蝎毒多肽提取物抑制DU-145细胞COX-2和MMP-9表达的研究

目的:研究蝎毒多肽提取物(peptide extract from scorpion venom,PESV)对雄激素非依赖性人前列腺癌细胞株DU-145COX-2和MMP-9表达的影响,进一步探讨其抗血管生成的分子机制,为抗前列腺癌骨转移提供有效的治疗手段。方法:采用免疫组只化学方法检测PESV对COX-2、MMP-9蛋白表达的影响,应用RT-PCR检测PESV对MMP-9在mRNA水平表达的影响。结果:蝎毒多肽提取物(40μg/mL)作用于前列腺癌细胞后,COX-2、MMP-9蛋白表达水平明显下调(P<0.05),进一步检测发现MMP-9在mRNA水平亦明显下降(P<0.05)。结论:蝎毒多肽提取物(PESV)通过抑制前列腺癌细胞血管生成因子COX-2的表达而发挥其抗血管生成作用,具有临床应用价值。

蝎毒多肽提取物对白血病小鼠Bcl-2 SDF-1α与TGF-β1表达的影响

目的:探讨蝎毒多肽提取物(PESV)对白血病小鼠Bcl-2、SDF-1α与TGF-β1表达的影响,探究PESV对白血病细胞增殖和浸润的影响与机制。方法:NOD-SCID小鼠60只,按本课题前期研究方法,建立人白血病NOD-SCID小鼠髓外浸润模型。选取造模成功的小鼠40只,随机分为4组,每组10只,分别为高、中、低剂量组和模型组,另设同周龄正常NOD-SCID小鼠10只为空白对照组。高、中、低剂量组每只分别尾静脉注射PESV 1.2mg/(kg·d)、0.6mg/(kg·d)、0.3mg/(kg·d),模型组和空白组每只均尾静脉注射0.9%的生理盐水0.3mL/d,35d后全部处死,取血清和骨髓细胞培养液上清,用ELISA法进行Bcl-2、SDF-1α与TGF-β1的检测。结果:高、中、低剂量组存活率均高于模型组,高、中、低剂量组小鼠血清以及骨髓的Bcl-2、SDF-1α均明显低于模型组(P<0.05),而TGF-β1均高于模型组,均以高剂量组效果最为明显(P<0.05)。结论:蝎毒多肽提取物可以有效的降低白血病小鼠血清及骨髓中Bcl-2、SDF-1α的表达,提高TGF-β1的表达,具有较好的阻抑白血病细胞增殖和浸润的作用。

蝎毒多肽提取物对白血病小鼠E-钙黏蛋白、CD49d和CXCR4表达的影响

目的探讨蝎毒多肽提取物(PESV)对E-钙黏蛋白、CD49d和CXCR4表达的影响,探究PESV对白血病细胞髓外浸润的影响与机制。方法NOD-SCID小鼠50只,建立人白血病NOD-SCID小鼠髓外浸润模型,随机分为5组,每组10只,分别为PESV高、中、低剂量组,模型组和空白组。PESV高、中、低剂量组小鼠分别尾静脉注射PESV1.2,0.6,0.3 mg/kg,模型组和空白组均注射0.9%的生理盐水0.3 ml,治疗28 d后,用流式细胞术检测小鼠外周血中CD49d和CXCR4的表达,35 d处死小鼠后用免疫组化法检测其肝脏中E-钙黏蛋白表达。结果治疗组CD49d和CXCR4的表达均低于模型组(P<0.01),各治疗组E-钙黏蛋白表达均高于模型组(P<0.01)。结论PESV可以有效地提高白血病小鼠E-钙黏蛋白的表达,降低CD49d和CXCR4的表达,具有较好的阻抑白血病细胞髓外浸润的作用。

蝎毒多肽提取物对人膀胱癌T24细胞增殖抑制作用的研究

目的探讨蝎毒多肽提取物(PESV)对人膀胱癌T24细胞增殖的抑制作用及其机制。方法采用体外培养法培养T24细胞,应用MTT法检测对照组和实验组(不同浓度PESV)处理膀胱癌T24细胞后的增殖变化;倒置显微镜观察其对T24细胞形态的影响;RT-PCR检测实验组(低剂量、中剂量及高剂量)BAX和Bcl-2的mRNA的表达变化。结果:PESV能显著抑制T24细胞的增殖,呈现时间和剂量依赖性,差异具有统计学意义(P<0.01),24h抑制率接近50%的T24细胞生长浓度为75mg/L;低、中及高浓度PESV均可致T24细胞生长明显抑制,出现典型细胞凋亡形态;和对照组比较,实验组BAXmRNA和BAX/Bcl-2mRNA表达升高,Bcl-2mRNA表达下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 PESV对膀胱癌T24细胞具有明显抑制作用,其诱导T24细胞凋亡的作用可能与上调BAX和下调Bcl-2的表达有关。

蝎毒多肽提取物促进环磷酰胺抑制Lewis肺癌的作用机制研究

目的探讨蝎毒多肽提取物增强环磷酰胺抗肿瘤的机制。方法建立小鼠Lewis肺癌皮下荷瘤模型,随机分为荷瘤对照组(模型组)、环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)组、蝎毒多肽提取物(polypeptideextract from scorpion venom,PESV)组和联合组(CTX+PESV组),每组10只。记录肿瘤生长曲线,并采用逆转录PCR法和免疫组织化学法检测肿瘤微环境中免疫抑制因子血管内皮生长因子-A(VEGF-A)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达变化,采用免疫荧光化学法检测肿瘤组织中树突细胞(dendritic cells,DCs)表型CD80、CD86的表达变化。结果连续治疗21天后,联合组Lewis肺癌移植瘤的生长明显抑制(P<0.05);与模型组相比较,PESV组中CD80、CD86的表达有所增强,而CTX组中CD80、CD86的表达有所下降,联合组与CTX组相比强度和表达量均有所增加;与模型组比较PESV组和CTX组TGF-β1和VEGF-A mRNA表达量均降低(均P<0.05);与PESV组和CTX组比较,联合组TGF-β1和VEGF-A的mRNA表达量均降低(P<0.05)。结论 PESV可抑制Lewis肺癌中VEGF-A和TGF-β1的表达,促进DC的成熟,恢复其抗原摄取提呈功能,逆转CTX对机体的免疫损伤,从而起到诱导肿瘤细胞凋亡的作用。

蝎毒多肽提取物对白血病细胞粘附力影响的实验研究

目的观察蝎毒多肽提取物(PESV,防治白血病中药提取物)对抑制人白血病原代细胞粘附力的影响。方法以人白血病原代细胞为研究对象,台盼蓝拒染法检测PESV对人白血病原代细胞的细胞毒作用;观察其对白血病原代细胞与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)粘附的影响。结果PESV在对细胞最佳作用浓度15μg.mL-1下,能够明显抑制人白血病原代细胞与HU-VEC的粘附,抑制率为(52.18±21.01)%;各浓度组与阳性对照组比较具有显著性差异(P<0.05)。结论PESV在对细胞最佳作用浓度下,对人白血病原代细胞的黏附力有明显抑制作用。

蝎毒多肽提取物对肺癌荷瘤裸鼠血流变学的影响

目的观察蝎毒多肽提取物(PESV)对肺癌荷瘤裸鼠血流变学的影响。方法移植肺癌荷瘤裸鼠随机分为PESV组(皮下注射PESV)与对照组(皮下注射生理盐水)。采用FA SCO-300型全自动表观黏度快测仪对两组的全血黏度进行检测。结果与对照组相比,PESV组血流变学指标均有不同程度的降低,尤其是全血低切表观黏度、全血高切表观黏度、C asson黏度、C asson屈服应力均明显低于对照组(P<0.01)。结论PESV可降低荷瘤裸鼠血液黏度,对肺癌荷瘤裸鼠肿瘤转移能力有明显的抑制作用。

蝎毒多肽提取物对K562细胞PI3K和p-Akt信号蛋白表达及细胞增殖的影响

本研究旨在探讨蝎毒多肽提取物(PESV)对人慢性髓系白血病细胞系K562细胞凋亡调控的PI3K和p-Akt信号蛋白的影响及作用机制。将体外培养的K562细胞,经PESV处理不同时间后,通过MTT法检测细胞增殖曲线,Western blot法检测PI3K及p-Akt蛋白水平变化。结果表明,与对照组相比,PESV处理后K562细胞凋亡率增加,PI3K及p-Akt蛋白表达降低。结论:PESV可能通过抑制凋亡调控的PI3K、p-Akt信号蛋白,抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡。

蝎毒多肽提取物对前列腺癌细胞增殖的影响

目的观察蝎毒多肽提取物（PESV）对非激素依赖性前列腺癌DU-145和PC-3细胞的生长与增殖、细胞周期及cyclinE和p27蛋白表达的影响。方法采用噻唑蓝（MTT）法检测PESV对前列腺癌细胞PC-3和DU—145生长与增殖的影响，流式细胞术观察药物对细胞周期的影响，免疫组织化学法检测药物干预后，cyclinE和p27蛋白水平表达的变化。结果MTT显示，PBSV在浓度40-200μg／ml时对前列腺癌细胞毒性作用明显（40μg／ml时，DU—145细胞抑制率为30．5％，PC-3细胞抑制率为33．1％，与阴性对照组相比，P〈0．05），且随剂量加大作用增大，浓度在200μg／ml时，100％抑制，呈明显剂量效应关系；流式细胞术显示，PESV干预后G0／G1细胞的百分比增多，S期的前列腺癌细胞减少（DU-145细胞和PC-3细胞S期的比例分别为34．1％和17．1％，与阴性组比较，P〈0．01）；免疫组化显示，PBMV干预后，DU-145和PC-3细胞cyclinE蛋白表达水平下调，p27蛋白表达水平上调。结论PESV对前列腺癌细胞增殖具有抑制作用。对前列腺癌治疗具有潜在价值。

蝎毒多肽提取物对化疗期间再增殖H22肿瘤组织HIF-1α和SDF-1/CXCR4表达的影响

目的:研究化疗期间再增殖中H22肿瘤组织HIF-1α和SDF-1/CXCR4表达的变化及蝎毒多肽提取物(polypep-tide extract from scorpion venom,PESV)对其表达的影响,以探讨肿瘤组织再增殖期间新生血管生成发生的机制。方法:以免疫组织化学方法检测化疗期间不同时间点肿瘤组织HIF-1α,SDF-1及CXCR4的表达,以ELISA方法检测肿瘤组织SDF-1的含量,以Qwin V3图像分析软件对肿瘤组织HIF-1α,SDF-1及CXCR4表达进行分析,并进行相关性分析。结果:模型组肿瘤组织HIF-1α表达在第14天和第21天无差异性,在第28天表达水平显著升高;PESV低剂量组在3个时间点表达无差异性,而PESV高剂量组表达在第21天最低,在第14天最高,ELSA检测结果显示,荷瘤对照组表达逐渐增多,尤其是在第14～21天,增加迅速。模型组,SDF-1表达在14～21 d表达增加缓慢,但在21～28 d增加迅速;PESV高、低剂量组SDF-1表达水平增加缓慢,尤其是高剂量组,3个时间点肿瘤组织表达水平差异无显著性。免疫组织化学检测SDF-1结果和ELISA一致。对HIF-1α和SDF-1灰度值分析结果显示,r=0.805,两者存在相关性。PESV低、高剂量组肿瘤组织CXCR4下调,但PESV低、高剂量组之间无差异性。结论:在化疗期间肿瘤组织产生HIF-1α,HIF-1α诱导间质组织分泌SDF-1,HIF-1α和SDF-1促进VEGF的表达上调,从而诱发肿瘤内新生血管的生成。PESV有效抑制HIF-1α和SDF-1的表达。

蝎毒多肽提取物对A549细胞增殖抑制作用机制研究

目的:观察蝎毒多肽提取物(PESV)对非小细胞肺癌细胞株A549的增殖抑制作用及可能的作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度PESV对A549细胞生长与增殖的影响,下游实验将对数生长期的A549细胞分为阴性对照组、PESV低、中、高剂量组,应用流式细胞术、免疫细胞化学法、Western blot法检测PESV干预后细胞周期及VEGF,HIF-1α和PTEN蛋白表达的变化。结果:MTT结果显示,PESV在一定浓度范围内对A549细胞的增殖活性有明显抑制作用(P<0.01)。流式细胞法、免疫细胞化学法及Western blot法结果显示,PESV干预后能使A549细胞阻滞于G0/G1期,并显著下调HIF-1α,VEGF表达,上调PTEN表达。结论:PESV能够抑制A549细胞的增殖,其作用机制可能与影响血管生成因子VEGF,HIF-1α和PTEN的表达而直接抑制细胞增殖、阻滞细胞周期和抑制血管生成有关。

蝎毒多肽提取物抑制H_(22)肝癌血管生成的作用机制研究

目的探讨蝎毒多肽提取物抗肿瘤血管生成的机制。方法建立H22肝癌皮下荷瘤模型,随机分为荷瘤对照组(对照组),蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)高、低剂量组,5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)组,每组10只。连续干预14天。绘制肿瘤体积生长曲线并计算抑瘤率;HE染色观察各组肿瘤组织病理变化;采用SP法检测各组肿瘤组织微血管密度(microvessel density,MVD)。采用免疫组织化学法及Western blot法检测各组磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phosphoprotein kinase B,P-Akt)、缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子-A(vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A)蛋白表达。结果5-Fu组,PESV高、低剂量组抑瘤率分别为64.8%、43.7%和32.4%。与对照组比较,三个给药组PI3K、PAkt、HIF-1α、VEGF-A蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),PESV高、低剂量组MVD均降低(P<0.05)。结论 PESV可抑制H22肝癌血管生成,其机制可能与抑制肿瘤微环境中PI3K、P-Akt、HIF-1α、VEGF-A的表达有关。

蝎毒多肽提取物促进自噬抑制S_(180)肉瘤作用机制的研究

目的探讨蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)抑制S180肉瘤的机制。方法小鼠30只,建立S180肉瘤皮下荷瘤模型,随机分为对照组、PESV组和雷帕霉素(rapamycin,RAPA)组,每组10只,给药组ig给药,连续给药14 d。绘制肿瘤体积生长曲线并且计算抑瘤率;HE染色观察各组肿瘤组织病理变化;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Beclin1、MAP1LC3A、CD133的蛋白表达差异;Western blotting检测各组肿瘤组织中Beclin1、MAP1LC3A、CD133的蛋白表达。结果 PESV组和RAPA组移植瘤的生长受到明显抑制,PESV组与RAPA组的抑瘤率分别为17.9%和25.0%(P<0.05)。与对照组相比,PESV组和RAPA组Beclin1、MAP1LC3A蛋白表达明显上调(P<0.05)。且CD133的蛋白表达明显下调(P<0.01)。结论 PESV可抑制S180肉瘤细胞生长,其机制可能与促进自噬相关因子Beclin1、MAP1LC3A的表达及抑制肿瘤干细胞标志物CD133的表达有关。

蝎毒多肽提取物对5-Fu干预H22荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的探讨蝎毒多肽提取物(PESV)对5-Fu干预H22荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法 Balb/c小鼠随机分为对照组、模型组、化疗组及PESV高、低剂量组,模型组接种H22肝癌,化疗组ip 20 mg/kg 5-Fu,PESV组化疗同时ig 40、10 mg/kg PESV,连续干预28 d后处死,计算瘤质量、抑瘤率、脾脏指数和胸腺指数。采用鸡红细胞吞噬实验检测H22荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能;流式细胞术检测小鼠脾细胞中T细胞亚群、NK细胞和NKT细胞的变化;采用ELISA法检测小鼠外周血中IFN-γ和IL-4的分泌水平。结果与化疗组比较,PESV高剂量组瘤质量明显减轻(P<0.05);低、高剂量组的脾脏指数、高剂量组胸腺指数、腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数、高剂量组CD4+T/CD8+T值及高、低剂量组NK/NKT细胞均显著升高(P<0.05、0.01、0.001)。与化疗组比较,PESV高、低剂量组小鼠血清中IFN-γ水平明显增高,IL-4水平显著降低(P<0.05、0.01)。结论 PESV可逆转5-Fu干预H22荷瘤小鼠导致的免疫抑制作用。

蝎毒多肽提取物联合雷帕霉素增强H_(22)肝癌细胞自噬作用的机制研究

目的观察蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)联合雷帕霉素(Rapamycin)对H22肝癌肿瘤细胞自噬的增强作用并探讨其作用机制。方法 40只昆明小鼠,采用皮下接种H22肝癌肿瘤细胞悬液法建立荷瘤模型,随机分为荷瘤对照组、PESV高剂量组、PESV低剂量组及联合组(PESV高剂量加雷帕霉素),每组10只。PESV高、低剂量组分别予20 mg/kg、10 mg/kg的PESV灌胃,联合组予雷帕霉素(2 mg/kg)及PESV(20 mg/kg)灌胃,连续给药干预14天,隔日测量肿瘤体积,记录肿瘤生长曲线,计算抑瘤率。HE染色观察各组肿瘤组织病理变化。免疫组织化学法检测各组肿瘤组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammal target of rapamycin,m TOR)、UNC51样激酶1(UNC-51-like kinase-1,ULK1)、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,MAP1LC3A)及B淋巴细胞瘤蛋白质-2-相互作用蛋白质-1(Beclin1)蛋白表达水平。结果与荷瘤对照组比较,PESV高、低剂量组及联合组肿瘤生长受到明显抑制(P<0.05);与PESV高、低剂量组比较,联合组瘤重及体积明显减小(P<0.05),PESV高、低剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学法显示,与荷瘤对照组比较,PESV高、低剂量组及联合组m TOR表达水平降低(P<0.05),ULK1、MAP1LC3A及Beclin1蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01)。与PESV高剂量组比较,联合组ULK1、MAP1LC3A及Beclin1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论蝎毒多肽提取物联合化疗可能是通过抑制m TOR的活性,增强自噬相关蛋白ULK1、MAP1LC3A及Beclin1的表达,促进细胞自噬从而抑制肿瘤的发展。

蝎毒多肽提取物对卵巢癌SKOV_3细胞增殖抑制作用的实验研究

目的:观察蝎毒多肽提取物(PESV)对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用及机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)方法检测PESV对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用,流式细胞术观察PESV对细胞周期的影响,免疫组织化学方法(IHC)检测PESV干预后,Survivin,Capase-12及p27蛋白水平表达的变化,Westernblot检测survivin蛋白含量水平。结果:MTT结果显示,PESV在40 mg.L-1以上对卵巢癌SKOV3细胞增殖有抑制作用(浓度为40 mg.L-1时,增殖抑制率为34.66%),且随剂量加大作用增大,呈现剂量效应关系;流式细胞术检测细胞周期显示,PESV干预后,处于S期的细胞减少,处于G0/G1期的细胞增多;免疫组织化学检测显示:PESV干预后,SKOV3细胞p27表达上调,表达Survivin的肿瘤细胞减少,而表达Caspase-12的细胞显著增加。DDP干预后,仅发现Caspase-12的细胞表达增加。Western blot检测结果显示,PESV组survivin蛋白表达量下降。结论:PESV对卵巢癌SKOV3细胞增殖具有抑制作用,其机制是通过抑制细胞增殖周期进行及促进细胞凋亡。

蝎毒多肽提取物对卵巢癌SKOV3细胞HPA与VEGF抑制作用的实验研究

目的:研究蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)对卵巢癌SKOV3细胞HPA与VEGF表达的影响,进一步探讨其抗血管生成的分子机制。方法:卵巢癌SKOV3细胞分为对照组、PESV组,免疫组织化学方法检测各组HPA、VEGF的表达,western-blot方法检测各组HPA在蛋白水平的表达。结果:与对照组相比,PESV组HPA、VEGF表达明显降低(P<0.05),进一步检测发现PESV组HPA在蛋白水平表达亦明显下调(P<0.05)。结论:PESV能够抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长,其机制可能与抑制HPA、VEGF的表达有关。

PESV对荷Lewis肺癌小鼠血流变学的影响的实验研究

目的观察蝎毒多肽提取物(PESV)抑制荷Lewis肺癌C57／B16小鼠肺癌生长及对荷瘤小鼠血流变学的影响。方法将0．2mL Lewis肺癌细胞悬液给C57／B16小鼠尾静脉注射,8d后将小鼠随机分组,治疗组用PESV腹腔注射,对照组用0． 9％生理盐水腹腔注射,隔日1次,共10次。第30d取全血做血流变学分析,并处死小鼠,取小鼠肺脏,进行分析。结果 PESV抑制荷Lewis肺癌小鼠肺转移作用明显(治疗组和对照组肺肿瘤数为3．2±1．2和13．5±5．3,P<0．01),血流变学分析显示,与对照组相比,PESV组血流变学指标均有不同程度的降低,尤其是全血低切表观粘度、全血高切表观粘度、 Casson粘度、Casson屈服应力,其指标明显低于对照组(P<0．01)。结论 PESV对荷Lewis肺癌的C57／B16小鼠肺转移具有抑制作用,可能通过降低血液粘度实现对Lewis肺癌的抑制作用。