不同品种大豆培养基对蝙蝠蛾拟青霉菌丝体代谢成分的影响

以不同品种大豆为培养基对蝙蝠蛾拟青霉代谢成分影响进行研究,筛选出最佳大豆品种,为蝙蝠蛾拟青霉标准化生产提供参考。首先对15个不同大豆品种培养基的主成分含量进行测定,同时对各品种大豆培养基培养的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体生物量、菌丝体腺苷含量及腺苷总量进行测定。采用非靶向代谢组学方法对不同品种大豆培养基培养的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中的代谢成分进行研究。结果表明,15个不同品种大豆豆饼中的粗蛋白和粗脂肪含量以及对应培养基培养的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体腺苷含量均有显著性差异(P<0.05),其中9号品种大豆培养基培养的菌丝体腺苷含量最高为(1089.35±25.51)mg/kg,5号的最低为(60.68±9.56)mg/kg,5号、9号和10号培养的菌丝体之间存在显著性差异(P<0.05)。代谢组学研究表明,5号、9号和10号菌丝体代谢成分相对含量差异较大。其中9号菌丝体丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸等氨基酸,水苏糖、半乳糖等糖类,以及三羧酸循环产物2-氧代丁酸、柠檬酸等代谢物相对含量显著高于5号和10号菌丝体。KEGG富集分析表明,9号培养基通过促进天冬氨酸及谷氨酸代谢通路,可增加天冬氨酸和谷氨酸含量,进而增加腺苷含量。培养基中不同品种大豆培养基对蝙蝠蛾拟青霉菌丝体腺苷含量影响显著,其中9号大豆培养基培养菌丝体的腺苷含量最高。本研究为筛选培养蝙蝠蛾拟青霉最佳大豆培养基提供了参考。

UVC紫外诱变对蝙蝠蛾拟青霉的影响及综合评价

【目的】为了得到生物量(干重、鲜重、菌落生长速率)、代谢物质(多糖、粗蛋白、腺苷、甘露醇)综合含量更高的蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)菌株。【方法】将稀释至10-3浓度的YS-01菌株的孢子悬浮液置于UVC紫外灯(30 W)下30 cm处照射40 s进行诱变处理,初步筛选得到20株菌落生长较快、生物量较多、色泽较好、菌落形状较圆的诱变菌株,依次命名为YS-A、YS-B、YS-C、YS-D、YS-E、YS-F、YS-G、YS-H、YS-I、YS-J、YS-K、YS-L、YS-M、YS-N、YS-O、YS-P、YS-Q、YS-R、YS-S、YS-T。采用灰色关联度分析法对21株菌株进行综合评价。【结果】菌丝体干重、鲜重、生长速率和腺苷最优菌株均为YS-A(P<0.05);多糖产量最高菌株为YS-C(P<0.05);腺苷、粗蛋白、甘露醇产量最高菌株均为YS-B(P<0.05)。生物量产量最高菌株为YS-A,代谢物产量和综合产量最高菌株均为YS-B。YS-A菌株10代内干重、鲜重、菌丝体生长速率遗传稳定性良好;YS-C菌株10代内多糖产量遗传稳定性良好。YS-B菌株10代内菌丝体生长速率和甘露醇产量遗传稳定性良好;干重、鲜重和腺苷9代内遗传较为稳定;多糖和粗蛋白8代内遗传较为稳定。【结论】YS-A菌株可用于以菌丝体干重、鲜重、生长速率、腺苷和生物量产量为目的的菌株;YS-C可用于以多糖产量为目的的菌株;YS-B可用于以腺苷、粗蛋白、甘露醇、代谢物产量和综合产量为目的的菌株。

蝙蝠蛾拟青霉发酵小粒咖啡前后营养和安全指标对比

利用蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali JY6⁃6对云南小粒咖啡粉进行发酵,检测并对比了发酵前后一般营养成分、矿质元素、氨基酸、以及咖啡特有指标绿原酸、咖啡因、葫芦巴碱等成分的含量变化,也对发酵前后样品中的重金属、农药残留、真菌毒素、致病菌等食品安全指标进行了检测和对比.检测结果表明,发酵后产品中蛋白质、粗脂肪、维生素C的含量比发酵前分别提高了17.21%,69.86%,576.11%,而粗纤维、水分、总糖的含量则分别下降了44.49%,55.00%,41.55%.发酵后矿质元素磷、锌、铁、镁、钙、铜的含量比发酵前分别提升了206.748%,152.000%,278.378%,67.089%,95.789%,22.124%,而锰、钠、钾、硒的含量则出现较明显的降低,分别比发酵前降低了23.645%,79.149%,41.757%,88.182%.所检测的18种氨基酸中,苏氨酸、脯氨酸、丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、胱氨酸这5种氨基酸的含量比发酵前有所增加,缬氨酸含量没有发生变化,其余12种氨基酸的含量与发酵前相比则出现了不同程度的降低.在特有指标的检测中,发酵后咖啡因和葫芦巴碱的含量比发酵前升高了,分别提升了9.684%和8.720%.而发酵后绿原酸的含量则较发酵前下降了19.343%.发酵后的样品各项安全指标参数均符合国家安全标准.上述研究结果可为进一步开发小粒咖啡新工艺和新产品提供参考.

蝙蝠蛾拟青霉的抑菌活性与菌丝体发酵化学组分的研究

目的检测从云南省德钦县白马雪山采集的冬虫夏草分离到的内生真菌蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali Chen et Dai JY 8-8的抑菌活性,了解其菌丝体发酵物的部分化学组分.方法选择26种病原指示菌,采用纸片扩散法对蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali Chen et Dai JY 8-8进行抑菌活性试验.采用检测方法 NY/T 1653和GB 5009.5分别检测蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali Chen et Dai JY 8-8菌丝体发酵物干品中8种矿质元素和总氮的含量.结果蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali Chen et Dai JY 8-8对病原细菌、植物病原真菌和皮肤致病真菌共19种病原微生物有较为明显的抑制作用.菌丝体发酵物中含有8种矿质元素,总氮平均含量是3.19%.结论蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali Chen et Dai JY 8-8中存在抗菌活性物质,菌丝体发酵物中化学组分全面,为进一步开发保健药物提供了资源.

蝙蝠蛾拟青霉与冬虫夏草关系的分子系统学研究

以5月和6月两个不同时段采集的分别产于青海省化隆县和四川省康定县的冬虫夏草(Cordycepssinensis)新鲜子实体为材料,采用分子生物学方法,以rDNA-ITS序列为分子标记,对蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyceshepiali)与冬虫夏草之间的关系进行了探讨。以真菌通用引物ITS1/ITS4分别对蝙蝠蛾拟青霉及冬虫夏草子座和僵虫基因组DNA进行PCR扩增,获得的片段克隆到pMD18-TVector上进行测序,结果表明,随机挑取的46个克隆与某些已在GenBank中注册的中国被毛孢(Hirsutella sinensis)或冬虫夏草的rDNA-ITS序列的一致性均在99%以上,但与蝙蝠蛾拟青霉的rDNA-ITS序列的一致性约为72%。根据蝙蝠蛾拟青霉的rDNA-ITS序列设计了两对特异引物,分别以不同产地及不同生长时期共4个批次的冬虫夏草子座和僵虫基因组DNA为模板,进行PCR及巢式PCR扩增,均得到了相应片段,该片段与蝙蝠蛾拟青霉的rDNA-ITS序列具有100%的一致性。在GenBank中注册号为AB067740的另一个标明为冬虫夏草的rDNA-ITS序列与注册号为AJ309353的中国被毛孢的rDNA-ITS序列一致性仅为87.3%,但根据AB067740序列设计特异引物,也从冬虫夏草基因组DNA中扩增到其相应序列。研究结果表明,在天然冬虫夏草中除了中国被毛孢之外,还普遍存在着蝙蝠蛾拟青霉等内寄生菌。

蝙蝠蛾拟青霉新种的研究

从云南采集具有冬虫夏草子座的虫草蝙蝠蛾幼虫体(僵虫)上分离得到蝙蝠蛾拟青霉新种(Paecilomyces hepiali Chen et Dai.sp.nov.)并进行了培养和形态学研究。蝙蝠蛾拟青霉的形态非常接近棒束拟青霉,但两者的分生孢子形态和量度不同,而且该种寄生在蝙蝠蛾科昆虫的幼虫上,故定名为蝙蝠蛾拟青霉。本文报道该菌形态特征。

高速逆流色谱法从蝙蝠蛾拟青霉中快速分离制备麦角甾醇纯品

建立了用高速逆流色谱从蝙蝠蛾拟青霉中高效、快速分离制备高纯度麦角甾醇的方法。将蝙蝠蛾拟青霉的乙酸乙酯提取物直接进行高速逆流色谱分离,考察了不同溶剂系统的分离效果。结果表明,最佳的溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比为6∶1.7∶6∶0.3),以上相为固定相,下相为流动相,转速为850r/min,流速为2mL/min,检测波长为280nm。制备所得的麦角甾醇经紫外光谱(UV)和高分辨质谱(HRMS)鉴定及与标准品对照定性;纯度经高效液相色谱(HPLC)分析为99.2%(峰面积归一化法)。该方法制备麦角甾醇简便、快速,所得产物的纯度高,适合于麦角甾醇对照品的制备。

蝙蝠蛾拟青霉菌丝体研究现状

蝙蝠蛾拟青霉菌丝体是从冬虫夏草样品中分离获得并经过培养和形态学的研究鉴定命名的,是冬虫夏草的常用代用品之一。本文从其概述、培养方法、活性成分及其药理作用和产品开发几个方面对其研究现状进行了整理总结,指出研究中存在的问题,并对研究前景进行展望。

蝙蝠蛾拟青霉及蛹虫草与野生冬虫夏草活性比较

目的冬虫夏草是我国珍稀药用资源,具有多种药理活性。但是天然虫草产量少需求大,使其成为濒危资源。通过研究与其具有相似的化学成分和药理作用的蝙蝠蛾拟青霉和蛹虫草,可以对其进行保护。方法利用野生冬虫夏草、蝙蝠蛾拟青霉和蛹虫草的有效成分含量测定,抗疲劳活性,免疫增强活性及体外降血糖活性研究进行比较。结果 3种虫草均含有多糖,腺苷和虫草酸;此外,蝙蝠蛾拟青霉和蛹虫草中的多糖及虫草酸含量均与冬虫夏草相当;冬虫夏草具有显著的降血糖活性、抗疲劳活性和免疫增强活性;蝙蝠蛾拟青霉具有很好的降血糖活性和抗疲劳活性;蛹虫草具有显著的免疫增强活性和抗疲劳活性;且三者对小鼠的自主活动次数均无显著影响,表明三者均对小鼠无刺激性。结论蝙蝠蛾拟青霉和蛹虫草与野生冬虫夏草的药理作用相似,具有很大的发展空间。

蝙蝠蛾拟青霉Cs-4对阿霉素肾病大鼠的保护作用

目的研究蝙蝠蛾拟青霉Cs-4对阿霉素肾病大鼠的保护作用。方法雄性SD大鼠24只,随机分为正常组、模型组、蝙蝠蛾拟青霉Cs-4组、贝那普利组。采用左侧肾脏切除加尾静脉重复注射阿霉素的方法建立阿霉素肾病模型。术后1周蝙蝠蛾拟青霉Cs-4组给予蝙蝠蛾拟青霉Cs-4 500 mg/(kg·d)灌胃,贝那普利组予贝那普利4 mg/(kg·d)灌胃。用药4、8周后观察各组大鼠24 h尿蛋白定量、血生化(BUN、Scr),8周后取肾组织于光镜、电镜下观察肾脏病理变化,应用免疫组化方法测定肾组织骨调素(OPN)、纤维连接蛋白(FN)、胶原Ⅳ(COL-Ⅳ)的表达。结果蝙蝠蛾拟青霉Cs-4能减少阿霉素肾病大鼠尿蛋白,延缓BUN、Scr的上升,纠正脂代谢紊乱,与模型组相比差异显著(P<0.05);减轻肾小球系膜基质比(P<0.05),减少OPN、FN、COL-IV的表达(P<0.05)。结论蝙蝠蛾拟青霉Cs-4可减少蛋白尿的排泄,纠正脂代谢紊乱,改善肾功能,抑制ECM的过度积聚,从而减轻肾脏病理损害,发挥其肾脏保护作用。

蝙蝠蛾拟青霉菌丝体增强免疫力功能动物试验研究

目的：研究蝙蝠蛾拟青霉菌丝体对小鼠免疫功能的影响。方法：分别以300，600，1200 mg/kg BW剂量蝙蝠蛾拟青霉菌 丝体粉给小鼠连续灌胃30？35 d后，检测各项免疫指标。结果：蝙蝠蛾拟青霉菌丝体能明显刺激小鼠的脾淋巴细胞增值、转化，促进小鼠迟发型变态反应，提高小鼠抗体生成细胞数和血清溶血素水平，促进小鼠单核一巨噬细胞碳廓清作用；但对小鼠生长、脏体重比值、腹腔巨噬细胞的吞噬能力及NK细胞活性无明显影响。结论：蝙蝠蛾拟青霉菌丝体具有增强小鼠免疫力的功能。

蝙蝠蛾拟青霉菌丝体发酵的研究

用20t发酵罐培养蝙蝠蛾拟青霉。菌粉收率达2．5％，D-甘露醇含量大于8％，腺苷含量大于0．2％．对发酵过程中pH、总糖、还原糖、得率、折光等的变化规律进行了考察．确定以发酵液pH的升高和还原糖含量作为综合判断发酵终点的依据．

蝙蝠蛾拟青霉质量标准及免疫活性研究

目的:建立蝙蝠蛾拟青霉菌100 L发酵菌丝体质量标准,并验证其安全性和免疫调节活性.方法:采用高效液相色谱等方法,在测定菌丝体产量和腺苷含量的基础上,测定其水分、一般杂质、酸不溶性杂质和重金属含量.此外,进行了小鼠免疫增强实验.结果:菌丝体产量不少于20.80 g/L,菌丝体中腺苷含量不少于0.27%,水分含量不超过6.71%,总灰分含量不超过1.26%,酸不溶性灰分含量不超过0.15%,重金属含量少于国家标准计入质量标准正文.小鼠免疫增强实验显示,发酵菌丝体显著提高小鼠迟发型超敏反应,并对IL-10、IL-12、IL-12R、IFN-α等炎症相关因子水平具有上调作用.结论:初步建立了蝙蝠蛾拟青霉菌100 L发酵菌丝体质量标准,并证实其在小白鼠体内的安全性和免疫调节活性.

蝙蝠蛾幼虫拟青霉病菌的分离与鉴定及致病力研究

从长有粉状病原物的蝙蝠蛾幼虫虫体上分离、鉴定了一种真菌,并用分离的菌进行了致病力研究。结果表明,通过侵染后幼虫表现出所分离死虫虫体的病害症状,确定该菌为拟青霉病的病原物,经鉴定为粉拟青霉Paecilomyces farinosus;不同温度下致病力表明,该病在10～25℃、感病后7 d死亡率达50%以上,感病后21 d达96%以上,20℃条件下最适于该病的侵染发病。

蝙蝠蛾拟青霉Cs-4菌粉辅助治疗糖尿病肾病的临床观察

目的:观察血糖血压控制前提下,加用不同剂量蝙蝠蛾拟青霉Cs-4菌粉对糖尿病肾病患者24 h尿蛋白定量及肌酐清除率的影响。方法:将本院2010年9月—2011年6月门诊和住院符合入组标准的60例糖尿病肾病患者随机分成3组,常规治疗组采用原方案治疗,低剂量组在原方案基础上加服蝙蝠蛾拟青霉Cs-4菌粉2.97 g/d,高剂量组加服蝙蝠蛾拟青霉Cs-4菌粉5.94 g/d,连续用药12周,观察治疗后患者血压、糖化血红蛋白、血脂4项、肾功能、24 h尿蛋白定量及肌酐清除率的变化。结果:共有52例患者完成观察。治疗3月后,低剂量组和2组与常规治疗组比较,舒张压均明显降低(85.08±4.38)与(80.86±4.87)P<0.05,(85.08±4.38)与(79.40±3.91)P<0.05,24 h尿蛋白有所下降,但无统计学差异(P>0.05),分层分析后发现,尿蛋白<1g/24h时,高剂量组尿蛋白的降低率明显大于常规治疗组(6.0±26.9)与(38.8±22.9)P<0.05,低剂量组患者的尿蛋白下降率与常规治疗组相比下降,但无统计学意义(P>0.05),3g/24h≥尿蛋白≥1g/24h时,3组间尿蛋白下降率无显著性差异(P>0.05)。结论:加用蝙蝠蛾拟青霉Cs-4菌粉能在常规治疗基础上进一步降低糖尿病肾病患者舒张压和蛋白尿排出,但仍需前瞻性,随机,双盲,安慰剂对照的病例对照研究来确认。

蝙蝠蛾拟青霉发酵全液喷雾干燥工艺优化研究

本研究以蝙蝠蛾拟青霉发酵全液为原料,以喷雾干粉的综合品质和出粉速率为筛选指标,通过单因素实验比较了发酵液全液总固形物含量、进料速率、进风温度和通风量对喷雾干燥效果的影响。进一步通过正交实验优化得到了蝙蝠蛾拟青霉发酵全液喷雾干燥的最佳工艺参数为:发酵全液总固形物含量38.72 g/L,进料速度600 m L/h,进风温度180℃,进风量30 m^3/h,此时蝙蝠蛾拟青霉发酵全液喷雾干燥出粉速率达到17.89 g/h,出粉率为76.3%,所得喷雾干粉为粉末状,淡黄色,气味香甜,无结块,分散性能良好。

中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉小鼠免疫功能调节作用的比较

目的观察中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉对小鼠免疫功能的影响。方法分别给予中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉后,测定观察对小鼠碳粒廓清功能、迟发性变态反应、溶血素抗体、淋巴细胞增殖和NK细胞活性等的影响。结果 3.0 g/kg中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉可显著提高小鼠吞噬指数和半数溶血值(P<0.01)、显著提高T、B淋巴细胞增殖能力(P<0.01,P<0.05)、显著提高NK细胞活性(P<0.05),0.5～1.5 g/kg中国被毛孢都能显著抑制小鼠耳廓肿胀(P<0.01,P<0.05),同时还能抑制脾脏和胸腺增大(P<0.01,P<0.05)。结论中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉均具有免疫调节作用,而中国被毛孢免疫抑制及增强天然免疫系统作用要优于蝙蝠蛾拟青霉,而对适应性免疫系统增强作用蝙蝠蛾拟青霉优于中国被毛孢。

蝙蝠蛾拟青霉菌丝体抗小鼠力竭疲劳作用

目的评价发酵培育的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体(PHM)抗小鼠力竭疲劳作用及其作用机制。方法采用轮式疲劳仪强迫小鼠每日30 min连续18 d进行攀跑运动,攀跑速度从10.2 m·min-1逐渐递增至12.6 m·min-1,并于第19天(d 19)强迫小鼠攀跑60 min以建立力竭疲劳模型。每日训练前40 min分别ig给予PHM 140,280及560 mg·kg-1和莫达非尼13 mg·kg-1。分别于d5,d9,d13,d17和d19记录小鼠的电击次数,每日记录小鼠的体质量。检测肌糖原(MG)、肝糖原(LG)、血清尿素氮(SUN)、血清乳酸(SLA)和血清肌酸激酶(CK)的含量。结果模型组小鼠在d19力竭训练中的电击次数显著高于给药组,且与正常对照组小鼠相比,其MG及LG含量显著降低,而SUN及CK水平显著升高(P<0.05)。PHM280及560 mg·kg-1组小鼠在力竭训练中的电击次数分别为133±55和115±41次,均显著低于模型组(240±89)次(P<0.01)。PHM 560 mg·kg-1组小鼠的MG和LG分别为1.28±0.24和(40.9±10.2)mg·g-1,均显著高于模型组〔MG:(0.91±0.26)mg·g-1,LG:(22.2±2.9)mg·g-1;P<0.01〕,而SUN,SLA和CK分别为(5.8±1.3)mmol·L-1,(5.7±1.7)mmol·L-1和(0.6±0.2)kU·L-1,均显著低于模型组〔SUN:(7.5±2.1)mmol·L-1,SLA:(7.1±1.8)mmol·L-1,CK:(0.8±0.3)kU·L-1;P<0.05〕。与模型组小鼠相比,莫达非尼组小鼠的电击次数显著降低(P<0.01),但MG,LG,SUN,SLA和CK水平无显著性差异。结论 PHM可能通过增加能源物质的储备,增强机体有氧代谢能力,并减少代谢产物的积累,以维持机体内环境稳定及正常代谢功能,从而起到抗力竭疲劳的作用。

蝙蝠蛾拟青霉菌丝体最适发酵条件研究

试验研究了冬虫夏草(Cordyceps sinensis)蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali Chen et Dai)菌丝体的发酵条件,其适宜接种量为2.5％～5.0％(v/v),最佳菌龄为3d,适宜的初始pH为5.0～7.5,发酵周期5d,发酵过程中对通气量的要求较高。以20m^3发酵罐培养,菌丝体收率为2.5％,其D-甘露醇含量8.3％,腺苷含量0.24％。

蝙蝠蛾拟青霉抗艾氏癌作用机理研究

拟青霉5g/kg连续给药7d(ip)能增强Ehrlich Solid Cancer(ESC)小鼠NK细胞活性。动物接种癌细胞后第9、13、17、20天,拟青霉给药组NK细胞活性分别比对照组提高8.7％、7.2％、12.5％、9.8％。 拟青霉在0～2.5mg/ml范围内,浓度依赖性地抑制~3H-TdR、~3H-UR、~3H-Leu掺入到EhrlichAseites Cancer(EAC)细胞DNA、RNA和蛋白质分子中。拟青霉2.5mg/ml作用EAC细胞1h后,洗去拟青霉,~3H标记物掺入量增多,说明拟青霉干扰EAC细胞核酸合成代谢。