嗜线虫肠杆菌抑制大蜡螟幼虫的免疫反应

为探究嗜线虫肠杆菌对大蜡螟幼虫的致病机理,测定被嗜线虫肠杆菌侵入的大蜡螟幼虫的血淋巴中酶(酚氧化酶(PO)和羧酸酯酶(CarE))活性和能源(蛋白质、总糖)含量及其肠道内Imd信号通路中PGRP-LB基因表达量的变化。结果表明:嗜线虫肠杆菌侵入大蜡螟幼虫后,在0~84 h期间,PO和CarE活性表现出“升高—峰值—下降”的变化,血淋巴蛋白质含量持续升高且显著高于对照,总糖含量快速降低且显著低于对照;在0~60 h期间,Imd信号通路中负调控因子PGRP-LB基因表达量呈现急速上升(18 h时表达量最高)又急速下降趋势,而且在适当时间停喂嗜线虫肠杆菌,其肠道内PGRP-LB基因的含量能恢复正常,显示Imd信号通路的免疫调节作用。嗜线虫肠杆菌的侵入对大蜡螟幼虫血腔代谢和肠道免疫系统产生影响,说明它在抑制寄主昆虫免疫反应中发挥重要作用。

大蜡螟幼虫的体色遗传规律

对大蜡螟Galleriamellonella幼虫不同颜色品系的普通遗传学分析表明 ,大蜡螟幼虫的体色遗传是常染色体遗传且符合复等位基因遗传规律。深黄色基因 (AA)对灰黑色基因 (BB)和灰色基因 (CC)为显性 ,深黄色基因 (AA)对白黄色基因 (DD)、灰黑色基因 (BB)对白黄色基因 (DD)和灰色基因 (CC)、灰色基因 (CC)对白黄色基因 (DD)为不完全显性。基因型为AD、BD、CD的个体 ,其表现型均为黄色 ;基因型为AA、BC的个体 ,其表现型均为深黄色。

影响大蜡螟幼虫体色的环境因素初探

大蜡螟幼虫体色各式各样 ,通过对比实验分析了温度、湿度、密度、光照和食物等环境因素对大蜡螟幼虫体色的影响。实验结果表明 :不同温度、湿度、密度、光照条件下大蜡螟幼虫的体色均未变化。在研究食物对大蜡螟幼虫体色的影响实验中食蜂巢的白黄色幼虫身体内部发黑 ,这可能是黑色的蜂巢透射出的颜色。实验为进一步研究大蜡螟幼虫体色的遗传机制打下了基础。

大蜡螟幼虫和成虫对不同蜜蜂巢脾的选择

为了探究大蜡螟幼虫和成虫对东、西方蜜蜂巢脾的选择偏好性及其机理,分别在蜂场和实验室放置两种蜜蜂的巢脾(巢脾带花粉和蜜),观察记录巢脾受大蜡螟的侵染情况。结果表明,在东方蜜蜂蜂场和西方蜜蜂蜂场,单独放置的东方蜜蜂巢脾平均2 d即受大蜡螟侵染严重,而单独放置的西方蜜蜂巢脾却不受大蜡螟侵染,一同放置的东、西方蜜蜂巢脾,平均2 d后东方蜜蜂巢脾遭受大蜡螟成虫侵染,5 d后大蜡螟幼虫转移侵染西方蜜蜂巢脾;在实验室,大蜡螟幼虫选择东、西方蜜蜂巢脾无显著差异。说明不取食的大蜡螟成虫基于嗅觉偏向选择东方蜜蜂巢脾,而取食巢脾的大蜡螟幼虫则对东、西方蜜蜂巢脾无选择性。

不同引诱剂对大蜡螟幼虫的引诱效果研究

为更好地防治中蜂主要敌害大蜡螟(Galleria mellonella),本试验研究不同引诱剂对大蜡螟幼虫的引诱效果,以达到引诱大蜡螟幼虫、减少对蜂群危害为目的。根据大蜡螟幼虫在蜂箱内的食物嗜性,以酯类、能量、蛋白质及其他等四类食物设计9种引诱剂,筛选大蜡螟幼虫的最优引诱剂。结果表明,以巢脾、花粉、蜂蜜和蜡渣为原料制作的引诱剂诱导大蜡螟幼虫的效果最好。此外,引诱剂中的水分含量也能显著影响其对大蜡螟幼虫的诱导效果。引诱剂水分含量低于11.31%的引诱率均为0%,水分含量为15.57%~18.32%的引诱剂41 h后引诱率达(2.9±1.1)%^(62.9±13.0)%。

以大蜡螟幼虫为模型研究伏立康唑抗茄病镰刀菌效果

目的构建大蜡螟幼虫动物茄病镰刀菌感染模型并观察伏立康唑治疗效果。方法选用临床分离获得茄病镰刀菌1株,实验所用孢子悬液浓度梯度为1×10^(5)~1×10^(8)CFU/mL,根据死亡率筛选出最佳感染浓度,并以此浓度感染大蜡螟幼虫,用伏立康唑(1.5 mg/kg)治疗;同时设置未处理组和生理盐水对照组,实验过程中收集大蜡螟幼虫尸体做病理检测并记录5 d内死亡情况,每24 h记录1次。通过感染后病理组织切片和大蜡螟幼虫生存率两个方面进行评价。结果大蜡螟幼虫在1×10^(7)CFU/mL茄病镰刀菌感染后,5 d死亡率达100%,1×10^(7)CFU/mL为本次实验组最佳感染浓度;大蜡螟幼虫感染第2 d死亡虫体病理检测发现大量茄病镰刀菌菌丝和孢子,经伏立康唑治疗后,单个幼虫体内菌体减少,菌体内菌丝减少;大蜡螟幼虫生存曲线显示伏立康唑治疗组较单茄病镰刀菌感染组生存率显著增高(P<0.05)。结论大蜡螟幼虫能够作为茄病镰刀菌体内感染的动物模型,并可用于观察药物治疗效果。

光滑念珠菌临床分离株胞外酶活性与蜡螟幼虫体内致病性的相关性研究

目的基于蜡螟幼虫感染模型探讨光滑念珠菌临床分离株胞外酶活性与致病性之间的关系。方法采用实验性研究方法,收集青海省人民医院2021年6月至2022年1月临床分离的非重复光滑念珠菌71株。采用牛血清蛋白琼脂培养基、卵黄琼脂培养基、羊血琼脂培养基、吐温-80琼脂培养基和三丁酸甘油酯琼脂培养基分别检测光滑念珠菌的天冬氨酰蛋白酶、磷脂酶、溶血素、酯酶和脂肪酶的活性;采用光滑念珠菌ATCC2001不同浓度(1.25×108 CFU/ml、2.50×108 CFU/ml、3.75×108 CFU/ml、5.00×108 CFU/ml)的菌悬液感染蜡螟幼虫并计算半数致死浓度(LC50);采用蜡螟幼虫组织病理学及病原学分析,确定感染模型构建是否成功;将光滑念珠菌临床分离株配制成LC50浓度,通过注射感染蜡螟幼虫以检测对蜡螟幼虫致病性;采用Spearman检验或Pearson检验分析光滑念珠菌临床分离株胞外酶活性与蜡螟幼虫体内致病性之间的相关性。结果 71株临床分离的光滑念珠菌,培养2 d后均表现为低溶血活性;培养4 d后均可检测到天冬氨酰蛋白酶,其中有7株(9.86%)、19株(26.76%)、45株(63.38%)分别表现出低、中、高天冬氨酰蛋白酶活性;培养7 d后71株均未检测到磷脂酶、酯酶和脂肪酶活性。光滑念珠菌对蜡螟幼虫LC50= 2.50×108 CFU/ml;实验组蜡螟幼虫,肠道组织病理切片检见真菌孢子,培养后经微生物质谱鉴定为光滑念珠菌,而对照组病理切片及培养均未发现真菌。Spearman检验显示,天冬氨酰蛋白酶活性指数与蜡螟幼虫生存率呈线性正相关(r= 0.73,P<0.01),差异有统计学意义;Pearson检验显示,溶血活性指数与蜡螟幼虫生存率之间没有明显的线性关系(r=0.16,P>0.05),差异无统计学意义。结论本研究中光滑念珠菌临床分离株均有天冬氨酰蛋白酶活性和低溶血活性,无磷脂酶、酯酶和脂肪酶活性。光滑念珠菌天冬氨酰蛋白酶活性与蜡螟幼虫体内致病性呈正相关性。

亚致死剂量苏云金杆菌蜡螟亚种对大蜡螟幼虫物质代谢的影响

本文研究了亚致死剂量苏云金杆菌蜡螟亚种(Bacillus thuringiensis galleriae)晶体蛋白对大蜡螟(Galleria mellonella)幼虫物质代谢的影响。结果表明,大蜡螟幼虫经亚致死剂量B.t.galleriae晶体蛋白处理后,中肠糖原、组蛋白及RNA的量均较正常幼虫减少。处理组幼虫整体匀浆物中可溶性蛋白质含量也较正常幼虫低。大蜡螟幼虫经B.t.galleriae晶体蛋白处理后中肠上皮细胞明显空泡化,并发生解体。

聚乙烯高效降解复合菌系的构建及其降解特性研究

【目的】聚乙烯塑料的稳定性及与日俱增的使用量为生态环境带来严重“白色污染”,其风化形成的微塑料为生物健康安全带来严重威胁的难题亟待解决。【方法】通过选择与纯培养技术分离大蜡螟幼虫消化道内潜在的聚乙烯微生物降解资源,通过菌株比例复配构建高效降解复合菌系,通过质控回收评估其降解能力,使用光镜与扫描电镜验证其降解性能,通过红外光谱、凝胶渗透色谱、气质联用与液质联用等技术手段探究聚乙烯的微生物降解特性。【结果】共分离出13株可降解聚乙烯微生物;首次发现Debaryomyces hansenii具有高效降解聚乙烯的能力;构建出一组由真菌与细菌组成的聚乙烯高效降解复合菌系,相较于单菌复合菌系的降解性能提升了3.3倍,其降解效率高达0.9367 mg/d远高于现有研究水平;光镜与扫描电镜发现聚乙烯薄膜降解后表面存在生物膜附着痕迹与明显孔洞;红外光谱显示降解液中存在多个新官能团,凝胶渗透色谱结果显示降解后聚乙烯微塑料分子量降低;气质与液质联用结果表明降解液中出现了酰胺类、氨基酸类、烯烃类、醇类、酮醛类等生物活性成分,以及大分子烷烃类物质等。【结论】研究挖掘了聚乙烯的微生物降解资源,构建出了高效降解复合菌系,探究了微生物的降解特性,为聚乙烯的微生物降解提供了数据支撑与可行方案。

金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶Lys239表达纯化及活性分析

为获得具有高效裂解活性的金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶,将测序后的噬菌体全基因序列在GenBank数据库中进行比对,找出裂解酶基因序列,对其克隆后在BL21(DE3)中表达蛋白并纯化,选择大蜡螟幼虫作为模型模拟体内细菌感染以探究其抑菌效果。结果显示,裂解酶合成基因构建到载体pET22b中,得到重组质粒pET22b-lys239。并将重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞后诱导其表达,经纯化验证后,获得浓度为2μg/μL的具有裂解活性的裂解酶Lys239。大蜡螟幼虫体内细菌感染试验结果显示,Lys239处理组存活率明显高于对照组,血淋巴负荷测定显示各处理组与对照组差异极显著(P<0.01)且Lys239浓度越高,对于金黄色葡萄球菌抑制效果越显著。说明重组表达的裂解酶Lys239具有良好的抑菌效果,可作为一种潜在的新型抑菌剂。

拟双角斯氏线虫生物学特性的研究

本文对拟双角斯氏线虫Ｄ４３品系的生物学特性进行了研究。结果表明：该线虫在１０℃下不能侵染大蜡螟幼虫；２５℃下在大蜡螟幼虫体内完成一个侵染周期需２３２～２４０小时；每克大蜡螟幼虫组织可繁殖８１８３×１０５条侵染期幼虫；该线虫有较强的垂直扩散能力，３天内４９３％的线虫可扩散到５ｃｍ处远，１５～２０ｃｍ处有６０％的线虫分布；该线虫比Ｓ．ｃａｒｐｏｃａｐｓａｅＡ２４品系线虫更耐高温，经３７℃水浴处理１０小时后，其死亡率仅为２４７％，而Ａ２４线虫高达８９４％；在沙壤土中的存活能力与Ｓ．ｃａｒｐｏｃａｐｓａｅＢＪ品系和Ｓ．ｂｉｃｏｒｎｕｔｕｍ线虫没有显著差异；室内感染４８小时后，对槐尺蠖、菜青虫和小麦红吸浆虫的致亡率分别为８９４％、８１４％和２６２％。

昆虫病原线虫的室内人工繁殖研究

用高压灭菌的大蜡螟老熟幼虫及人工培养基培养昆虫病原线虫芜菁夜绒线虫Steinernemafeltiaeotio品系，每条守主可收获线虫0．55万条；每70g人工培养基上可收获线虫5.8百万～7．2百万条。使用初生型细菌及无菌侵染期线虫接种大蜡螟幼虫，可大大提高线虫的产量。另外培养基组分及线虫的收获方法，也是影响线虫产量的重要因素之一。线虫的贮存方法及贮存期长短是影响线虫侵染力的重要因素。

长春地区鸡源奇异变形杆菌的分离鉴定及毒力分析

【背景】奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)是一种机会致病菌,广泛存在于周围环境中,常导致动物和人类感染。【目的】探究吉林省长春地区某养鸡场病鸡死亡原因,为疾病防控提供参考。【方法】从病死青年鸡脏器分离到病原菌TSA-1,通过革兰氏染色、生化试验和16S rRNA基因序列鉴定,并进行药敏试验、毒力基因检测、细胞毒性和黏附性试验、大蜡螟攻毒试验研究。【结果】分离株TSA-1在镜下呈短杆状、球状的革兰氏阴性菌,生化特性与奇异变形杆菌相一致,16S rRNA基因序列比对显示与奇异变形杆菌相似度为100%;药敏试验结果显示分离株TSA-1对氨苄西林、四环素、卡那霉素、头孢唑林等14种药物耐药,对环丙沙星、恩诺沙星等7种药物敏感;分离株还具有较强的生物被膜形成能力,携带ireA、ucaA、pmfA、atfA、ptA、zapA、hpmA和flhC这8种毒力基因,并对巨噬细胞RAW 264.7表现出细胞毒性,而且对Caco-2细胞具有很强的黏附作用;同时对大蜡螟幼虫表现出比禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli O78,APEC-O78)更强的致死作用。【结论】从病死鸡脏器分离得到的奇异变形杆菌TSA-1具有多重耐药性,并携带多种毒力基因,对细胞和大蜡螟幼虫表现出强毒性作用,说明该菌是引起病鸡死亡的主要致病菌之一,应引起重视。