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两种蜘蛛毒素肽与苏云金芽胞杆菌Cry1Ac蛋白的融合表达及杀虫活性 被引量:6
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作者 陈珺君 刘芳 +6 位作者 廖先清 张志刚 闵勇 饶犇 杨自文 周荣华 刘晓艳 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期838-847,共10页
蜘蛛毒液中含有多种杀虫肽,因而具有较强的杀虫作用,可迅速杀死农林害虫。蜘蛛毒素肽(ω-ACTX-Hv1a,ω-ACTX-Hv2a)是从澳大利亚的多能厚爪蛛Hadronyche versuta的毒液中分离获得,对昆虫有毒但对哺乳动物无毒。本文通过将人工合成的两种... 蜘蛛毒液中含有多种杀虫肽,因而具有较强的杀虫作用,可迅速杀死农林害虫。蜘蛛毒素肽(ω-ACTX-Hv1a,ω-ACTX-Hv2a)是从澳大利亚的多能厚爪蛛Hadronyche versuta的毒液中分离获得,对昆虫有毒但对哺乳动物无毒。本文通过将人工合成的两种蜘蛛肽基因(hv1a、hv2a)与来源于对棉铃虫具有高活性的苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)野生菌株NBIC380中的杀虫基因cry1Ac进行融合并在NBIC380中表达,获得了7种不同的重组菌株BtBM-Ve(含有空表达载体)、BtBM-Ac(含有cry1Ac基因)、BtBM-1a(含有hv1a基因)、BtBM-2a(含有hv2a基因)、BtA1a(含有cry1Ac+hv1a融合基因)、Bt A2a(含有cry1Ac+hv2a融合基因)和BtA(1+2)a(含有cry1Ac+hv1a+hv2a融合基因)。重组菌分别进行了棉铃虫Helicoverpaarmigera2龄幼虫、秀丽隐杆线虫Caenorhabditiselegans和朱砂叶螨Tetranychuscinnabarinus的生物活性测定,结果显示BtBM-Ve无杀虫增效作用,BtBM-Ac、BtBM-1a、BtBM-2a、Bt A1a、BtA2a和BtA(1+2)a针对不同的虫源具有不同的杀虫增效活性,对3种害虫杀虫增效最多的重组菌是BtA(1+2)a,对棉铃虫2龄幼虫杀虫增效百分比为93.43%,对秀丽隐杆线虫为34.48%,对朱砂叶螨为13.46%。本文构建的基因工程菌对防治鳞翅目害虫、螨虫和线虫具有重要的理论意义和应用前景。 展开更多
关键词 蜘蛛毒素肽 苏云金芽胞杆菌 融合蛋白 杀虫活性
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蜘蛛多肽类毒素异源表达的研究进展
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作者 王浩 刘燕波 +2 位作者 李文颖 孟尔 柳珑 《长沙大学学报》 2012年第2期32-34,共3页
蜘蛛毒液是一个巨大的天然多肽和蛋白质分子组合库,具有多种生物学功能.但仅靠从天然的蜘蛛中提取出研究所需的蜘蛛多肽类毒素远不能满足对其的全面研究和开发利用.相比化学的固相合成法合成的低产量和较高成本,利用基因工程的方法异源... 蜘蛛毒液是一个巨大的天然多肽和蛋白质分子组合库,具有多种生物学功能.但仅靠从天然的蜘蛛中提取出研究所需的蜘蛛多肽类毒素远不能满足对其的全面研究和开发利用.相比化学的固相合成法合成的低产量和较高成本,利用基因工程的方法异源表达蜘蛛毒素有较大的优势.综述了近年来利用大肠杆菌表达系统、酵母表达系统、昆虫表达系统和植物表达系统异源表达蜘蛛毒素的研究进展. 展开更多
关键词 蜘蛛毒素 胞内表达 分泌表达
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触形大疣蛛毒素多肽的分离和鉴定
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作者 唐兴 陈连水 +3 位作者 黄亚洲 段志贵 刘中华 梁宋平 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期839-843,共5页
蜘蛛是种类最多的有毒动物,其毒液主要成分是富含二硫键的毒素多肽。蜘蛛毒素多肽主要功能是作用于昆虫神经系统的离子通道或受体。触形大疣蛛隶属于蜘蛛目,原蛛下目,异纺蛛科。通过反相高效液相色谱分离触形大疣蛛粗毒,再通过MALDI-TOF... 蜘蛛是种类最多的有毒动物,其毒液主要成分是富含二硫键的毒素多肽。蜘蛛毒素多肽主要功能是作用于昆虫神经系统的离子通道或受体。触形大疣蛛隶属于蜘蛛目,原蛛下目,异纺蛛科。通过反相高效液相色谱分离触形大疣蛛粗毒,再通过MALDI-TOF-TOF质谱对各个洗脱峰进行分子量测定。实验结果显示,从触形大疣蛛粗毒中一共鉴定到108种的毒素多肽,其分子量在2 000~7 500 Da均有分布,主要分子量范围分布在2 000~4 500 Da(占63.9%),还有一部分分布在4 500~6 000 Da,而在6 000~7 500 Da范围内分布很少。其分子量的分布特征与已报道的原蛛下目蜘蛛均不同,反映了这种蜘蛛毒液成分具有独特的多样性。 展开更多
关键词 蜘蛛毒素 触形大疣蛛 反相高效液相色谱 质谱 多样性
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Isolation and characterization of Hainantoxin-II, a new neurotoxic peptide from the Chinese bird spider (Haplopelma hainanum) 被引量:4
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作者 潘建义 喻志强 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期570-574,共5页
Hainantoxin-II (HnTx-II), a novel neurotoxin, was isolated from the venom of the Chinese bird spider (Haplopelma hainanum) by cation exchange chromatography and reverse-phase HPLC. The toxin was a single chain pol... Hainantoxin-II (HnTx-II), a novel neurotoxin, was isolated from the venom of the Chinese bird spider (Haplopelma hainanum) by cation exchange chromatography and reverse-phase HPLC. The toxin was a single chain polypeptide with calculated molecular weight of 4 253.135 obtained by mass spectrometry. The complete amino acid sequence of HnTx-II was determined by Edman degradation and found to contain 37 residues with three disulfide bonds. Results showed HnTx-II can reversibly paralyze cockroaches for several hours after intra-abdominal injection with ED50 of 16 μg/g and kill the insects immediately at a dose of 60 μg/g. It was also shown to kill mice at a LD50 value of 1.41μg/g after intracerebroventricular injection. Hainantoxin-II shares 91% sequence homology with Huwentoxin-II (HwTx-II), an insecticidal peptide from another bird spider (Haplopelma schmidti) with a unique scaffold. While HnTx-II and HwTx-II both exhibit toxic activities in insects and mammals, HnTx-II shows higher insecticidal activity and lower lethiferous activity of mammals than HwTx-II. These results help clarify structural-functional relationships of the polypeptide toxin. 展开更多
关键词 HnTx-II NEUROTOXIN Insecticidal peptide Spider venom Haplopelma hainanum
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