蝎毒液肽基因内含子剪接信号分析

从中国蝎ButhusmartensiiKarsch基因组DNA中分离到两个毒液肽基因的内含子。在此基础上 ,通过编辑和分析目前已出版的蝎毒液肽基因内含子序列 ,确定了这类基因内含子剪接信号的共有序列 ,并将其与其它物种进行了比较。

缓步威伪蝎毒液成分及捕食偏好性研究

伪蝎目,隶属于蛛形纲伪蝎目,是蛛形纲中较为古老的一类,形似蝎子,因为没有后腹部和尾针,所以被称为伪蝎,也称拟蝎。主要分布在热带、亚热带、温带等地区。伪蝎生活环境多样,抗逆性强,爬行能力强,可捕食多种小型节肢动物。伪蝎通过撕裂猎物的体壁,将其消化液释放在猎物体内,然后吸取被消化的猎物。当遇到危险或者捕食猎物时,伪蝎自身会分泌毒液,我国对伪蝎的研究起步较晚,研究其毒液和捕食偏好性对于开发储粮害虫的生物防治技术具有重要意义。本文的伪蝎采集于广东省湛江北站国家粮食储备中转库,该种被鉴定为威伪蝎科的缓步威伪蝎Withius piger(Simon,1878),主要分布在我国的广东和台湾一带。本文主要研究缓步威伪蝎对不同状态猎物的捕食优先选择性、对不同物种幼虫的捕食偏好性以及伪蝎的毒液和消化液的成分等。研究的主要结果如下:(1)在伪蝎捕食优先选择性中发现,伪蝎一般优先选择捕食活的赤拟谷盗(Tribolium castaneum Herbst)幼虫,其次是动态的赤拟谷盗死虫,最少捕食的是静态的滤纸。(2)在伪蝎捕食偏好性的研究中,根据伪蝎捕食赤拟谷盗幼虫的数量和捕食锈赤扁谷盗(Cryptolestes ferrugineus Stephens)幼虫的数量计算得出的Cain值小于1,表明对锈赤扁谷盗有明显的捕食偏好性;根据伪蝎捕食杂拟谷盗(Tribolium confusum Jac.du Val)幼虫数量和锯谷盗(Oryzaephilus surinamensis Linne)幼虫的数量计算得出的Cain值小于1,表明伪蝎偏好捕食锯谷盗幼虫;伪蝎在嗜卷书虱(Liposcelis bostrychophia)和嗜虫书虱(L.entomophila)之间捕食量基本相同,计算得出的Cain值也很接近于1,表明伪蝎在两者之间无明显偏好性,但两者的被捕食量都很大。(3)根据反式高效液相色谱,可以确定伪蝎在捕食过程中会分泌毒液和消化液,毒液的成分大约是3种,消化液成分是1种。有关两者的具体成分还需要进一步的研究。通过以上研究,可以确定伪蝎捕食优先选择动态的、新鲜的猎物,且偏好捕食个体较小的猎物。在捕食过程中,先利用触肢中毒液麻痹猎物,然后用螯肢中消化液消化猎物,最后吸食。研究发现伪蝎可以捕食多种储藏物害虫,可作为未来生物防治的重要研究对象。

美科研人员利用蝎子毒液研制抗癌新药

美国科研人员的最新研究表明，用以色列黄色毒蝎毒液中的一种蛋白质制成的合成药剂可以抑制脑癌患者癌细胞的生长，但并不伤害患者的健康细胞。 在这项研究中，洛杉矶锡达斯一赛奈医疗中心科研人员首先切除了18名脑癌患者的恶性神经胶质瘤，然后为他们注射了放射性碘和来自蝎毒的名为TM-601的合成蛋白质混合而成的溶液。研究显示，这种溶液能够抑制患者体内残留的肿瘤细胞，对健康细胞却没有影响，这表明它可以配合化疗来抗癌。

蝎毒多肽提取物对肿瘤生长和细胞免疫功能的影响

目的:观察蝎毒多肽提取物(PESV)对大鼠W256癌肉瘤抑制作用及其对荷瘤大鼠细胞免疫功能的影响。方法:将30只Wistar荷瘤大鼠,随机分为模型组、5-FU治疗组和蝎毒治疗组,连续灌胃给蝎毒多肽提取物7 d,处死,计算各组抑瘤率;流式细胞术(FCM)检测外周血T淋巴细胞亚群变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清中细胞因子INF-γ和IL-4含量。结果:蝎毒治疗组抑瘤率为55.21%。与模型组相比较,蝎毒治疗组荷瘤大鼠外周血中CD4+T细胞比例明显提高,CD8+T细胞明显降低,CD4+T/CD8+T值明显增高,差异均具有统计学意义(P<0.05);血清中细胞因子INF-γ含量明显升高,而IL-4含量显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:蝎毒多肽提取物对W256荷瘤大鼠肿瘤有明显抑制作用,通过提高细胞免疫功能,逆转荷瘤机体Th1/Th2漂移,改变荷瘤机体免疫抑制状态,发挥抗肿瘤作用。

蝎毒多肽对肿瘤细胞的抑制作用研究

目的 :观察蝎毒多肽 (PBMV)对肿瘤细胞生长、细胞周期、P5 3表达和膜电位的影响。方法 :MTT法、集落形成、细胞分裂指数、流式细胞仪和玻璃微电极细胞内记录法。结果 :PBMV对数种肿瘤细胞具有毒性作用 ,细胞生长抑制、集落形成能力和分裂指数降低、多核细胞数减少 ;PBMV使进入S期的CNE - 2Z细胞明显减少 ,G1、S和G2 期细胞的百分比增多 (P <0 0 1) ;PBMV处理后 ,CNE - 2Z细胞P5 3蛋白表达量降低 (P <0 0 1) ,细胞膜负电位明显减小 ,胞膜呈去极化状态。结论 :PBMV可能具有膜毒素的作用 ,通过使CNE - 2Z细胞膜电位降低 ,影响肿瘤细胞的生长增殖。

蝎毒抗癌多肽对肝肿瘤的抑制作用研究

目的 :观察蝎毒抗癌多肽 (APBMV)对肝肿瘤的抑制作用。方法 :噻唑蓝 (MTT)法、台盼蓝拒染法、集落形成以及H2 2 荷瘤小鼠模型。结果 :APBMV导致SMMC - 772 1细胞代谢MTT的能力显著低于对照组 ,APBMV的IC50 为 11 33μg/mL ;APBMV能显著抑制该细胞的生长 ,剂量 -效应关系明显 ,其IC50 分别为 15 87μg/mL、13 0 5 μg/mL和 8 70 μg/mL ;当APBMV的浓度 >8μg/mL时 ,SMMC - 772 1细胞的集落形成率显著低于对照组。APBMV能明显抑制H2 2 带瘤小鼠肿瘤的生长 ,生长抑制率达 37 31% (P <0 0 1) ,H2 2 带瘤小鼠外周血白细胞计数和脾脏指数无明显变化或略高于对照组 ,而 5 -Fu治疗组H2 2 带瘤小鼠白细胞计数和脾脏指数均明显下降(P <0 0 1)。结论 :APBMV是存在于东亚钳蝎蝎毒中的一种有效低毒的抗肿瘤成分 ,能够抑制SMMC - 772 1和H2 2 两种肝癌细胞的生长。

蝎毒多肽提取物对前列腺癌细胞侵袭力影响的体外研究

目的:观察蝎毒多肽提取物(PESV)对前列腺癌DU-145细胞侵袭力的影响,并探讨其可能作用机制。方法:前列腺癌DU-145细胞经PESV处理后,用MTT法检测其生长与增殖的变化;Transwell小室法观察其体外侵袭能力的变化;免疫组织化学方法及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法研究其基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的蛋白水平和mRNA水平表达的变化。结果:经PESV处理后,DU-145细胞的增殖受抑制。体外侵袭实验结果显示,对照组每100倍视野穿过的细胞数平均为(51.29±7.56)个,而5、10和20μg/mLPESV作用24h后,每100倍视野穿过的细胞数分别为(20.43±1.51)、(12.29±2.75)和(5±1.73)个,不同浓度组比较差异有统计学意义,F=38.933,P=0.000。PESV组侵袭细胞数目较对照组明显减少,P值均为0.000;免疫组化及RT-PCR结果显示,经PESV处理后,MMP-9表达下调,TIMP-1表达上调。结论:PESV抑制DU-145细胞侵袭力的作用可能与其下调MMP-9,上调TIMP-1的表达有关。

东亚钳蝎毒抗癌多肽对Eca109 细胞和HeLa 细胞的毒性作用

目的和方法：采用ＭＴＴ 比色法、生长抑制实验、集落形成抑制实验，探讨东亚钳蝎毒抗癌多肽（ａｎｔｉｃａｎｃｅｒｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｆｒｏｍ Ｂｕｔｈｕｓ Ｍａｒｔｅｎｓｉｉ Ｖｅｎｏｍ ，ＡＰＢＭＶ） 对Ｅｃａ １０９ 细胞和ＨｅＬａ 细胞的细胞毒作用。结果：ＡＰＢＭＶ 对Ｅｃａ１０９ 细胞有明显的毒性作用，且呈显著量效关系，处理细胞２４ ｈ 和７２ ｈ 的ＩＣ５０ 分别为０－０２７μｇ·ｍＬ－１ 和０－０２４ μｇ·ｍＬ－１ 。ＡＰＢＭＶ对Ｅｃａ １０９ 细胞的生长抑制作用呈明显的时效和量效关系。处理Ｅｃａ １０９ 细胞２４ ｈ 、４８ ｈ 、７２ ｈ 的ＩＣ５０ 分别为０－０３２μｇ·ｍＬ－１，０－０２８ μｇ·ｍ Ｌ－１ ，０－０２３ μｇ·ｍＬ－１ 。ＡＰＢＭＶ 还显著抑制Ｅｃａ１０９ 细胞的集落形成，并有明显的量效关系，其ＩＣ５０ 值为０－０２３μｇ·ｍＬ－１ 。但ＡＰＢＭＶ 对ＨｅＬａ 细胞的作用不明显。结论： ＡＰＢＭＶ 对肿瘤细胞的杀伤或生长抑制作用具有一定的肿瘤差异性。

蝎毒多肽提取物对白血病NOD／SCID小鼠MMP2、MMP9表达的影响

目的:观察蝎毒多肽提取物(PESV)对白血病NOD/SCID小鼠基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9表达的影响,探讨PESV对白血病细胞外基质降解和髓外浸润的干预机制。方法:首先选取急性白血病患者骨髓单个核细胞注入经过铯-137源照射的NOD/SCID小鼠体内,建立人白血病NOD/SCID小鼠髓外浸润模型;再将实验小鼠随机分组,Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组分别注射不同浓度的PESV,Ⅳ组为模型组注射生理盐水,另设Ⅴ组为空白对照组,观察各组小鼠外周白细胞计数、血涂片及生存状态;观察4周后处死小鼠,用RealtimePCR方法检测小鼠体内MMP2、MMP9表达水平。结果:给药各组小鼠MMP2、MMP9表达水平均明显低于模型组(P<0.05),且各组间表达水平随给药浓度增加而减低。给药各组小鼠外周血白细胞计数、血涂片及生存状态也均优于模型组。结论:PESV可以抑制白血病NOD/SCID小鼠体内MMP2、MMP9过度表达,对白血病细胞外基质降解和髓外浸润具有明显阻抑作用。

蝎毒多肽提取物联合5-氟尿嘧啶对H_(22)肝癌血管生成拟态形成的作用及机制研究

目的观察蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)对小鼠H22肝癌移植瘤血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)形成的抑制作用并探讨其可能的作用机制。方法 60只昆明小鼠,皮下接种H22肝癌细胞悬液建立荷瘤模型,随机分为荷瘤对照组、5-氟尿嘧啶组(5-Fu组)、联合组(PESV+5-Fu),每组20只,连续干预14天,隔日测量肿瘤体积,绘制肿瘤体积增殖曲线,并计算抑瘤率;HE染色法观察肿瘤组织的形态学改变;免疫组织化学法和过碘酸雪夫氏染色(PAS)双标法检测各组肿瘤组织VM密度;免疫组织化学法检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的蛋白表达水平,用LeicaQwin V3图像分析软件进行灰度值半定量分析。结果联合组和5-Fu组H22肝癌移植瘤的生长较荷瘤对照组均受到明显抑制(P<0.05),且联合组和5-Fu组瘤重和肿瘤体积亦存在显著差异(P<0.05);免疫组织化学法和PAS双标法检测显示,联合组VM密度明显低于荷瘤对照组和5-Fu组(P<0.01);与荷瘤对照组比较,联合组HIF-1α和MMP-2的蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。结论 PESV联合5-Fu可抑制小鼠H22肝癌移植瘤VM形成,其机制可能与抑制肿瘤微环境中HIF-1α和MMP-2的表达有关。

蝎毒与丝裂霉素联合应用对人肝癌细胞生长的影响

目的:研究蝎毒(BMK)与丝裂霉素(MMC)联合应用对人肝癌细胞体外生长的抑制作用。方法:应用MTT法检测先予BMK后加MMC和先予MMC后加BMK作用后对人肝癌细胞株BEL7404的生长抑制作用。结果:在细胞培养体系中,在给予MMC之前或以后加入一定剂量的BMK,可加强MMC的抑制作用,和BMK、MMC单纯作用相比,其对癌细胞的毒性作用更加显著(P<0.05)。结论:BMK与抗癌药MMC有协同抑制效应,有可能成为肿癌治疗的辅助药物。

辽宁产东亚钳蝎毒内脏痛镇痛作用的机理研究

目的：研究辽宁产东亚钳蝎毒对内脏痛的影响。方法：用立体定位技术和细胞外记录方法，并做了蝎毒的镇痛作用与吗啡进行比较。结果：以丘脑后核内脏大神经诱发单位放电做为内脏痛的指标，静脉注射蝎毒提取液后，在２０只猫中１６例受到抑制。实验中观察了血压的变化，注射蝎毒提取液后未见血压的降低，反而出现血压一过性升高。结论：蝎毒的镇痛作用时间早，持续时间长，效价强于吗啡。

东亚钳蝎毒素多肽纯化组份BmK AS-1对大鼠背根神经节神经元河豚毒素不敏感型钠通道电流的作用

目的 研究国产东亚钳蝎 ( Buthusmartensi Karsch,Bm K)毒素多肽的纯化单体组份 Bm K AS- 1对大鼠背根神经节 ( DRG)神经元河豚毒素不敏感 ( TTX- R)钠电流的作用。方法 采用膜片箝全细胞记录方法 ,观察 Bm K AS- 1对单个DRG细胞 TTX- R钠电流幅值的影响。结果 Bm K AS- 1剂量依赖地抑制 TTX- R钠电流 ,且高剂量 ( 10 μg/m l) Bm K AS- 1几乎完全抑制 TTX- R钠电流 ,其抑制作用不可逆。结论 Bm K AS- 1显著抑制 TTX- R钠电流 。

东亚钳蝎毒素多肽对蜚蠊神经索动作电位的作用

目的 观察两个从国产特有蝎种东亚钳蝎 (Bm K)分离的毒素多肽 Bm K 、Bm K 对昆虫中枢神经自发放动作电位的影响。方法 采用蜚蠊中枢神经自发放胞外记录方法。结果 Bm K 对蜚蠊中枢神经自发放动作电位有双相作用 ,先抑制后兴奋 ,其抑制作用是可逆的。Bm K 对蜚蠊中枢神经自发放动作电位有抑制作用 ,其抑制作用不是可逆的。结论 提示 Bm K 是神经抑制性成分与兴奋性成分的混合物 ,Bm K 中只有抑制成分。推测

缓步威伪蝎对几种储粮害虫的捕食偏好性研究

缓步威伪蝎(Withius piger Simon,1878)(以下简称:伪蝎)是我国分布主要储粮害虫的一种天敌。研究其毒液和捕食偏好性对于开发储粮害虫的生物防治技术具有重要意义。本文主要研究缓步威伪蝎对不同状态猎物的捕食优先选择性、对不同物种幼虫的捕食偏好性以及伪蝎的毒液和消化液的成分等。研究的主要结果如下:①在伪蝎捕食优先选择性中发现,伪蝎一般优先选择捕食活的赤拟谷盗(Tribolium castaneum Herbst)幼虫,其次是动态的死虫,捕食最少的是静态的滤纸。②在伪蝎捕食偏好性的研究中,根据伪蝎捕食赤拟谷盗幼虫的数量和捕食锈赤扁谷盗(Cryptolestes ferrugineus Stephens)幼虫的数量计算得出的Cain值小于1,表明对锈赤扁谷盗有明显的捕食偏好性;根据伪蝎捕食杂拟谷盗(Tribolium confusum Jac.du Val)幼虫数量和锯谷盗(Oryzaephilus surinamensis Linne)幼虫的数量计算得出的Cain值小于1,表明伪蝎偏好捕食锯谷盗幼虫;伪蝎在嗜卷书虱(Liposcelis bostrychophia)和嗜虫书虱(L.entomophila)之间捕食量基本相同,计算得出的Cain值也很接近于1,表明伪蝎在两者之间无明显偏好性,但两者的被捕食量都很大。通过以上研究,可以确定伪蝎捕食优先选择动态的、新鲜的猎物,且偏好捕食个体较小的猎物。在捕食过程中,先利用触肢中毒液麻痹猎物后用螯肢中消化液消化猎物,然后吸食。研究发现伪蝎可以捕食多种储藏物害虫,是生物防治的重要对象。

SVHRP对Aβ_(1-40)处理后大鼠海马突触形态学改变的抑制作用

目的:探索蝎毒耐热蛋白(SVHRP)对淀粉样β蛋白(Aβ)神经毒性的抑制作用。方法:在大鼠海马内每侧注射Aβ1-40(10μg/2μl)后1d,给予腹腔SVHRP(0.5～2μg/100g),1次/d,连续10次。建模16d后分别进行海马部位的突触体素免疫组织化学分析和突触超微结构计量观察。结果:与对照组比较,Aβ组大鼠突触体素免疫反应强度和电镜下突触密度明显下降(P<0.01),小突触丢失为主,突触终末可见突触小泡大量集聚,突触活性区平均长度增加。SVHRP干预组大鼠实触体素免疫反应强度和电镜下突触密度明显高于Aβ组大鼠(P<0.01),突触终末内未见突触小泡过量集聚,但小突触比例显著增加(P<0.01)。结论:以上结果强有力的提示,Aβ是突触退变的始动因素,SVHRP可抑制Aβ引起的突触退变,有可能成为治疗Alzheimer病(AD)的一种药物。

蝎毒抗菌肽在病原微生物感染中的作用

抗微生物肽(antimicrobial peptides,AMPs)又称抗菌肽,是一类在自然界生物体中广泛存在且具有多种生物活性的小分子多肽。作为生物体固有免疫系统的关键组成部分,抗菌肽具有广谱抗病毒、抗细菌和抗真菌等生物活性,其抗菌机制独特且不易导致病原微生物产生耐药性,可将代替传统抗生素用于病原性疾病的防治。近年来,越来越多的研究表明,蝎毒抗菌肽在病原微生物感染中起着重要作用。因此,本文就蝎毒抗菌肽在病毒、细菌、真菌等病原微生物感染和相关疾病发生发展中的作用机制进行总结,为研发新型、高效且安全的广谱抗微生物药物提供理论依据和思路。

蝎毒多肽提取物联合化疗抑制Lewis肺癌血管生成实验研究

目的:观察蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤血管生成的抑制作用并探讨可能的机制。方法:54只C57BL/6J小鼠皮下接种小鼠肺癌Lewis细胞,7 d后随机分为荷瘤对照组、化疗组和PESV组。以环磷酰胺对荷瘤小鼠进行化疗建立肿瘤化疗模型。按不同用药方法对3组小鼠进行干预,隔日测量肿瘤体积。各组每7 d处死6只小鼠,实验共进行28 d。以免疫组织化学方法检测各组肿瘤组织Ⅷ因子,α-SMA,Dll4及Notch1蛋白表达水平。以Ⅷ因子标记微血管,计算微血管密度(MVD),以α-SMA标记成熟有功能的血管,计算血管成熟度。以RT-PCR方法检测肿瘤组织Dll4,Notch1基因水平表达。结果:PESV抑瘤率为42.21%。PESV组肿瘤体积与化疗组存在明显差异(P<0.05),与荷瘤对照组有显著差异(P<0.01)。PESV组Ⅷ因子表达水平显著低于化疗组(P<0.05)。化疗组肿瘤组织α-SMA表达低于荷瘤对照组(P<0.01),PESV组显著低于化疗组(P<0.01)。化疗组Dll4及Notch1第28天表达低于荷瘤对照组(P<0.05),PESV组肿瘤Dll4及Notch1第21天表达显著低于化疗组(P<0.05)。结论:PESV可对Lewis肿瘤血管生成起抑制作用,其机制可能与抑制肿瘤微环境中血管生成相关因子Dll4及Notch1有关。

蝎毒多肽提取物对小鼠Lewis肺癌生长转移的抑制作用

目的观察蝎毒多肽提取物(PESV)对Lewis肺癌(LLC)生长及转移的影响并探讨其作用机制。方法采用30只C57BL/6J小鼠,右腋下接种Lewis肺癌细胞悬液,建立皮下种植瘤模型,随机分为荷瘤对照组、5-FU治疗组、PESV治疗组,连续灌胃给PESV18d,检测肿瘤体积并计算抑瘤率。另取20只C57BL/6J小鼠,尾静脉注射Lewis肺癌细胞悬液,建立Lewis肺癌实验转移模型,随机分为荷瘤对照组和PESV组,连续灌胃给PESV28d,观察肺部转移灶数目并计算转移抑制率;采用免疫组化法和ELISA法分别检测瘤组织及血清中骨桥蛋白(OPN)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果PESV抑瘤率为46.02%,肺转移抑制率76.19%;与荷瘤对照组相比,瘤组织和血清中OPN和MMP-9的表达明显降低(P<0.05)。结论PESV能抑制小鼠Lewis肺癌的生长与转移,其机制可能与抑制OPN和MMP-9的表达有关。