导入蜘蛛杀虫肽基因的烟草具有抗虫性

用带有杀虫肽基因的农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍ ｅｆａｃｉｅｎｓ）ＬＢＡ４４０４ 转化烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ ）叶片，共获得３０ 株抗卡那霉素的再生植株． 用这些再生植株对棉铃虫（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍ ｉｇｅｒａ）进行毒力测定，有３ 株转杀虫肽基因植株对棉铃虫有较强抗性． 与对照相比，这３ 株转基因烟草的杀虫率可达３０％～４５％ ，并能显著抑制昆虫蜕皮和生长发育，表现出明显的抗虫作用． 以这３ 株为主进行了ＰＣＲ 扩增及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ实验，结果表明杀虫肽基因已插入到这３

山新杨转Bt+蜘蛛杀虫肽基因的分析

以山新杨(Populus davidiana Dode×P.bollena Lauche)为受体材料,在筛选遗传转化条件的基础上,利用农杆菌介导叶盘转化法进行了Bt+蜘蛛杀虫肽基因转化研究。结果表明:在叶片转化时,卡那霉素的临界质量浓度为10mg/L;生根筛选培养时卡那霉素的临界质量浓度为15mg/L;利用质量浓度为600mg/L的头孢噻肟钠脱菌,对叶片生长和不定芽形成影响不大。山新杨遗传转化的工程菌菌液浓度以0.1～0.2(OD600)为最佳,其叶片分化率为73%～77%、抗性芽率为20%～23%;浸染时间以2～5min为宜,其叶片分化率和抗性芽率最高。在共培养基中加入200μmol/L的乙酰丁香酮,其叶片分化率和抗性芽率分别比对照提高1.43倍和2.61倍。对转化植株的PCR检测结果呈阳性,初步证明外源基因Bt+蜘蛛杀虫肽导入并整合进了山新杨基因组。

欧美杨108号转蜘蛛杀虫肽与Bt毒蛋白嵌合基因转化系统的建立

通过除菌抗生素的筛选试验、叶片对头孢唑啉钠的敏感试验、叶片对卡那霉素的敏感度试验、茎段对卡那霉素的生根敏感试验,成功建立了欧美杨108号转蜘蛛杀虫肽与Bt毒蛋白嵌合基因的转化系统。转化时所选的除菌抗生素为注射用头孢唑啉钠;除菌时,头孢唑啉钠的质量浓度为1000mg/L;在筛选转化体时,卡那霉素的临界质量浓度确定为30mg/L;确定了生根培养基中卡那霉素的临界质量浓度为20mg/L。欧美杨108号转蜘蛛杀虫肽与Bt毒蛋白嵌合基因转化系统的成功建立为该杨树品种的基因工程提供了前提条件。

欧美杨108号转蜘蛛杀虫肽与Bt毒蛋白嵌合基因的研究

以欧美杨108号为外植体材料,利用农杆菌介导法成功地将抗虫基因(蜘蛛杀虫肽+B t毒蛋白的嵌合基因)导入受体中。通过PCR检测,凝胶电泳结果显示8个卡那霉素抗性芽中,6个存在目的基因;经PCR-Southern印迹杂交检测,阳性率为50%,进一步表明目的基因成功整合到欧美杨108号基因组内。

白桦抗虫基因转化的初步研究

用根癌农杆菌介导法对白桦 (Betulaplatyphylla)进行转化 ,获得了转化再生植株。卡那霉素抗性愈伤组织产生率达 10 %～ 2 2 % ,抗性不定枝的生根率达 80 %以上。经分子生物学检测 ,在卡那霉素抗性转化植株中 ,有 34%检测出GUS活性 ,76 .5 %的卡那霉素抗性植株的Southern斑点杂交呈阳性反应。初步证明 。