声带癌前病变组织中基质金属蛋白酶抑制剂-1、果蝇母亲DDP同源物4表达水平与术后复发和恶变的相关性研究

目的探讨声带癌前病变组织中基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1,TIMP-1)、果蝇母亲DDP同源物4(drosophila mothers against DDP homolog 4,Smad4)表达水平与术后复发和恶变的相关性。方法回顾性分析2018年8月~2021年8月郑州大学第一附属医院收治的162例声带癌前病变患者的临床和病理资料,收集手术切除癌前病变组织(癌前病变组)及病变旁正常黏膜组织(对照组),采用免疫组织化学法检测组织中TIMP-1、Smad4表达情况。分析TIMP-1、Smad4阳性率与临床病理特征的关系,并采用Kaplan-Meier法和Cox回归分析法分析其对术后复发和恶变的影响。结果与对照组正常黏膜组织比较,癌前病变组的TIMP-1阳性率较高,Smad4阳性率较低(P<0.05)。不同病变范围、是否累及前连合、不同程度上皮异常增生患者的TIMP-1、Smad4阳性率存在差异(P<0.05)。术后随访时间24~60个月,中位随访时间36个月,随访期间失访患者6例,随访率96.30%(156/162),随访期间术后复发35例(21.60%),术后恶变16例(9.88%);Kaplan-Meier生存分析显示,TIMP-1阳性患者术后复发率和恶变率高于TIMP-1阴性患者(P<0.05);Smad4阴性患者术后复发率和恶变率高于Smad4阳性患者(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,喉咽反流、病变范围>1/2、中/重度异型增生、TIMP-1阳性、Smad4阴性是复发的独立危险因素(P<0.05),年龄>60岁、累及前连合、TIMP-1阳性、Smad4阴性是恶变的独立危险因素(P<0.05)。结论声带癌前病变组织中TIMP-1高表达、Smad4低表达,且TIMP-1阳性、Smad4阴性表达者术后复发和恶变风险较高。

烷基化修复蛋白B同源物5调控果蝇Zeste基因增强子人类同源物2对K562/阿霉素细胞耐药的影响

目的探讨烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)对K562/阿霉素(ADM)细胞耐药的影响及其作用机制。方法以人白血病细胞系K562和ADM抗性细胞K562/ADM细胞为研究对象,利用Lipofectamine;2000将K562/ADM细胞分为对照组、si-NC组、si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组、空载体组(转染pcDNA3.1)、ALKBH5-WT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-WT)、ALKBH5-MUT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-MUT)、si-ALKBH5-2+空载体组、si-ALKBH5-2+pcDNA3.1-EZH2组。采用比色法检测细胞中N6-甲基腺苷(m6A)含量;采用CCK-8法检测细胞的半数抑制浓度(IC_(50));采用荧光光度计法检测ADM外排;采用Western blot检测细胞中ALKBH5、果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药基因1(MDR1)的蛋白表达;采用RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证ALKBH5与EZH2 mRNA的相互作用;采用甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)检测EZH2 m6A水平。结果与K562细胞比较,K562/ADM细胞对ADM的耐药性及细胞中ALKBH5蛋白表达水平升高,m6A含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);沉默ALKBH5可增加K562/ADM细胞中m6A含量,过表达野生型ALKBH5可减少m6A含量,而过表达突变型ALKBH5(H204A)对m6A含量无明显影响。与对照组、si-NC组比较,si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组细胞在450 nm处的光密度值(OD_(450nm)值)、P-gp、MDR1蛋白表达水平降低,细胞内荧光强度升高,差异有统计学意义(P<0.05)。在K562/ADM细胞中,ALKBH5蛋白能与EZH2 mRNA相互作用;沉默ALKBH5可上调K562/ADM细胞中EZH2 m6A水平,下调EZH2蛋白表达水平,过表达野生型ALKBH5则呈相反趋势;EZH2过表达逆转了沉默ALKBH5对K562/ADM细胞活力及耐药性的影响。结论沉默ALKBH5通过促进EZH2的甲基化来下调EZH2的表达,进而降低K562/ADM的耐药性。

果蝇zeste基因增强子的人类同源物2促进小细胞肺癌化疗耐药的作用及其分子机制

目的:观察果蝇zeste基因增强子的人类同源物2(Enhancer of zeste homologue 2,EZH2)对小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)化疗耐药的影响并研究其潜在分子机制。方法:首先使用RT-PCR和蛋白印迹方法检测SCLC初治和耐药患者组织标本、敏感细胞株(H446)和耐药细胞株(H446DDP)的EZH2表达差异;再通过CCK8方法检测敲低EZH2后的耐药SCLC细胞株对化疗药物半抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC50)值变化;最后通过RNA测序和验证方法筛查EZH2的下游靶基因以及CHIP-qPCR方法检测EZH2敲低后其靶基因启动子区的EZH2表达变化。结果:SCLC化疗耐药患者EZH2阳性表达水平(80%)高于化疗敏感患者,耐药细胞株(H446DDP)的EZH2 mRNA和蛋白表达水平均高于敏感细胞株(H446)(P<0.01,P<0.001);敲低EZH2表达后,耐药SCLC细胞株对化疗药物IC50值降低;细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-1A(Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor 1A,CDKN1A)表达增加,且CDKN1A基因启动子EZH2蛋白沉积显著减少。结论:EZH2促进SCLC化疗耐药,其分子机制与EZH2靶向调控CDKN1A基因表达相关。

冬凌草甲素对HepG2细胞内质网应激蛋白IRE-1、PERK和CHOP的作用研究

目的研究内质网应激对冬凌草甲素处理的肝癌细胞HepG2的作用。方法采用特异性小干扰RNA(siRNA)转染HepG2细胞72 h抑制内质网应激蛋白RNA激活蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、抑制物阻抗性酯酶1(IRE-1)和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达后,MTT法观察40μmol·L-1冬凌草甲素处理12h的转染细胞的细胞存活率。结果 PERK和IRE-1 siRNA转染抑制相应蛋白表达后增加冬凌草甲素诱导的HepG2细胞死亡(P<0.05);而抑制CHOP表达对冬凌草甲素处理的HepG2细胞存活率没有影响(P>0.05)。结论冬凌草甲素诱导的内质网应激对HepG2细胞具有保护作用。

Delta样蛋白1同源物与生长激素腺瘤临床表型的关系及其对生长激素的影响研究

目的分析Delta样蛋白1同源物(DLK1)在生长激素(GH)腺瘤中的表达情况及其临床意义。方法本实验时间为2020年10月至2022年6月。肿瘤标本来自2016—2020年于首都医科大学附属北京天坛医院神经外科行手术切除的34例GH腺瘤患者。采用免疫组织化学染色检测肿瘤标本中DLK1、GH表达情况。取对数生长期的大鼠GH3细胞,将其随机分为A组、B组、C组、D组〔B组、C组、D组分别加入1、5、20μg/ml抗DLK1抗体,A组加入等体积的二甲基亚砜(DMSO)〕,分别于培养0、24、48、72 h后采用细胞增殖实验检测各组细胞活力。取对数生长期的大鼠GH3细胞,将其随机分为E组、F组(F组加入5μg/ml抗DLK1抗体,E组加入等体积的DMSO),分别于培养0、24、48、72 h后采用ELISA检测各组GH3细胞培养上清液中GH水平。取对数生长期的大鼠GH3细胞,将其随机分为G组、H组、I组、J组(H组、I组、J组分别加入1、5、20μg/ml抗DLK1抗体,G组加入等体积的DMSO),采用Western blot法检测各组GH3细胞中磷酸化p70核糖体蛋白S6激酶(p-p70S6K)、磷酸化起始因子4E结合蛋白1(p-4EBP1)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)水平。结果DLK1主要位于稀疏颗粒型肿瘤标本的细胞核及致密颗粒型肿瘤标本的细胞质,GH主要位于疏松颗粒型、致密颗粒型肿瘤标本的细胞质。Pearson相关分析结果显示,肿瘤标本的DLK1评分与GH评分呈正相关(r=0.550,P<0.001)。根据DLK1评分中位数将肿瘤标本分为高DLK1评分组(≥110分,n=17)和低DLK1评分组(<110分,n=17)。高DLK1评分组患者血清GH及肿瘤标本GH评分、临床表型为致密颗粒型者占比高于低DLK1评分组(P<0.05)。B组培养48、72 h后细胞活力高于A组,C组、D组培养24、48、72 h后细胞活力高于A组(P<0.05);C组培养48 h后细胞活力高于B组,D组培养24、48、72 h后细胞活力高于B组(P<0.05);D组培养48、72 h后细胞活力高于C组(P<0.05)。A组、B组、C组、D组培养24、48、72 h后细胞活力分别高于本组培养0 h后,培养48、72 h后细胞活力分别高于本组培养24 h后,培养72 h后细胞活力分别高于本组培养48 h后(P<0.05)。F组培养48、72 h后GH3细胞培养上清液中GH水平低于E组(P<0.05)。E组培养48、72 h后GH3细胞培养上清液中GH水平高于本组培养0 h后,F组培养48、72 h后GH3细胞培养上清液中GH水平低于本组培养0 h后(P<0.05);E组培养72 h后GH3细胞培养上清液中GH水平高于本组培养24 h后,F组培养72 h后GH3细胞培养上清液中GH水平低于本组培养24 h后(P<0.05)。H组、I组、J组GH3细胞中p-p70S6K水平高于G组,J组GH3细胞中p-p70S6K水平低于H组、I组(P<0.05);I组、J组GH3细胞中p-4EBP1水平低于G组、H组(P<0.05);H组、I组、J组GH3细胞中p-mTOR水平高于G组,I组、J组GH3细胞中p-mTOR水平高于H组,J组GH3细胞中p-mTOR水平高于I组(P<0.05)。结论DLK1主要在致密颗粒型GH腺瘤中表达;DLK1可抑制GH3细胞增殖,增加血清GH水平,其机制可能与DLK1可抑制GH3细胞中p70核糖体蛋白S6激酶、雷帕霉素靶蛋白的磷酸化及促进起始因子4E结合蛋白1的磷酸化有关。

垂体腺瘤患者Delta样蛋白1同源物、母系表达基因3、母系表达基因8基因表达水平及其临床意义研究

目的分析垂体腺瘤患者Delta样蛋白1同源物(DLK1)、母系表达基因(MEG)3、MEG8基因表达水平及其临床意义。方法选取2015年6月至2019年12月于唐山市人民医院行手术切除的垂体腺瘤患者92例为研究对象。收集患者一般资料,采用RT-qPCR法检测肿瘤组织DLK1、MEG3、MEG8、POU类1同源框1(POU1F1)、类固醇生成因子1(SF-1)基因表达水平,采用免疫组织化学染色检测肿瘤组织生长激素(GH)、PIT1、SF-1表达情况,采用ELISA检测血清GH、胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平。比较GH腺瘤与无功能腺瘤患者一般资料,比较不同临床特征垂体腺瘤患者肿瘤组织DLK1、MEG3、MEG8基因表达水平,分析垂体腺瘤患者肿瘤组织DLK1、MEG3、MEG8基因表达水平与肿瘤组织POU1F1、SF-1基因表达水平的相关性,比较不同肿瘤组织DLK1、MEG3、MEG8基因表达水平垂体腺瘤患者肿瘤组织GH、PIT1、SF-1表达情况,分析GH腺瘤患者肿瘤组织DLK1、MEG3、MEG8基因表达水平与血清GH、IGF-1水平的相关性。结果GH腺瘤患者男性占比、年龄低于无功能腺瘤患者(P<0.05)。男性垂体腺瘤患者肿瘤组织DLK1、MEG8基因表达水平低于女性垂体腺瘤患者(P<0.05)。年龄≤52岁垂体腺瘤患者肿瘤组织DLK1基因表达水平高于年龄>52岁垂体腺瘤患者(P<0.05)。GH腺瘤患者肿瘤组织DLK1、MEG3、MEG8基因表达水平高于无功能腺瘤患者(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,垂体腺瘤患者肿瘤组织DLK1、MEG3、MEG8基因表达水平与肿瘤组织POU1F1基因表达水平均呈正相关,与肿瘤组织SF-1基因表达水平均呈负相关(P<0.05)。根据肿瘤组织DLK1、MEG3、MEG8基因表达水平的中位数,分别将患者分为DLK1基因高表达组(DLK1基因表达水平≥0.00015,46例)和DLK1基因低表达组(DLK1基因表达水平<0.00015,46例)、MEG3基因高表达组(MEG3基因表达水平≥0.00011,46例)和MEG3基因低表达组(MEG3基因表达水平<0.00011,46例)、MEG8基因高表达组(MEG8基因表达水平≥0.00008,46例)和MEG8基因低表达组(MEG8基因表达水平<0.00008,46例)。DLK1基因低表达组肿瘤组织GH、PIT1阳性者占比及SF-1弱阳性、阴性者占比低于DLK1基因高表达组,GH、PIT1阴性者占比及SF-1阳性者占比高于DLK1基因高表达组(P<0.05);MEG3基因低表达组肿瘤组织GH、PIT1阳性者占比及SF-1弱阳性、阴性者占比低于MEG3基因高表达组,GH、PIT1阴性者占比及SF-1阳性者占比高于MEG3基因高表达组(P<0.05);MEG8基因低表达组肿瘤组织GH、PIT1阳性者占比及SF-1弱阳性、阴性者占比低于MEG8基因高表达组,GH、PIT1阴性者占比及SF-1阳性者占比高于MEG8基因高表达组(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,GH腺瘤患者肿瘤组织DLK1基因表达水平与血清GH水平呈正相关(P<0.05),与血清IGF-1水平无直线相关关系(P>0.05);GH腺瘤患者肿瘤组织MEG3、MEG8基因表达水平与血清GH、IGF-1水平均无直线相关关系(P>0.05)。结论垂体腺瘤患者的DLK1、MEG3、MEG8基因表达水平低于正常人群。DLK1、MEG3、MEG8基因表达水平升高可促进垂体腺瘤细胞向PIT1谱系分化,临床表现为GH腺瘤表型;其降低可促进垂体腺瘤细胞向SF-1谱系分化,临床表现为无功能腺瘤表型。DLK1基因是调控GH分泌的关键基因,其可能作为GH腺瘤患者的治疗靶点。

沉默CDKL1基因通过调控PTEN/Akt/mTOR信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖和侵袭的抑制作用

目的:探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白样激酶1(CDKL1)基因沉默对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和转移的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:选择乳腺癌MCF-7细胞作为研究对象,采用小干扰RNA技术(siRNA)沉默CDKL1基因表达。采用1μmol·L^(-1)磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)抑制剂BpV或10μmol·L^(-1)蛋白激酶B(Akt)激动剂SC79进行干预。取对数生长期MCF-7细胞,分为空白对照组(MCF-7细胞不作任何处理)、转染对照(siRNA-NC)组(MCF-7细胞转染siRNA-NC质粒)、siRNA-CDKL1组(MCF-7细胞转染siRNA-CDKL1质粒)、siRNA-CDKL1+PTEN抑制剂BpV(siRNA-CDKL1+BpV)组(转染siRNA-CDKL1的MCF-7细胞,再采用1μmol·L^(-1)PTEN抑制剂BpV处理2h)和siRNA-CDKL1+Akt激动剂SC79(siRNA-CDKL1+SC79)组(转染siRNA CDKL1的MCF-7细胞,再采用10μmol·L^(-1)Akt激动剂SC79处理2 h)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blotting法检测各组乳腺癌MCF-7细胞中CDKL1 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组乳腺癌MCF-7细胞增殖活性,EdU法检测各组乳腺癌MCF-7细胞中EdU阳性细胞率,细胞划痕愈合实验检测各组乳腺癌MCF-7细胞划痕愈合率,Transwell小室实验检测各组乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭细胞数,Western blotting法检测各组乳腺癌MCF-7细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、PTEN、Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达水平。结果:与siRNANC组比较,siRNA-CDKL1组乳腺癌MCF-7细胞中CDKL1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01),细胞增殖活性降低(P<0.01),EdU阳性细胞率降低(P<0.01),乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭细胞数降低(P<0.01),细胞中MMP-2、MMP-9、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平降低(P<0.01),PTEN蛋白表达水平升高(P<0.01)。与siRNA-CDKL1组比较,siRNA-CDKL1+BpV组和siRNACDKL1+SC79组乳腺癌MCF-7细胞增殖活性升高(P<0.01),EdU阳性细胞率升高(P<0.01),迁移和侵袭细胞数增加(P<0.01),细胞中MMP-2、MMP-9、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平升高(P<0.01),PTEN蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论:CDKL1基因的沉默可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、侵袭和转移能力,其作用机制可能与调控PTEN/Akt/mTOR信号通路有关。

APP、Fis1、KLRF1和PDCD7基因在急性髓系白血病中的表达及临床意义

目的探讨淀粉样前体蛋白(APP)、裂殖1同源物(Fis1)、杀伤细胞凝集素样受体亚家族F成员1(KLRF1)和细胞程序性死亡7(PDCD7) mRNA在急性髓系白血病(AML)细胞中的表达及其预后意义。方法抽取34例AML及10例非恶性血液病患者骨髓,提取总RNA并逆转录成cDNA,SYBR Green I实时定量PCR法检测各基因 mRNA表达水平,采用2-△Ct公式计算基因 mRNA相对表达量。结果AML患者组PDCD7 mRNA表达水平均显著高于对照组(Z=-2.213,P=0.027)。除M1(1例)、M2a(2例)外的AML各亚型基因表达同对照组比较,APP mRNA在伴有t(8,21)染色体异常的M2表达显著高于对照组(Z=-2.197,P=0.028),而在M4b和M5b中的表达则显著低于对照组(Z=-2.368,P=0.018)。APP mRNA在AML亚型间表达有差异,M2显著高于M4和M5(Z=-2.430,P=0.015;Z=-3.175,P=0.001)。结论AML患者高表达PDCD7基因,单核细胞白血病患者低表达APP基因。

加味旋覆代赭汤对非酸反流所致慢性食管病变大鼠肠化及CDX2、DLK1表达的影响

目的:采用十二指肠-食管吻合术(胃全切)建立大鼠十二指肠-食管非酸反流模型,观察加味旋覆代赭汤对模型食管肠化及CDX2、DLK1表达的影响。方法:成年雄性Wistar大鼠80只,随机分为假手术组、模型组、加味旋覆代赭汤组及铝碳酸镁片(达喜)组,每组20只。除假手术组外,其余三组均采用十二指肠-食管吻合术(胃全切)建立大鼠十二指肠-食管非酸反流模型,建模25周时,加味旋覆代赭汤组经口灌服加味旋覆代赭汤(相当于30 g生药/kg),每日1次,连续3周;达喜组经口灌服达喜药液(300 mg/kg),每日1次,连续3周;模型组给予同体积蒸馏水经口灌服,每日1次,连续3周。治疗3周后,连同假手术组,共4组动物,麻醉状态下打开胸腹腔,剪取食管下段及吻合段,纵行剖开,进行大体观察,对食管下端紧邻吻合口处组织行HE染色,行食管病理组织学检查并评分,另采用免疫组化法进行CDX2及Notch信号分子-DLK1染色,观察其表达情况。结果:大体观察发现模型组食管下段显著增粗,纵行剖开食管,可见下端食管显著增厚,食管下段黏膜呈广泛显著不规则隆起,外观颜色呈白斑样改变;加味旋覆代赭汤组食管大体病理较模型组显著减轻,达喜组食管大体改变较模型组无显著差别。模型组轻、中、重度食管炎发生率分别为2/15(13.33%)、3/15(20.00%)、10/15(66.67%);加味旋覆代赭汤组分别为11/17(64.70%)、3/17(17.65%)、3/17(17.65%),与模型组比较炎症程度显著降低(P<0.01),达喜组分别为3/16(18.75%)、4/16(25.00%)、9/16(56.25%),与模型组差异无显著性(P>0.05)。加味旋覆代赭汤组的Barrett食管发生率为2/17(11.8%),显著低于模型组的7/15(46.7%),差异有统计学意义(P<0.05),达喜组为7/16(43.8%),与模型组差异无统计学意义(P>0.05)。加味旋覆代赭汤组的CDX2、DLK1表达水平均显著低于模型组(P<0.01),而达喜组与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:加味旋覆代赭汤可通过抑制CDX2及Notch信号分子DLK1表达来抑制肠化,减少非酸反流所致Barrett食管的发生。

FOXM1、PLK1、HIF-1α及EZH2在乳腺癌中的表达及临床意义

目的探讨叉头框转录因子M1(FOXM1)、Polo样激酶1(PLK1)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化法检测Fox M1、PLK1、HIF-1α及EZH2蛋白在803例乳腺浸润性导管癌和癌旁乳腺组织中的表达情况及其与乳腺癌组织临床病理特征间的关系。结果 FOXM1、PLK1、HIF-1α及EZH2在乳腺浸润性导管癌组织中的阳性表达率分别为59.78%、27.90%、43.96%和60.40%,显著高于其在癌旁乳腺组织中的表达(29.89%、0%、3.86%、20.92%),差异具有统计学意义(P<0.05)。FOXM1、PLK1、HIF-1α及EZH2的表达与乳腺癌的组织学分级、淋巴结转移及临床分期相关,与患者年龄、是否绝经及肿瘤大小无关(P>0.05)。PLK1、HIF-1α和EZH2蛋白的表达均与ER呈负相关关系,FOXM1和EZH2蛋白的表达与HER-2呈正相关关系(P<0.01)。FOXM1、PLK1、HIF-1α和EZH2蛋白的表达均具有正相关关系(P<0.01)。结论 FOXM1、PLK1、HIF-1α及EZH2可能协同参与了乳腺癌的发生、发展,并可能成为乳腺癌预后评估的重要指标。

基于PINK1 RNAi果蝇模型探讨黄芩素对遗传性帕金森病的作用机制

本研究旨在探讨黄芩素对基因突变导致的遗传性帕金森果蝇模型的作用,初步阐释黄芩素延缓遗传性帕金森病的作用机制。采用磷酸酶及张力蛋白同源物诱导的蛋白激酶1(PTEN-induced putative kinase 1,PINK1)-RNAi帕金森果蝇为模型组,野生型果蝇w1118为对照组,给予模型组不同剂量的黄芩素与阳性药美多芭,观察其对PINK1-RNAi帕金森果蝇寿命、运动能力、异翅率、多巴胺含量及多巴胺能神经元的影响,并观察其对腺嘌呤核苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)、线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)及活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量等线粒体功能障碍的影响。结果表明,黄芩素的有效给药剂量为低浓度0.8 mg·mL^(-1)、中浓度1.6 mg·mL^(-1)、高浓度3.2 mg·mL^(-1),阳性药美多芭最佳给药剂量为0.1μg·mL^(-1)。黄芩素和美多芭均能够显著提高PINK1-RNAi雄果蝇的寿命、运动能力和降低翅膀异常率(P<0.05),且低剂量黄芩素效果最佳;黄芩素可改善多巴胺能神经元的丢失,且低、高剂量效果最佳,但美多芭无显著影响;黄芩素和美多芭均对多巴胺含量无显著影响(P>0.05)。黄芩素和美多芭均能够提高PINK1-RNAi雄果蝇的ATP含量(P<0.05),且低剂量黄芩素效果最佳;中剂量黄芩素能够显著提高PINK1-RNAi雄果蝇的mtDNA含量(P<0.05),但美多芭无显著影响;黄芩素和美多芭均对ROS含量无显著影响(P>0.05)。

眼睑基底细胞癌组织中LRIG1、EGFR及GLI1的表达及其相关性研究

目的:探讨眼睑基底细胞癌组织中亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样域蛋白-1(LRIG1)、表皮生长因子受体(EGFR)及神经胶质瘤关联癌基因同源物1(GLI1)的表达情况及其相关性。方法:病例系列报告。纳入蚌埠医科大学第一附属医院2016年1月—2020年11月病理确诊的55例眼睑基底细胞癌患者,其中男26例、女29例,年龄52~89(69.1±9.0)岁。选取55例患者手术切除后保留的癌组织标本,并随机抽取其中22例患者的癌旁正常皮肤组织标本作为对照。观察指标:(1)采用免疫组织化学染色检测并比较LRIG1、EGFR及GLI1在眼睑基底细胞癌组织与癌旁正常皮肤组织中的阳性表达率;(2)比较LRIG1、EGFR及GLI1在不同性别、不同年龄(≥65岁和<65岁)、不同肿块大小(≥2.0 cm和<2.0 cm)患者癌细胞中表达的差异。(3)分析LRIG1、EGFR及GLI1三种蛋白表达水平的相关性。结果:(1)LRIG1在眼睑基底细胞癌组织中阳性表达率为16.4%(9/55),低于在癌旁正常皮肤组织中的阳性表达率72.7%(16/22);而EGFR和GLI1在眼睑基底细胞癌组织中阳性表达率分别为72.7%(40/55)及70.9%(39/55),均高于在癌旁正常皮肤组织中的阳性表达率31.8%(7/22)、27.3%(6/22):差异均有统计学意义(χ^(2)=22.77、11.06、12.32,P值均<0.05)。(2)GLI1、EGFR、LRIG1表达在不同性别、不同年龄及不同肿块大小的患者间差异均无统计学意义(P值均>0.05)。(3)Spearman相关分析表明,55例眼睑基底细胞癌组织中,LRIG1表达分别与EGFR、GLI1表达呈负相关(r=-0.279,P=0.039;r=-0.306,P=0.023);EGFR表达与GLI1表达呈正相关(r=0.499,P<0.001)。结论:EGFR及GLI1在眼睑基底细胞癌组织中均呈高表达,LRIG1呈低表达并分别与两者呈负相关;EGFR及GLI1蛋白可能会导致眼睑基底细胞癌的发生和发展,而LRIG1对癌症的发生发展可能起抑制作用。

盐酸小檗碱通过激活EMT促进小鼠乳腺癌肺转移的作用机制

目的从上皮-间质转化(EMT)途径探讨盐酸小檗碱(BBR)对小鼠乳腺癌肺转移的作用及机制。方法CCK-8法检测BBR对乳腺癌4T1细胞增殖的影响;Transwell实验检测BBR对4T1细胞迁移的影响;采用第4对乳腺脂肪垫注射4T1-Luc细胞法建立小鼠乳腺癌模型,造模小鼠随机分为Control组和BBR组。BBR组小鼠连续腹腔注射BBR工作液,Control组小鼠连续腹腔注射同体积的用于溶解小檗碱粉末的溶剂。通过小动物活体成像系统检测活体小鼠肺部肿瘤转移情况。给药后第42天进行取材,通过显微镜观察HE染色小鼠肺转移情况;Western blot检测BBR对EMT相关蛋白(Vimentin、Snail)以及Akt和ERK信号通路表达的影响。结果BBR促进4T1细胞迁移(P<0.05);体内实验中,与Control组相比,BBR组小鼠的肺转移结节数量明显增多(P<0.05),镜下观察与HE染色结果一致;BBR上调EMT标志分子Vimentin和Snail及通路相关蛋白p-Akt和p-ERK在肿瘤组织中的表达水平,与Control组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论BBR可能通过激活p-Akt和p-ERK通路蛋白表达,促进4T1乳腺癌细胞上皮-间质转化和肺转移。

BUB1表达对结直肠癌细胞增殖、凋亡及PLK1/PTEN信号通路的影响

目的探讨苯并咪唑出芽抑制解除同源物蛋白1(BUB1)表达对结直肠癌细胞增殖、凋亡及Polo样激酶1(PLK1)/10号染色体上缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)信号通路的影响,以期为结直肠癌的临床治疗提供理论依据。方法以2018年8月至2020年8月在该院收集的125对结直肠癌患者癌组织及邻近癌旁组织,以及人结直肠癌细胞系SW1116、SW480、HCT116、HT-29与人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460为研究对象;利用Lipofectamine^(TM)2000转染试剂盒对SW480细胞进行转染,并分组为空白组(细胞未转染)、si-NC组(细胞转染si-NC)、si-BUB1-1组(细胞转染si-BUB1)、si-BUB1-2组(细胞转染si-BUB1-2)。Western blot检测各组细胞中BUB1、促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2及PLK1/PTEN信号通路相关蛋白表达;CCK-8法检测各组细胞在0、24、48、72 h的增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果BUB1在结直肠癌组织的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05);与人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460比较,人结直肠癌细胞SW1116、SW480、HCT116、HT-29中BUB1表达水平均显著升高(P<0.05),且BUB1表达水平在SW480细胞中最高,因此,选择SW480细胞进行后续研究;与空白组和si-NC组比较,si-BUB1-1组、si-BUB1-2组SW480细胞中细胞凋亡率、Bax及PTEN蛋白表达水平显著升高,细胞增殖能力及BUB1、Bcl-2、PLK1表达水平显著降低(P<0.05),空白组与si-NC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论抑制BUB1表达可抑制癌细胞增殖,促进细胞凋亡,该机制可能与PLK1/PTEN信号通路中PLK1表达水平下调,PTEN蛋白表达水平上调有关。

卵巢癌组织中EZH2蛋白表达与临床病理特征及预后的关系

[目的]检测果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在卵巢癌组织中表达情况及与临床病理特征预后的关系,分析EZH2检测的临床意义。[方法 ]采用免疫组织化学法(SP法)检测85例卵巢癌、30例卵巢良性肿瘤、30例正常卵巢组织中EZH2、Cyclin D1及MMP-9蛋白表达情况。[结果]EZH2蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率为72.9%(62/85),较卵巢良性肿瘤组20.0%(6/30)和对照组10.0%(3/30)显著增高(P<0.05);Cyclin D1蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率为60.0%(51/85),较卵巢良性肿瘤组13.3%(4/30)和对照组10.0%(3/30)显著增高(P<0.05);MMP-9蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率为90.6%(77/85),较卵巢良性肿瘤组23.3%(7/30)和对照组6.7%(2/30)显著增高(P<0.05)。EZH2、Cyclin D1及MMP-9蛋白表达与卵巢癌分化程度、FIGO临床分期、淋巴结转移、脉管瘤栓有明显相关性(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明,卵巢癌EZH2蛋白表达阳性患者的生存期短于阴性表达者(P<0.05),经相关性分析发现,EZH2与Cyclin D1及MMP-9蛋白表达呈正相关(r=0.314,0.298;均P<0.01)。[结论]EZH2参与卵巢癌的发生发展,可能与Cyclin D1、MMP-9协同促进卵巢癌的恶性增殖与转移,是卵巢癌预后的危险因素。