生鲜蔬菜来源的蜡样芽胞杆菌毒力基因分布与MLST分析

为了解生鲜蔬菜来源蜡样芽胞杆菌的分子流行病学特征,采用PCR技术对来自5种生鲜蔬菜的37株蜡样芽胞杆菌分离株进行了毒力基因(nheA、nheB、nheC、hblA、hblC、hblD、entFM、cytK、ces)检测和多位点序列分型(MLST)分析。结果表明:37株分离株除呕吐毒素基因ces未检出外,其他8个毒力基因均有检出,其中溶血性肠毒素基因nheB的检出率最高,为94.6%,其次为溶血素基因hblC、hblD、hblA和肠毒素基因entFM,检出率均超过80%,溶血性肠毒素基因nheA和nheC检出率较低,分别为78.4%和64.9%;细胞毒素基因cytK的检出率最低,为29.7%。根据毒力基因携带模式,将37株分离菌株分成14个型别,II型携带率最高,携带Hbl和Nhe两种基因的型别有I型、II型和IV型。MLST分析则发现,37株分离菌株可分为30个ST型和5个CC群。ST4和ST378为主要ST型;CC142分布最广泛,不仅包含的ST型最多,而且携带5种毒力型别。以上结果表明,上海市蔬菜中蜡样芽胞杆菌具有潜在肠毒性危害并在遗传上呈现出多样性。该结果对蔬菜中蜡样芽胞杆菌引起食物的监控、预警和爆发后感染源追踪具有指导意义。

淮安市218批婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌毒力基因检测和耐药性分析

目的 了解淮安市婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌污染现状及其对药物敏感、主要毒力基因携带情况。方法2022~2023年抽取淮安市七个县区的婴幼儿奶粉及婴幼儿辅助食品共218批,根据GB4789.14-2014《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》蜡样芽胞杆菌平板计数法(第一法)进行检测,并进行药物敏感性试验,采用荧光定量PCR对检出的蜡样芽胞杆菌进行溶血性(hblC)基因、非溶血性基因(nheB)、呕吐毒素基因(ces)检测。结果 218批婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌检出39批次,检出率达17.89%。在23种药物敏感性试验中,蜡样芽胞杆菌对庆大霉素、阿米卡星、替考拉宁、万古霉素、氯霉素、利奈唑胺、呋喃妥因、利福平、左氧氟沙星、莫西沙星、诺氟沙星敏感率100%,对环丙沙星、米诺环素、四环素、红霉素、克林霉素、莫匹罗星高浓度、复方新诺明、苯唑西林敏感率分别为97.44%、92.31%、89.74%、82.05%、38.46%、23.08%、20.51%、5.13%,对达托霉素非敏感,对头孢洛林、氨苄西林、青霉素全部耐药。溶血性hblC基因携带率高达100%,非溶血性基因nheB携带率为58.97%,本次试验未检出呕吐毒素基因ces。结论 婴幼儿食品蜡样芽孢杆菌检出率较高且检出菌中携带至少一种毒力基因的概率高达100%。对头孢洛林、氨苄西林、青霉素全部耐药,对达托霉素、苯唑西林等药物敏感性差,可为临床用药方案提供指导。

婴幼儿配方乳粉及婴幼儿米粉中的蜡样芽胞杆菌流行情况、耐药性及分子特征研究

目的 了解流通环节市售婴幼儿配方乳粉和婴幼儿米粉中的蜡样芽胞杆菌流行情况、抗生素耐药性和毒力基因等分子特征。方法 采用GB4789.14—2014《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》对样品中的蜡样芽胞杆菌进行检测与生化鉴定。进一步通过抗生素敏感实验和全基因组测序对11株代表性分离株进行研究,获得耐药表型及耐药、毒力基因等分子特征信息。结果 婴幼儿配方乳粉和婴幼儿米粉中蜡样芽胞杆菌的检出率分别为11.97%(56/468)和20.74%(28/135)。11株代表性蜡样芽胞杆菌均为多重耐药菌株,全基因组测序结果发现11株分离株共携带8个耐药基因和14个毒力基因,其中主要携带磷霉素、β-内酰胺类抗生素抗性基因,以及肠毒素基因(hbl和nhe),另发现1株携带ces基因簇蜡样芽胞杆菌菌株。多位点序列分型表明,11株分离株具有遗传多样性,分属10个ST型。结论 婴幼儿配方乳粉和婴幼儿米粉中的蜡样芽胞杆菌检出率较低,但代表菌株的耐药谱和遗传特征具有多样性,应进一步加强监测及采取有效措施进行控制,以保障相关食品的安全性。

白血病患者合并蜡样芽胞杆菌感染1例

1病例资料患者,男性,37岁,入院前一周自觉扁桃体炎前往社区医院就诊,血常规显示:白细胞(white blood cell,WBC)2.2×10^(9)/L、血红蛋白(hemoglobin,Hb)70 g/L、血小板(platelets,PLT)39×10^(9)/L,社区医院建议转上级医院治疗。2022年2月21日为进一步诊治来我院,入院主诉发现血常规异常1周,检查血常规:WBC3.65×10^(9)/L、Hb 66 g/L、PLT 32×10^(9)/L、分类不明细胞18%、晚幼粒细胞1%。

腐乳生产企业帮扶过程中蜡样芽胞杆菌污染情况分析及其风险防控措施

分析所帮扶的腐乳生产企业车间环境、生产器具、生产原料及产品表面的蜡样芽胞杆菌污染状况。结果表明,在腐乳生产过程中,环境、器具、物料回填及包装瓶盖更换等方面出现蜡样芽胞杆菌污染的风险等级较高。根据风险等级提出有效的防控措施,可以为腐乳生产企业进行安全控制提供重要参考。

国内外蜡样芽胞杆菌检测标准对比分析

蜡样芽胞杆菌是引起食源性疾病群体事件的一种主要致病菌,其产生的毒素会引起呕吐或腹泻。本文对比分析国内外蜡样芽胞杆菌检测标准,以期为我国蜡样芽胞杆菌检测标准体系进一步发展提供参考。

蜡样芽胞杆菌GXBC-3三个普鲁兰酶基因的表达及其酶学特性

探索获得优良的新型普鲁兰酶基因,丰富普鲁兰酶理论,对实现普鲁兰酶国产化具有重要意义。分析GenBank数据库中蜡样芽胞杆菌假定Ⅰ型、Ⅱ型普鲁兰酶基因序列,从实验室保藏的蜡样芽胞杆菌Bacilluscereus GXBC-3中克隆得到3个普鲁兰酶基因pulA、pulB、pulC,并分别导入大肠杆菌进行胞内诱导表达。纯化重组酶酶学性质研究表明重组酶PulA能水解α-l,6-和α-l,4-糖苷键,为Ⅱ型普鲁兰酶,以普鲁兰糖为底物时,最适反应温度及pH分别为40℃和6.5,比活力为32.89 U/mg;以可溶性淀粉为底物时,最适反应温度及pH分别为50℃和7.0,比活力为25.71 U/mg。重组酶PulB和PulC二者均只能水解α-l,6-糖苷键,为I型普鲁兰酶,以普鲁兰糖为底物时,其最适反应温度及pH分别为45℃、7.0和45℃、6.5,比活力分别为228.54 U/mg和229.65 U/mg。

蜡样芽胞杆菌NJSZ-13致死松材线虫的因子

蜡样芽胞杆菌NJSZ-13对松材线虫有较高的致死作用。为了明确蜡样芽孢杆菌NJSZ-13对松材线虫的致死因子,探讨了蜡样芽胞杆菌NJSZ-13对松材线虫的作用机制。首先将NJSZ-13菌悬液处理的松材线虫体表彻底消毒并研磨后涂含青霉素的抗性平板,并通过荧光显微镜观察线虫虫体上含gfp荧光质粒的NJSZ-13菌体以明确菌株在线虫虫体上的存在位置。然后测定菌株与松材线虫混合后上清液及其中胞外蛋白粗提物的杀线活性,并测定虫菌混合液的吸光度,观察菌体繁殖量的变化。结果表明:松材线虫体表彻底消毒研磨后涂布抗性平板未长出菌落,且在松材线虫体表观察到菌株NJSZ-13。菌株与松材线虫混合并静置48 h后,其上清液无显著杀线活性。菌株与松材线虫混合并摇培4 d后,上清液中胞外蛋白粗提物浓缩10倍后具有较高的杀线活性,处理松材线虫48 h后的松材线虫死亡率达到66.23%。粗提物经沸水浴30 min后处理松材线虫,线虫死亡率显著降低,处理48 h后松材线虫死亡率仅有23.88%。菌株与松材线虫混合并摇培1 d后,虫菌混合液的吸光度开始显著高于菌液的吸光度,此后两者吸光度下降明显,摇培2至10 d期间,虫菌混合液的吸光度一直维持较高水平。表明蜡样芽胞杆菌NJSZ-13能够粘附于松材线虫体表,主要通过分泌蛋白酶将松材线虫杀死,并能够以线虫虫体为营养进行生长繁殖。

蜡样芽胞杆菌生物膜形成的调控及其去除方法的研究进展

蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus, B. cereus)是一种兼性厌氧的革兰氏阳性杆菌,隶属于芽胞杆菌科蜡样芽胞杆菌属。该菌大量存在于土壤、饲料、水以及各种食品中。B. cereus常作为医药和动物生产中的益生菌使用,其还能对植物根部和土壤起固定作用[1]。B. cereus对于高温、紫外线及多种化学物质都有很强的抗性,具有较强的环境适应性[2]。

蜡样芽胞杆菌肠毒素FM(CwpFM)流行情况及其作用机制的研究进展

蜡样芽胞杆菌是一种广泛存在于环境和食物中的食源性致病菌,可引起肠胃炎和呕吐等多种疾病。蜡样芽胞杆菌孢子无法被巴氏消毒杀死且具有很强的黏附性,可传播到各种食品中,对食品安全和人类健康造成较大威胁。我国对于牛奶的需求不断增加,蜡样芽胞杆菌在乳中的分离率也呈现上升趋势。蜡样芽胞杆菌可产生多种毒力因子,包括成孔毒素、呕吐毒素、溶血素、肠毒素、蛋白酶和磷脂酶等,引发呕吐或腹泻型食物中毒。其中,蜡样芽胞杆菌分泌的肠毒素FM是一种细胞壁肽酶,也被称作CwpFM,其分离率高,但致病性尚不明确。本文首先对蜡样芽胞杆菌的毒力因子进行综述,其次对蜡样芽胞杆菌及其CwpFM在食物和环境等方面的流行情况进行总结,最后概述了CwpFM作用机制的研究进展。

AP631炭疽噬菌体裂解蜡样芽胞杆菌的发现和鉴定

目的 AP631炭疽噬菌体裂解蜡样芽胞杆菌的发现和鉴定。方法通过革兰氏染色、菌落形态特征、噬菌体裂解试验、青霉素敏感试验、溶血试验、生化试验和蛋白质毒素结晶试验对炭疽疫点现场分离的5株菌进行蜡样芽胞杆菌的鉴定,通过PCR扩增、小白鼠毒力测定试验和MLST基因检测等方法对该5株菌和本实验室保存的3株被AP631炭疽噬菌体裂解的蜡样芽胞杆菌进行毒力和基因测定。结果确定了8株可被AP631炭疽噬菌体不完全裂解的蜡样芽胞杆菌。从疫点采集分离的5株菌青霉素敏感试验阴性,炭疽毒力基因PCR扩增阴性,排除了炭疽芽胞杆菌;蛋白质毒素结晶试验染色试验为阴性,排除了苏云金芽胞杆菌;根据溶血试验和生化反应等一系列鉴别实验鉴定为蜡样芽胞杆菌。8株菌的MLST基因检测发现5株菌有新的等位基因位点或ST型。结论本研究首次证明我国使用的炭疽芽胞杆菌诊断AP631噬菌体可以不完全裂解部分蜡样芽胞杆菌,存在非特异性裂解现象,提示在今后使用噬菌体鉴定炭疽杆菌时,对于外环境分离到的可疑芽胞杆菌,特别要注意关于噬菌体不完全裂解的问题,这将为炭疽诊断标准的正确制订提供新的认识并具有重要的指导意义。

蜡样芽胞杆菌BC983的鉴定及生态效应的研究

从健康鹿的粪便中分离到一株需氧的产芽胞革兰氏阳性大杆菌，经生理生化鉴定确定为蜡样芽胞杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）。小鼠腹腔感染２５亿菌不致死。给育成鹿口服１０亿菌无异常反应。该菌的芽胞能耐受１００℃３０分钟煮沸。实验确定该菌在７％的氯化钠、４０％的牛胆汁中生长，生物夺氧试验表明，该菌能争夺环境中的氧，促进厌氧菌生长，用８亿活菌给育成鹿口服治疗大肠杆菌腹泻，治愈率为９１６％，据此，该菌可作为生态菌用于预防和治疗动物的细菌性腹泻病。

蜡样芽胞杆菌根状生长实验方法探讨

目的:研究和完善根状生长实验方法,降低蜡样芽孢杆菌检验结果假阳性率。方法:根据GB 4789.14—2014,在单因素变量情况下,筛选根状生长实验最佳条件。选择蜡样芽胞杆菌标准菌株、蕈状芽胞杆菌标准菌株、实验室分离株,用普通营养琼脂培养基(Nutrient Agar,NA)、平板计数琼脂培养基(Plate Count Agar,PCA)、胰酪大豆胨琼脂培养基(Tryptose Soya Agar,TSA)、含0.6%酵母膏的胰酪胨大豆琼脂培养基(Trypticase Soy-Yeast Extract Agar,TSA-YE),在不同条件下分别进行根状生长实验。结果:经30℃培养72 h,PCA倾注9 mL的琼脂量,蜡样芽胞杆菌与蕈状芽胞杆菌根状生长实验效果最好,不易出现假阳性。结论:单一变量情况下,PCA>NA>TSA>TSA-YE,倾注的培养基厚度为9 mL>12 mL>15 mL>18 mL>20 mL,30℃培养效果好于37℃,培养时间为72 h。该实验条件优化为区分蜡样芽胞杆菌和蕈状芽胞杆菌提供了一定的理论依据。

2011-2013年呼和浩特市售食品蜡样芽胞杆菌污染状况调查分析

目的为食品卫生监督人员提供蜡样芽胞杆菌对本市部分食品污染的监管数据。方法根据国家食源性致病菌监测工作手册及食品安全国家标准进行检验。结果监测3年3类208份食品样本,共检出蜡样芽胞杆菌26株,阳性率为12.50%。结论呼市市售食品受到蜡样芽胞杆菌一定程度的污染,熟制米面制品污染最为严重,流通环节以农贸市场检出率最高。

蜡样芽胞杆菌计数及鉴定方法的比较

采用不同培养基,使用涂布法和MPN法分别检测蜡样芽胞杆菌数;并采用国标传统生化鉴定方法、VITKE 2、PCR-探针法对可疑菌落进行鉴定。3种计数方法的结果均在特征值区间内,VITKE 2、PCR-探针法比传统生化鉴定方法更快速地筛选出蜡样芽胞杆菌阳性,但都需要进行根状实验和蛋白毒素晶体实验区分出蜡样芽胞杆菌和相似菌。各种方法均可用于蜡样芽胞杆菌计数鉴定,日常检验应根据情况选择检验方法。

青花椒提取物对蜡样芽胞杆菌抑菌活性研究

以昭通青花椒作为原料,采用浸泡法与超声提取相结合得到青花椒提取物,作用于常见的食源性致病菌。结果表明,青花椒提取物对蜡样芽胞杆菌(Bacillus Cereus)具有较好的抑制效果,最小抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration)为50 mg/mL,最小杀菌浓度(Minimum Bactericidai Concentration)为100 mg/mL,生长曲线结果表明B.cereus在MIC值下生长缓慢甚至停止生长,细胞内钾离子以及核酸泄露情况明显。

一起由金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌引起食物中毒的实验室检测分析

目的:通过实验室微生物检测查清山东省淄博市淄川区一起学校食物中毒事件的原因,为相似的食源性疾病暴发事件提供处置依据。方法:采集可疑食品及其包装袋8份、病例呕吐物2份至实验室进行常见致病菌检测,用实时荧光PCR方法测定增菌液中的金黄色葡萄球菌肠毒素类型。结果:1份面包屑检出金黄色葡萄球菌,1份吃剩的鸡腿检出蜡样芽胞杆菌,其余样品未检出可疑致病菌。结论:根据采集样品实验室微生物检测结果,结合现场流行病学调查以及中毒病例临床症状综合分析,此事件因食物保存不当,导致金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌滋生,食入引起食物中毒。

乳粉中蜡样芽胞杆菌检验能力评价结果分析

[目的]本实验室参加2022年国家市场监督管理总局食品安全抽检监测司组织的“奶粉中蜡样芽胞杆菌检验能力评价”,对检测结果进行评价分析。[方法]对样品编号为NFLY-13、NFLY-17两个乳粉样定量检测。按照作业指导书、《GB 4789.14—2014食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》(第一法)对样品检验,用蜡样芽胞杆菌显色培养基、VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定系统与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对试验数据进行比对。[结果]检测与比对结果基本一致。[结论]两个考核样品检测结果获满意评价。

蜡样芽胞杆菌BC307的分离鉴定及其RsiP蛋白的抗体制备

蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)是一种常见的食源性致病菌。从食物中毒病人的食物残渣中分离到1株产呕吐毒素的蜡样芽胞杆菌BC307,其对青霉素类抗生素具有较强的抗性。抗SigP因子RsiP是蜡样芽胞杆菌族(Bacillus cereus sensu lato)细菌青霉素耐药的重要调控因子。该实验利用原核系统表达RsiP蛋白并利用亲和层析法进行纯化,免疫小鼠后获得高效价多克隆抗体。结果表明,RsiP蛋白在炭疽芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌、苏云金芽胞杆菌中高度同源,在Western Blotting实验中RsiP抗血清与这3种菌的全菌蛋白均能发生特异性免疫反应。研究结果为探究RsiP对蜡样芽胞杆菌群细菌的青霉素耐药性调控打下了良好的基础。