中蜂敌害大蜡螟绿色防控技术

大蜡螟属鳞翅目(Lepidoptera)、螟蛾科(Pyralidae)、蜡螟亚科(Galleriinae),是中华蜜蜂Apis cerana cerana Fabricius (简称“中蜂”)的主要敌害。大蜡螟幼虫(又称巢虫或绵虫)以蜡屑为食,破坏蜜蜂巢房,取食蜂蜜、花粉和蜜蜂幼虫茧衣,造成大量幼虫和蛹的死亡,危害世界各地蜂群[1-3]。1只大蜡螟成虫一次可产卵600-1500粒,温度适宜时卵经过3 d就能孵化成幼虫[4-6,19]。

噬菌体PCCM_KpP1172的鉴定及其对大蜡螟幼虫碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌感染的疗效评估

背景碳青霉烯耐药的高毒力肺炎克雷伯菌感染发生率逐年增加,临床治疗困难,死亡率高。使用具有高裂解能力的噬菌体治疗细菌感染是颇具前景的治疗方法。目的针对碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌分离一株新型裂解性T7噬菌体,对该分离株进行生物学特性测定和基因组学测序分析,为临床开展噬菌体治疗提供可应用的噬菌体资源。方法从肺部感染患者的痰液中分离出肺炎克雷伯菌,通过细菌鉴定、药敏分析、全基因组测序和PCR检测验证菌株的毒力基因与耐药基因,以此株肺炎克雷伯菌为宿主菌,在污水中分离出一株裂解性噬菌体,命名为PCCM_KpP1172。测定该噬菌体生物学特性,分析其基因组序列,并通过大蜡螟幼虫感染模型检测该噬菌体的治疗效果。结果该株肺炎克雷伯菌基因组分析存在耐药基因与毒力基因rmpA2、rmpA、iroN、icu。以此菌株为宿主菌分离到新型肺炎克雷伯菌噬菌体,命名为PCCM_KpP1172,在宿主菌菌苔上可形成完全透明的噬菌斑并伴晕圈;透射电镜下呈现有尾噬菌体目短尾病毒科病毒的典型形态特征;一步生长曲线显示其潜伏期为15 min,最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.0001,对ST11KL64型肺炎克雷伯菌有广泛裂解范围。基因组分析显示,该噬菌体为双链DNA(总长度为40222 bp),G+C含量为53%,基因组包含49个开放阅读框(open reading frames,ORF),无毒力或抗生素耐药性相关基因。基于系统发育分析,该噬菌体可归属于有尾噬菌体目Studiervirinae亚科Przondovirus属的一个新种。此外,噬菌体PCCM_KpP1172可在体外3 h内有效抑制碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的生长,并能提高宿主菌感染的大蜡螟幼虫存活率(P<0.01)。结论本研究针对碳青霉烯耐药的高毒力肺炎克雷伯菌分离并鉴定了一株新的T7噬菌体PCCM_KpP1172,具有高裂解力,无耐药基因和毒力基因,对大蜡螟幼虫感染模型具有良好治疗效果。

大蜡螟性肽受体基因GmelSPR克隆及表达分析

交配是昆虫繁衍的重要方式,雌性交配后会显现出一系列保护后代而产生的行为,SPR则是重要的交配行为调控受体基因。本研究根据前期转录组SPR基因数据信息,利用RT-PCR扩增出大蜡螟SPR基因的完整CDS序列,命名为GmelSPR(GenBank登录号:OR347698)。生物信息学分析显示该基因编码区全长1263 bp,编码420个氨基酸,预测分子量48.70718 kDa,理论等电点8.70,有7个跨膜螺旋区,具有典型G蛋白偶联受体蛋白特征。系统进化树比对结果显示大蜡螟GmelSPR与螟蛾科昆虫脐橙螟Amyelois transitella、印度谷螟Plodia interpunctella置信度较高。大蜡螟不同状态、不同组织中表达分析表明,未交尾雌蛾、雄蛾和已交尾雌蛾、雄蛾GmelSPR均在头部较高表达,且在未交尾雌蛾、雄蛾中表达量均高于已交尾雌蛾、雄蛾。本研究克隆了大蜡螟SPR基因,克隆结果表明GmelSPR与螟蛾科昆虫亲缘较近;表达谱分析则显示GmelSPR可能参与大蜡螟交配行为,为进一步研究大蜡螟中SPR基因功能奠定基础。

顺-3-己烯醇乙酸酯对大蜡螟的驱避作用

利用植物挥发物监测和调控害虫行为已逐渐成为害虫绿色防控的重要途径。顺-3-己烯醇乙酸酯广泛存在于瓜果及绿色植物的叶片中,具有环境友好、无残留的优点。大蜡螟是养蜂产业中常见的害虫,严重影响蜂产业和蜜蜂资源保护。为生产中应用顺-3-己烯醇乙酸酯调控大蜡螟的行为控制其对蜂群的危害提供依据,为开发新型昆虫行为调控剂以及大蜡螟的绿色防控提供支持,利用Y-型嗅觉仪研究大蜡螟不同虫态的个体对不同浓度、同一浓度不同剂量顺-3-己烯醇乙酸酯的行为趋性。结果表明,大蜡螟幼虫对顺-3-己烯醇乙酸酯表现出显著的负趋性,浓度为0.5 mol/L时,大蜡螟幼虫总选择率为79.33%,并表现为极显著的负趋性;雄成虫对顺-3-己烯醇乙酸酯的选择率为8.33%,具有显著的负趋性;不同剂量的顺-3-己烯醇乙酸酯对大蜡螟成虫的选择行为影响不显著,但对幼虫均具有明显的驱避效果。

贵州省蜂巢害虫大小蜡螟的两种寄生蜂的研究

报道了蜡螟洼头小蜂的形态、生活史、生物学特性、保护利用方法和蜡螟绒茧蜂的形态及分布。

大蜡螟幼虫肠道微生物聚乙烯降解酶基因的表达及性质分析

聚乙烯(polyethylene,PE)塑料结构稳定,难以自然降解,对环境造成严重污染。大蜡螟(Galleria mellonella L.)幼虫取食聚乙烯后,排泄物出现羰基(C-O)和羟基(R-OH)官能团,能够使PE膜长链结构发生解聚。为研究其原理,基于免培养技术,对大蜡螟幼虫肠道内容物进行宏基因组和宏蛋白质组分析,挖掘得到2个潜在新PE降解酶基因POD8747和AhpC5341,并在大肠杆菌表达系统中进行了异源表达、纯化和初步性质分析。结果表明,重组POD8747和AhpC5341的最适温度均为50℃,最适pH均为8.0。经POD8747和AhpC5341处理后的PE膜亲水性增加,且其接触角从100?分别降低到(90.07±3.45)和(91.73±1.70)?。以上结果表明,POD8747和AhpC5341在PE降解中能够发挥表面氧化能力,从而促进其他酶进一步降解PE。

取食农田残膜对大蜡螟种群延续的影响

【目的】研究取食农田残膜对大蜡螟种群延续的影响。【方法】以麦麸(MF)和新疆农田残膜(NTCM)不同配比作饲料(即MF,50%NTCM,100%NTCM 3个处理),在恒温30℃、60%±10%RH(相对湿度)条件下饲养大蜡螟2个世代。【结果】(1)大蜡螟幼虫取食麦麸量随残膜添加量的增加而减少(P<0.05),取食残膜量随添加残膜量的增加而增加,各处理第二代取食麦麸量较第一代减少,而取食残膜量增加;对农田残膜和麦麸的总取食量随残膜添加量的增加而减小,MF处理总取食量第二代较第一代减少,50%NTCM和100%NTCM处理总取食量第二代较第一代增加。(2)大蜡螟蛹重、蛹长均随残膜量的增加而减小,3个处理第二代蛹重及蛹长均低于第一代(P>0.05);不同处理对大蜡螟雌雄蛾体重影响不显著,且各处理第二代雌雄蛾体重均低于第一代(P>0.05),而不同处理大蜡螟雌雄蛾体长无明显变化规律。(3)大蜡螟雌蛾产卵量随残膜量增加而减小,100%NTCM处理第二代产卵量大于第一代(P>0.05),MF和50%NTCM处理第二代产卵量小于第一代(P<0.05);大蜡螟卵孵化率随农田残膜添加量增加而减小(P>0.05),第二代孵化率小于第一代(P>0.05)。【结论】以新疆农田残膜和麦麸不同配比为饲料,大蜡螟幼虫取食残膜量随麦麸添加量增加而减小,各处理第二代取食麦麸量较第一代减少,而取食残膜量增加;大蜡螟蛹重、蛹长均随残膜量的增加而减小,3个处理第二代蛹重及蛹长均低于第一代;不同处理对大蜡螟雌雄蛾体重影响不显著,且各处理第二代雌雄蛾体重均低于第一代,而不同处理大蜡螟雌雄蛾体长无明显变化规律;大蜡螟产卵量、卵孵化率均随残膜量增加而减小,第二代孵化率均小于第一代,但100%NTCM处理第二代产卵量大于第一代。

基于蜡螟感染模型研究亚抑菌浓度氟康唑对光滑念珠菌毒力的影响

目的基于蜡螟感染模型探究亚抑菌浓度(sub-MIC)氟康唑(fluconazole,FLU)对光滑念珠菌毒力的影响。方法收集青海省人民医院2021年4月至2022年10月临床分离非重复的光滑念珠菌作为实验菌株,采用ATB法测定FLU对光滑念珠菌的最低抑菌浓度(MIC)。采用蜡螟感染模型检测光滑念珠菌的毒力,并采用病理学和病原学方法评估建模是否成功。穿刺及不同sub-MIC FLU对健康蜡螟的影响:对照组不做任何处理,实验组分为三组,即PBS组(注射10μL PBS)、FLU亚组(分别注射10μL FLU药液,使感染蜡螟体内FLU浓度为0.5 mg/kg、1 mg/kg、2 mg/kg、4 mg/kg、8 mg/kg、16 mg/kg)和穿刺组(微量注射器穿刺但不注射)。不同sub-MIC的FLU对光滑念珠菌感染蜡螟的影响:采用2.50×10^(6)酵母/只剂量感染蜡螟,2 h后,对照组再注射10μL PBS,实验组再注射不同浓度FLU工作液,观测对光滑念珠菌感染的蜡螟的治疗效果。结果FLU对9株临床分离的光滑念珠MIC为8~32 mg/L,光滑念珠菌ATCC2001的MIC为32 mg/L。实验组蜡螟肠组织病理切片中检测到酵母样孢子,肠组织培养出光滑念珠菌,对照组中肠组织病理切片和真菌培养均未发现真菌。穿刺可造成蜡螟损伤,但所致死亡率低于10%。1/2MIC FLU可提高光滑念珠菌感染蜡螟生存率,具有统计学意义(P<0.05),而1/4MIC、1/8MIC、1/16MIC FLU对光滑念珠菌感染蜡螟生存率较PBS无明显的干预作用,差异无统计学意义(P>0.05)。结论1/2MIC FLU对光滑念珠菌感染的蜡螟具有一定的治疗作用,但浓度低于1/2MIC对感染蜡螟无明显的保护作用。

嗜线虫肠杆菌抑制大蜡螟幼虫的免疫反应

为探究嗜线虫肠杆菌对大蜡螟幼虫的致病机理,测定被嗜线虫肠杆菌侵入的大蜡螟幼虫的血淋巴中酶(酚氧化酶(PO)和羧酸酯酶(CarE))活性和能源(蛋白质、总糖)含量及其肠道内Imd信号通路中PGRP-LB基因表达量的变化。结果表明:嗜线虫肠杆菌侵入大蜡螟幼虫后,在0~84 h期间,PO和CarE活性表现出“升高—峰值—下降”的变化,血淋巴蛋白质含量持续升高且显著高于对照,总糖含量快速降低且显著低于对照;在0~60 h期间,Imd信号通路中负调控因子PGRP-LB基因表达量呈现急速上升(18 h时表达量最高)又急速下降趋势,而且在适当时间停喂嗜线虫肠杆菌,其肠道内PGRP-LB基因的含量能恢复正常,显示Imd信号通路的免疫调节作用。嗜线虫肠杆菌的侵入对大蜡螟幼虫血腔代谢和肠道免疫系统产生影响,说明它在抑制寄主昆虫免疫反应中发挥重要作用。

大蜡螟幼虫和成虫对不同蜜蜂巢脾的选择

为了探究大蜡螟幼虫和成虫对东、西方蜜蜂巢脾的选择偏好性及其机理,分别在蜂场和实验室放置两种蜜蜂的巢脾(巢脾带花粉和蜜),观察记录巢脾受大蜡螟的侵染情况。结果表明,在东方蜜蜂蜂场和西方蜜蜂蜂场,单独放置的东方蜜蜂巢脾平均2 d即受大蜡螟侵染严重,而单独放置的西方蜜蜂巢脾却不受大蜡螟侵染,一同放置的东、西方蜜蜂巢脾,平均2 d后东方蜜蜂巢脾遭受大蜡螟成虫侵染,5 d后大蜡螟幼虫转移侵染西方蜜蜂巢脾;在实验室,大蜡螟幼虫选择东、西方蜜蜂巢脾无显著差异。说明不取食的大蜡螟成虫基于嗅觉偏向选择东方蜜蜂巢脾,而取食巢脾的大蜡螟幼虫则对东、西方蜜蜂巢脾无选择性。

蜡螟绒茧蜂的生物学特性

以大蜡螟低龄幼虫为繁殖寄主,对蜡螟绒茧蜂的有关生物学特性进行了研究.结果表明,该蜂的发育起点温度和有效积温分别为11.79℃和338.5日度.22,25,30和32.5℃恒温下的平均世代历期分别为29.36,21.41,16.88和19.94 d.蜡螟绒茧蜂在35℃条件下不能完成发育,全世代发育的最适温度为25～30℃.

蜡螟绒茧蜂对大蜡螟幼虫的寄生作用

以大蜡螟的低龄幼虫为寄主,在实验室条件下对蜡螟绒茧蜂的寄生作用进行了研究。结果表明:蜡螟绒茧蜂一生最多产卵68粒,平均45.85粒。蜡螟绒茧蜂卵产于寄主体内的位置多在1～4腹节;多数在寄主体内只产1粒或2粒卵。该蜂能寄生大蜡螟1～4龄幼虫,但2～4龄幼虫同时存在时,偏爱寄生2、3龄幼虫,其选择系数分别为0.35和0.42。

腊肠树的重要害虫——粗鳞蜡螟(鳞翅目,螟蛾科,蜡螟亚科)

海南截获一批危害腊肠豆的害虫,鉴定发现是分布东南亚的粗鳞蜡螟TrachylepidiafructicassiellaRagonot,属腊肠树果实的严重害虫。虽然在我国尚未发现其自然分布,但该害虫的主要寄主———腊肠树CassiafistulaLinn.在我国南方通常被作为行道树或花卉栽培,有较广的分布。本文介绍粗鳞蜡螟的形态特征、分布和危害情况,以引起有关部门的注意。

亚致死剂量苏云金杆菌蜡螟亚种对大蜡螟幼虫SOD和POX活性的影响

本文研究了亚致死剂量苏云金杆菌蜡螟亚种对大蜡螟幼虫超氧化物歧化酶和过氧化物酶的影响。结果表明，经Ｂｔ晶体处理后大蜡螟幼虫体内和幼虫肠道超氧化物歧化酶以及过氧化物酶活力增强，幼虫体内过氧化物酶同功酶增加一条谱带。

亚致死剂量苏云金杆菌蜡螟亚种对大蜡螟幼虫酯酶活力的影响

本文研究了亚致死剂量苏云金杆菌蜡螟亚种对大蜡螟幼虫以及幼虫肠道、血淋巴酯酶的影响。结果表明，经Ｂ．ｔ．晶体处理后大蜡螟整体幼虫和肠道酯酶比活力均下降，同功酶谱无明显变化；

亚致死剂量苏云金杆菌蜡螟亚种对大蜡螟幼虫磷酸酶活力的影响

本文研究了亚致死剂量苏云金杆菌蜡螟亚种对大蜡螟幼虫磷酸酶活力的影响。结果表明,经苏云金杆菌蜡螟亚种(Bacillus thuringiensis galleriae)晶体蛋白处理后大蜡螟幼虫肠道酸性磷酸酶比活力升高,电泳分析表明肠道碱性磷酸酶活力降低,同功酶谱无明显变化。组织化学染色结果也表明,中肠细胞碱性磷酸酶活力下降。但幼虫血淋巴碱性磷酸酶活力及同功酶谱都没有明显变化。

亚致死剂量苏云金杆菌蜡螟亚种晶体蛋白对大蜡螟幼虫肠道消化酶的影响

本文研究了亚致死剂量苏云金杆菌蜡螟亚种晶体蛋白对大蜡螟幼虫肠道消化酶(蛋白酶、胰蛋白酶、淀粉酶)活性的影响。结果表明,经晶体蛋白处理后大蜡螟幼虫肠道蛋白酶和胰蛋白酶比活力均下降。电泳分析表明,淀粉酶两种同功酶的活力均增强,蛋白酶各同功酶活力均下降。

几种昆虫病原线虫对大蜡螟幼虫血淋巴及其能源物质含量的影响

用异小杆线虫(Heterorhabditisspp.)和斯氏线虫(Steinernemaspp.)处理大蜡螟5龄幼虫。结果显示:处理后12h昆虫血细胞开始变形、崩解,且血细胞数量急剧下降,到昆虫接近死亡时(24～32h左右),血细胞数比正常水平下降85%;处理后24h血淋巴总量下降73.61%,酯酶活性不断增强,蛋白含量明显高于对照,总糖含量降低14%～70%。上述结果表明:昆虫病原线虫的侵入破坏了寄主的防御系统,改变了寄主血淋巴能源物质含量。

大蜡螟幼虫的体色遗传规律

对大蜡螟Galleriamellonella幼虫不同颜色品系的普通遗传学分析表明 ,大蜡螟幼虫的体色遗传是常染色体遗传且符合复等位基因遗传规律。深黄色基因 (AA)对灰黑色基因 (BB)和灰色基因 (CC)为显性 ,深黄色基因 (AA)对白黄色基因 (DD)、灰黑色基因 (BB)对白黄色基因 (DD)和灰色基因 (CC)、灰色基因 (CC)对白黄色基因 (DD)为不完全显性。基因型为AD、BD、CD的个体 ,其表现型均为黄色 ;基因型为AA、BC的个体 ,其表现型均为深黄色。

大蜡螟工厂化生产流程及环境因素的控制

为了寻找大蜡螟工厂化生产过程中的适宜环境条件 ,定量控制研究了幼虫期环境因素对大蜡螟合格产品的影响。结果表明幼虫期适宜的环境条件为温度 (2 9± 1)℃、相对湿度 5 0 %～ 70 %、虫口密度 30 0头 /盒 。