复合式蝎形引物实时定量检测端粒酶延伸产物

针对端粒酶延伸产物中靶基因序列的特殊性 ,开发了一种可产生荧光的复合式蝎形引物 ,该引物的 5′端带有可特异性检测靶基因的探针序列 ,PCR阻断剂将其与引物序列连接 .当复合式蝎形引物延伸 ,探针序列与同一分子内的靶基因杂交 ,荧光信号产生 .运用该技术 ,建立了定量检测端粒酶延伸产物的实时荧光PCR方法 .该法可在快速PCR循环条件下 ,对 0 .15～ 1.5 0× 10 3 amol/ μL范围内的样品进行定量检测 ,线性相关系数R2 =0 .9992 .该法操作简便 。

蝎形引物PCR快速检测环境水样中沙门菌方法研究

[目的 ]以蝎形引物PCR技术为基础建立一套环境水样沙门菌的快速检测方法。 [方法 ]选择沙门菌himA基因设计出以荧光素 (FAM)和淬灭物 (DABCYL)双标记探针的茎环尾状结构构成蝎形引物 ,对 8种沙门菌和 8种非沙门菌经增菌、DNA提取后 ,以蝎形引物PCR方法进行检测 ,探讨该检测方法的可行性、特异性和灵敏度 ,并与普通引物PCR法检测 50份环境水样进行比较。 [结果 ]蝎形引物PCR方法检测沙门菌 ,细菌密度与荧光相对强度存在着量比关系 ,与普通引物PCR法比较 ,具有快速、特异、灵敏度高的特点 ,在 50 μlPCR反应体系中最低可检出 2cfu沙门菌。[结论 ]沙门菌蝎形引物在PCR扩增中 ,探针可特异地与目的DNA片段杂交 ,使DABCYL不能有效地淬灭FAM产生的荧光 ,荧光可经仪器直读检出。