受体,NKR)传递的激活和抑制信号之间平衡的严格调控。本文针对蜕膜NK细胞相关受体在复发性自然流产过程中作用机制的研究进展进行综述。

妊娠早期母胎界面NK细胞研究进展

蜕膜作为一种妊娠时特化的子宫内膜,在促进胚胎生长和维持免疫耐受方面起到至关重要作用。研究表明,蜕膜组织中富集以自然杀伤NK细胞和巨噬细胞为主的大量免疫细胞。在正常妊娠时,各种免疫细胞或非免疫细胞互相调节使母胎界面整体处于免疫平衡状态,而一旦该免疫平衡被打破则可能导致各种妊娠疾病,例如复发性自然流产、子痫前期和胚胎宫内生长受限等。本综述重点总结了妊娠前3个月蜕膜NK细胞的来源、亚群、生理功能和病理作用。

妊娠期uNK、pNK细胞NKG2A与NKG2D的表达及其生物学意义的研究

目的:研究妊娠期妇女子宫NK细胞(uNK细胞)与外周血NK细胞(pNK细胞)表面NKG2A和NKG2D及其相应配体的表达,探讨uNK细胞表面NKG2A和NKG2D的不平衡表达与母胎界面所形成的免疫耐受关系。方法:采用流式细胞术检测30例孕6～9周的正常妊娠妇女uNK细胞和pNK细胞NKG2A、NKG2D的表达状况;RTPCR技术检测绒毛膜组织HLAE、MICA的表达。结果:子宫NK细胞NKG2A的表达显著高于外周血NK细胞,二者分别为(97.86±1.75)%与(33.35±10.92)%;子宫NK细胞NKG2D的表达水平与外周血NK细胞相近,分别为(93.21±4.52)%与(97.80±1.72)%,滋养层组织仅检测到HLAEmRNA的表达。结论:妊娠期子宫NK细胞表面高表达抑制性受体NKG2A,同时滋养层组织表达相应的配体HLAE,这可能是维持母胎界面免疫耐受的重要因素。

miR-152通过影响dNK分泌GM-CSF抑制人脐静脉内皮细胞功能

目的研究微小RNA(miR-152)通过蜕膜NK细胞(decidual natural killer,dNK)分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cells,HUVECs)功能的影响。方法为研究miR-152对人类白细胞抗原G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)的调控作用,将人绒毛膜滋养细胞(HTR8)分为过表达组(转染miR-152 mimics)、抑制组(转染miR-152 inhibitor)、对照组(空白转染);实时定量PCR和蛋白免疫印迹检测转染后miR-152及HLA-G在mRNA和蛋白水平的表达。为研究miR-152影响dNK分泌功能的可能方式,将从人正常早孕蜕膜中提取的dNK与转染miR-152 mimics及inhibitor的HTR8分组共培养,并在共培养过程中加入杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL4(killer Ig-like receptors,KIR2DL4)封闭剂以阻断HLA-G/KIR2DL4通路,并以KIR2DL4封闭剂对照物免疫球蛋白G1(immune gamma globulins,IgG1)作为封闭后对照,具体分组:空白共培养组、miR-152过表达共培养组、miR-152过表达对照组、miR-152抑制共培养组、通路封闭共培养组、通路封闭对照组。ELISA检测共培养24 h后上清中GM-CSF的表达;管样形成实验检测共培养上清对人脐静脉内皮细胞管样形成过程中总分支长度及管腔数的影响。结果与对照组相比,过表达组miR-152在HTR8细胞中表达显著增高(P<0.01),抑制组中miR-152在表达显著降低(P<0.01)。与对照组相比,过表达组HLA-G在mRNA及蛋白水平均显著降低(P<0.01),抑制组HLA-G在mRNA及蛋白水平均显著升高(P<0.01)。与空白共培养组相比,miR-152抑制共培养组上清中GM-CSF的浓度明显增高(P<0.01)。与空白共培养组比较,通路封闭共培养组上清干预后HUVEC总分支长度及管腔数均明显降低(P<0.01),miR-152抑制共培养组上清干预后HUVEC总分支长度及管腔数均明显增高(P<0.01)。结论过表达miR-152能够影响dNK细胞分泌GM-CSF,从而抑制HUVEC成管能力。

补肾中药对溴隐亭致流产鼠模型中蜕膜CD56^+NK细胞表面CD69和CD94表达的影响

为了观察补肾中药是否能影响蜕膜CD5 6 + NK细胞比例及其表面CD6 9、CD94的表达 ,从而进一步阐明补肾中药对母胎界面免疫的影响机制。SD大鼠于孕 6～ 8d皮下注射溴隐亭 0 3mg/kg·d ,建立改良的溴隐亭致SD大鼠流产模型 ,随机分为三组。A组为模型组 ;B、C组在孕 1～ 1 1d分别给予大剂量中药 (4 5g/kg·d)、P(8mg/kg·d) ,另设正常孕鼠对照 (D组 )。孕 1 2d处死 ,取蜕膜组织 ,分离成单个细胞悬液 ,用流式细胞分析技术观察 4组蜕膜CD5 6 + NK细胞的量及蜕膜NK细胞表面CD6 9、CD94的表达差异。结果发现 :B组 (P <0 0 5 )、C、D组 (P <0 0 1 )妊娠率与A组相比增加 ,并且有差异 ;B、C组蜕膜CD5 6 + NK细胞比例与A组相比明显增加 ,与D组无差异 ;各组蜕膜CD5 6 + NK细胞表面CD6 9表达无差异 ;B、C、D组CD94的表达与A组相比显著增加 ;A组蜕膜CD5 6 + NK细胞表达CD6 9与CD94相比明显增加 ,B、C组相反。因此 ,补肾中药能影响蜕膜CD5 6 + NK细胞表面CD6 9、CD94的表达 ,可能通过增加CD94的表达 ,抑制CD6 9从而进一步抑制NK细胞的活性 。

人类白细胞抗原G调控蜕膜自然杀伤细胞促进滋养细胞侵袭

目的探讨蜕膜自然杀伤(dNK)细胞对滋养细胞侵袭能力的影响,以及人类白细胞抗原G(HLA-G)调控dNK细胞影响滋养细胞侵袭的机制。方法收集人工流产早孕蜕膜组织11例,采用流式分选法提取dNK细胞,与HTR-8/Svneo细胞共培养,将共培养体系分为HLA-G组(n=11)和anti-HLA-G组(n=11),anti-HLA-G组加入HLA-G抗体干预。另外单独培养未作处理的HTR-8/Svneo细胞作为空白组。Transwell法检测各组HTR-8/Svneo细胞侵袭能力。ELISA法检测细胞共培养上清血管生成素-2(Ang-2)及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)浓度。结果与空白组比较,HLA-G组HTR-8/Svneo细胞侵袭能力显著降低(P<0.001)。与HLA-G组比较,anti-HLA-G组HTR-8/Svneo细胞侵袭能力显著降低(P<0.01)。细胞共培养上清细胞因子浓度检测结果显示,anti-HLA-G组细胞培养上清中Ang-2(t=2.370,P=0.028)及GM-CSF(t=2.209,P=0.039)表达水平均显著低于HLA-G组。结论dNK细胞可明显抑制HTR-8/Svneo细胞侵袭,HLA-G可能通过上调dNK细胞Ang-2和GM-CSF的表达促进滋养细胞侵袭。

miR-152负性调控HLA-G并协同dNK细胞抑制人正常滋养细胞浸润

目的研究微小RNA-152负性调控人类白细胞抗原G(human leukocyte antigen-G, HLA-G)并协同蜕膜NK细胞(decidual natural killer, dNK)对人正常滋养细胞(HTR8)浸润的影响。方法收集人正常早孕蜕膜组织(n=11),分选、纯化dNK;并与miR-152过表达(Mimcs组)、抑制(Inhibitor组)及对照(NC组)的HTR8细胞共培养;实时定量PCR和蛋白免疫印迹检测转染后miR-152、HLA-G的表达。ELISA检测共培养24 h后上清中白细胞介素8(interleukin 8, IL-8)、干扰素诱导蛋白10(interferon induced protein 10, IP-10)的表达;Transwell检测共培养上清对HTR8浸润的影响。结果 Mimcs组HLA-G在蛋白水平表达降低;Mimcs组细胞与dNK共培养上清中IL-8、IP-10水平降低;Mimcs组细胞与dNK共培养上清可抑制滋养细胞浸润。结论 miR-152能够负性调控HLA-G并协同dNK细胞抑制滋养细胞浸润。

妊娠早期母胎界面免疫微环境与妊娠相关疾病

妊娠期胎儿绒毛外滋养层细胞(extravillous trophoblasts, EVTSs)侵入母体子宫蜕膜组织.然而,母体免疫系统识别半基因不合的胎儿并支持其在体内发育的现象与经典的免疫排斥理论相悖.母体免疫系统对非自体胎儿建立免疫耐受的同时还需要抵御感染,因此需要母胎微环境高度协调以促进成功妊娠.而复发性自然流产(recurrent spontaneous abortion, RSA)、子痫前期(preeclampsia, PE)和感染等发生不良妊娠结局的风险较高,研究表明这与母胎界面免疫微环境失衡密切相关.本综述主要介绍了妊娠早期母胎界面免疫微环境,尤其是当前对蜕膜NK(decidua NK cell, dNK)细胞的功能认识.此外,也讨论了RSA, PE和感染状态下,母胎界面免疫微环境改变,尤其是dNK细胞变化,对妊娠结局的影响.旨在总结和进一步认识正常和异常妊娠过程中的母胎界面免疫微环境变化,为妊娠疾病的治疗提供理论依据.

miR-152 通过HLA-G / KIR2DL4 通路对人正常滋养细胞中基质金属蛋白酶2、9 表达的影响

目的研究miR-152通过其靶基因人类白细胞抗原G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)与蜕膜NK细胞(decidual natural killer,dNK)表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer Ig-like receptors,KIR)2DL4之间通路,对人正常滋养细胞(HTR-8)中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)2、9表达的影响。方法收集2020年9月~10月西安市第四医院妇产科门诊人工流产患者正常早孕蜕膜组织(n=5),分选、纯化dNK;构建其与过表达和抑制miR-152后的HTR-8细胞共培养体系,在共培养中封闭dNK表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer Ig-like receptors,KIR)KIR2DL4。实时定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测miR-152转染效率;qRT-PCR、蛋白免疫印迹检测转染miR-152及干预HLA-G/KIR2DL4通路后HTR-8中MMP2、9的表达,Transwell实验检测HTR-8浸润能力的变化情况。结果miR-152在HTR-8细胞中过表达和抑制效果显著;在抑制miR-152表达的共培养组HTR-8中MMP2、MMP9在mRNA及蛋白水平表达升高,且细胞浸润能力增强;过表达miR-152且封闭KIR2DL4共培养组HTR-8浸润能力显著降低,MMP2、MMP9在mRNA及蛋白水平表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-152能够通过HLA-G/KIR2DL4通路影响HTR-8细胞中MMP2、MMP 9表达。

miR-152通过HLA-G/KIR2DL4通路对dNK分泌LIF和GM-CSF的影响

目的研究微小RNA-152(miR-152)通过其靶基因人类白细胞抗原G(HLA-G)与蜕膜NK细胞(dNK)表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)KIR2DL4之间通路,对dNK分泌白血病抑制因子(LIF)及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的影响。方法收集2020年9月-2020年10月在西安市人民医院行人工流产患者的正常早孕蜕膜组织5例,分选、纯化dNK。在体外培养的HTR8细胞中过表达和抑制miR-152,分为对照组(未转染)、过表达组(转染miR-152 mimics)与抑制组(转染miR-152 inhibitor)。实时定量PCR(qRT-PCR)检测转染后miR-152水平。构建dNK与过表达或抑制miR-152后的HTR8共培养体系,并在共培养过程中特异性封闭dNK KIR2DL4,分组为:NC组[HTR-8+dNK+白细胞介素-15(IL-15)共培养]、A组(过表达miR-152的HTR-8+dNK+IL-15)、B组(抑制miR-152的HTR-8+dNK+IL-15)、C组[过表达miR-152的HTR-8+dNK+KIR2DL4抑制物(anti-KIR2DL4)+IL-15]、D组[过表达miR-152的HTR-8+dNK+IgG1(anti-KIR2DL4对照物)+IL-15]、E组(转染miR-152 mimics NC的HTR-8+dNK+antiKIR2DL4+IL-15)。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测共培养24 h后上清中LIF、GM-CSF的表达。结果转染后6 h于荧光显微镜下观察转染效率(羧基荧光素酶标记对照),可见转染效率超过90%。与对照组(1.27±0.29)相比,过表达组细胞中miR-152表达水平升高(2.63±0.44),抑制组细胞中miR-152表达降低(0.34±0.12),差异均有统计学意义(F=130.47、130.47,P<0.05)。与NC组相比,C组共培养上清中LIF、GM-CSF的浓度最低;A、D、E组在过表达miR-152的前提条件下,共培养上清中LIF、GM-CSF的浓度均分别低于NC组;B组共培养上清中LIF、GM-CSF的浓度高于NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-152能够通过HLA-G/KIR2DL4通路影响dNK分泌LIF、GM-CSF。

母—胎界面免疫分子的相互作用以及其对妊娠结局的影响

正常妊娠的情况下,胎儿表达部分父系HLA分子,但不引发母体的明显免疫反应,是由于在母胎界面存在着复杂精细的交流机制,例如多种母体免疫细胞亚群的激活和抑制、蜕膜基质细胞分泌细胞因子参与调控等。这些机制使子宫局部形成耐受性的环境,使胎儿能正常发育。相反的,母胎交流机制障碍也可能导致母体对胎儿产生免疫排斥,从而造成异常妊娠。本文讨论在母—胎界面上发生的蜕膜NK细胞和胎儿滋养层细胞HLA分子的相互作用,解释母胎耐受的产生机制,并讨论母—胎界面免疫机制异常对妊娠结局的影响。