蜡状芽胞杆菌群的分类研究

本文综述了蜡状芽胞杆菌群分子分类的最新研究进展,重点阐述了蜡状芽胞杆菌、炭疽芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌这三个种之间的分子鉴定关系。

蜡状芽胞杆菌群菌株中部分病原相关因子的检测

对26株蜡状芽胞杆菌群菌株进行了肠毒素基因及其它病原相关因子的检测。PCR结果表明,17株蜡状芽胞杆菌群菌株中含有病原调控因子plcR的同源序列。采用3组溶血肠毒素hbl基因和3组非溶血肠毒素nhe基因特异性引物,分别可从73%的菌株中至少扩增出一个与预期DNA片段大小一致的片段,其中,苏云金芽胞杆菌菌株中溶血素hbl基因和非溶血素nhe基因的阳性检出率为83%。蜡状芽胞杆菌DBt248完全没有溶血活性,而且在溶血素hbl和非溶血素nhe基因的3个亚基以及病原调控因子plcR的PCR检测中均为阴性,有望作为宿主菌用于苏云金芽胞杆菌晶体蛋白的表达和应用。

鱼粉中蜡状芽胞杆菌的分离鉴定及其致病性研究

本文在国内首次报道了由蜡状芽胞杆菌引起的腹泻病。某鸡场鸡群因饲喂了某批鱼粉而引致发病， 经检查证明鱼粉中含有蜡状芽胞杆菌， 经计数为６０ ×１０６ 个／ｇ ， 远远超出鱼粉的卫生标准。文中对该菌的致病性进行了初步研究， 结果可致死小鼠， 药敏试验结果表明该菌对蒽诺沙星、环丙沙星敏感。该研究表明， 对饲料尤为鱼粉的卫生问题， 即饲料源性疾病问题应引起畜牧及兽医工作者的密切注意。

蜡状芽胞杆菌群三大类全基因组序列的同源性分析

全基因组比对一般采用全基因组范围内的序列比对,本文首次采用单基因在全基因组范围内进行基因排列比对,选取了蜡状芽胞杆菌群中的44个必须基因,在该群中3大类共5个(Bt.97-27,Bc.14579,Bc.10987,Bc.E33L和Ba.Ames Ancestor)全基因组进行横向比对,所有基因在各个基因组中的排列顺序完全一致,少有交叉,进一步证明:在蜡状芽胞杆菌群中,特别是在蜡状芽胞杆菌、苏云金芽胞杆菌和炭疽芽胞杆菌之间,存在相当大的基因相似性,这与前人的研究结果一致。这种相似性有利于将来用于在该群中所有菌株的全基因组测序装配中。

鹿源蜡状芽胞杆菌的鉴定及药敏谱测定

蜡状芽胞杆菌(Bacilluscereus)引起人的食物中毒及感染症(蔡妙英等,1985),早已被证实。现已确认该菌为人和动物的致病菌。在家畜,该菌引起猪中毒(魏建功等,1990)及骆驼感染(魏建功等,1990)等已见报道。但在野生经济动物,特别是梅花鹿,由此菌引起的感染尚未见记载。本试验对鹿源蜡状芽胞杆菌分离株的培养生长特性、形态及染色特性、生理生化特性、对实验动物的致病力以及药物敏感谱进行了研究。

蜡状芽胞杆菌中超氧化物歧化酶的提取

采用超声波法、甲苯法、乙醇—氯仿法及蜗牛酶裂解法进行了蜡状芽胞杆菌的超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）提取试验，并用邻苯三酚自氧化法测定ＳＯＤ的活性。结果显示，蜡状芽胞杆菌中含有ＳＯＤ。超声波法和甲苯法可以从该菌中提出ＳＯＤ，而乙醇—氯仿法及蜗牛酶裂解法则未能提出ＳＯＤ。

梅花鹿蜡状芽胞杆菌的分离鉴定

某鹿场梅花仔鹿突然发病,出现排血便等,症状后24小时内死亡,死后腹部迅速膨大,显著的病理剖检变化为肠道内严重出血,发病12只,全部死亡,致死率为100%。为澄清病因,采集病料,进行病原分离鉴定,报告如下。

蜡状芽胞杆菌群代谢途径的分析和比较

微生物基因组测序和高通量分析方法获得了大量的数据和信息,利用这些信息研究代谢网络成为当前的一个新热点。文章在比较和分析重构代谢网络不同方法的基础上,利用蜡状芽胞杆菌群中已测序的9株蜡状芽胞杆菌、6株炭疽芽胞杆菌、6株苏云金芽胞杆菌基因组,对它们的碳水化合物代谢途径、氨基酸代谢途径和能量代谢途径进行比较与分析,找出它们的共性和特性。这3种菌都存在必需的糖酵解、三羧酸循环、丙氨酸代谢、组氨酸代谢及能量代谢等途径;同时它们还存在特殊的代谢途径,蜡状芽胞杆菌对单糖的利用率较高;炭疽芽胞杆菌的氨基酸降解和转运途径较丰富;苏云金芽胞杆菌中存在催化谷氨酸转化的代谢旁路等。代谢途径的分析为深入研究它们的食物毒素、炭疽毒素和杀虫毒素提供了新思路。

蜡状芽胞杆菌群16S rDNA分析

蜡状芽胞杆菌群主要包括炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)、蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus)、苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)。GenBank已有这个群的8个菌株完成了全基因组序列测定。对这8株蜡状芽胞杆菌群菌株中98条16S rDNA的序列进行相互BLAST比较,发现在同一基因组内各个16S rDNA拷贝全局相似度最低为96.47%,在不同基因组间16S rDNA局部片段比对最小相似度达到99.72%,对应片段长度也有1 417 bp。这点充分说明,该群的细菌完全共用同一种16S rDNA,根据16S rDNA给细菌分类的特点,它们应该属于同一个种。在亲缘关系上,枯草芽胞杆菌离蜡状芽胞杆菌群最近。

蜡状芽胞杆菌转录激活子PIcR调控多基因的表达

蜡状芽胞杆菌是一种条件致病菌 ,它能引起食物中毒和其它形式的疾病。潜在的致病因子包括磷脂酶C、溶血素、肠毒素和呕吐毒素等。在很多致病菌中致病因子的表达都是协同调控的。从蜡状芽胞杆菌模式菌株ATCC1 4579经转座子诱变的文库 ,筛选到一株磷脂酶阴性的突变子 ,该突变子的蛋白酶活性明显减弱了。插入位点的序列分析表明 ,一个高度同源于苏云金芽胞杆菌转录激活子PlcR的基因被插入失活了。研究结果表明 ,除在苏云金芽胞杆菌中能激活磷脂酰肌醇磷脂酶C基因的转录外 ,转录激活子PlcR至少还能调控卵磷脂酶和一个或多个蛋白酶基因的表达 ,这是一个多效调节因子。

蜡状芽胞杆菌促进红球菌发酵产甲壳素脱乙酰酶

以胶体甲壳素作为产酶诱导物,利用蜡状芽胞杆菌和红球菌共同发酵提高甲壳素脱乙酰酶(chitin deacetylase,CDA)的产量。通过监测2菌株混合发酵时甲壳素酶和CDA酶活力随时间的变化,验证了双菌株协同发酵产脱乙酰酶的作用。在此基础上,采用单因素实验考察两菌株配比、发酵周期、温度、接种量、装液量和摇瓶转速等因素对脱乙酰酶活力的影响,并进一步设计Plackett-Burman(PB)实验、最陡爬坡实验、中心组合设计实验和响应面优化实验,确定适宜2菌株协同发酵的工艺条件。结果显示,2菌株接种量最佳配比为2∶8,最佳产酶培养基组分(g/L):蛋白胨0.25、K_(2)HPO_(4)0.6、MgSO 41.5、酵母浸粉3.0、NaCl 8.5、KH_(2)PO_(4)0.8、胶体甲壳素8.0。优化后菌株产CDA的活力约为优化前的1.96倍,研究结果可为工业化产CDA提供参考。

蜡状芽胞杆菌对骆驼致病性的研究

70年代末至80年代初,在甘肃阿克赛县发生一种骆驼身体各部严重化脓的传染性疾病,有人称骆驼“脓疱病”。本病呈散发性或地方性流行,多为慢性。患病骆驼体表或内脏均可出现脓疱,内脏脓疱常可致死。

利用ERIC-PCR对苏云金芽胞杆菌与蜡状芽胞杆菌进行鉴定的研究

为了探索ERIC-PCR技术在苏云金芽胞杆菌和蜡状芽胞杆菌的鉴定及分型中的应用价值,本研究采用PCR方法初步检测苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因的组成,并对苏云金芽胞杆菌和蜡状芽胞杆菌的总DNA进行ERIC-PCR扩增,分析ERIC-PCR指纹图谱的特点并采用NTSYS2.10软件对其进行聚类。结果显示,各菌株的ERIC指纹图谱表现出不同程度的多态性,但图谱与菌株所含cry基因的类型存在一定的相关性。聚类分析结果显示,含有相同或相近cry基因类型的Bt菌株在进化树上趋向聚为一类,而不含cry基因的蜡状芽胞杆菌趋向于与不含cry基因的Bt菌株聚为一类或单独聚类。若在多种模式菌株的参考下,该方法可用于苏云金芽胞杆菌的初步鉴定和分型。

苏云金杆菌毒性质粒在蜡状芽胞杆菌群间的水平转移

以苏云金芽胞杆菌KT0为质粒供体菌,在液体环境中与蜡状芽胞杆菌组成员菌(Bacillus cereus sensu lato group strains)发生接合转移。对所筛选到的接合转移子进行了质粒稳定性检测、PCR验证以及供、受体菌染色体背景RAPD图谱分析。不同培养基中质粒转移率数据表明:在人工LB培养基及灭菌牛乳中,质粒pHT73均能以不同频率转移至蜡状芽胞杆菌组受体菌,并且在牛乳中转移活性更高,最高可这4.8×10^(-4)cfu/ donor。获得质粒的受体菌同时具备了质粒所编码基因功能,产生其编码的杀虫晶体蛋白。SDS-PAGE电泳和光镜结果显示转化菌在得到外源质粒pHT73后,能产生由cry1Ac基因编码的130 ku蛋白Cry1Ac,在芽胞期能形成稳定的菱形晶体。

蜡状芽胞杆菌nos基因簇基因克隆及生物信息学分析

为了探究革兰氏阳性菌蜡状芽胞杆菌HS-N10 nos基因簇相关基因的特点,PCR扩增获得了HS-N10 nos基因簇相关基因,其中包括nosZ全长1 914bp、nosR部分片段1 749bp、nosD部分片段946bp和nosF部分片段495bp。经BLASTN分析,HS-N10 nosZ序列和nosD序列分别与施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)相应序列相似性最高;HS-N10 nosR序列和nosF序列分别与裂环无色杆菌(Achromobacter cycloclastes)相应序列相似性最高。通过在线数据库与分析工具分别对HSN10nos基因簇相关基因进行了生物信息学分析。

关于蜡状芽胞杆菌磷脂酶C的研究

磷脂酶C(PLC)可以催化磷脂水解生成磷酸单酯和甘油二酯,在植物油酶法脱胶中有许多应用。蜡状芽胞杆菌PLC(PLCBc)底物范围广、活性高,且在脱胶过程不产生其他副产物,是酶法脱胶的最佳选择。但PLCBc的大规模生产和可靠的高通量筛选方法仍是一个难题。本文总结了关于PLCBc的研究进展,重点阐述了筛选方法、表达系统、催化机制和抑制剂等。

蜡状芽胞杆菌的研究现状和今后研究方向

前言蜡状芽胞杆菌(Bacillus Cereus)是自然界分布极广的好气性芽胞杆菌。对该菌的研究虽刚刚开始,但在很早以前人们就知道它污染食品等有机物,是造成腐败的原因,然而并不认为它具有病原性,通常视为非病原性杂菌。据Stopler等(1964),Curtis等(1967)的报告,证明该菌在特定条件下也能成为致病性病原体。经过近几年对该菌病原性的研究,才知道和食物中毒有关。继Hauge(1950)的报道以后,在欧美的集体食物中毒性病例中也分离、检出了这种菌。

蜡状芽胞杆菌对芘的降解特性及降解酶研究

考察蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus)对水体中芘的降解特性,分析其代谢产物和降解酶的活性.结果表明,1 mg·L-1Mn2+、0.1 mg·L-1Fe3+和10 mg·L-1葡萄糖混合物对芘的降解有明显促进作用;1 g·L-1菌体在120 h内对2.5μmol·L-1芘的降解率达到61.4%.利用LC-MS/MS分析芘代谢产物,检测到1-萘酚、2-萘酚、9-羟基菲和1-羟基芘4种单羟基多环芳烃,表明芘在单加氧酶作用下开环降解,且B.cereus能有效分解利用4种代谢产物,其最高利用率分别为100%、90.3%、98.3%和52.7%.酶活力分析实验结果表明,B.cereus具有的水杨酸羟化酶,邻苯二酚1,2-双加氧酶和邻苯二酚2,3-双加氧酶在芘的降解中起关键作用,其酶活力经芘诱导后均有明显提高.结合产物分析及酶活测定,推断B.cereus对芘的降解途径以及降解过程是由单加氧酶和双加氧酶联合起作用.

蜡状芽胞杆菌对常用消毒剂的抵抗力

近年来,蜡状芽胞杆菌引起食物中毒日渐增多,为进行有效的消毒,我们测定了蜡状芽胞杆菌对常用消毒剂的抵抗力。