蝙蝠蛾被毛孢菌丝体通过激活TLR2、TLR4和Dectin-1诱导Th1型免疫反应

目的:研究蝙蝠蛾被毛孢菌丝体(MHCS)对抗原呈递细胞树突状细胞(Dendritic cells,DCs)成熟和功能的调节作用。方法:利用流式细胞术、实时荧光定量PCR、Western blot和混合淋巴细胞培养等实验方法,检测了MHCS对DCs成熟和功能相关表面分子、细胞因子表达以及Toll样受体(TLR)2、TLR4和Dectin-1相关信号转导通路蛋白活性的调节作用。结果:MHCS显著上调DCs表面分子CD11c、MHCⅠ和MHCⅡ、辅助刺激分子CD40、CD80和CD86以及模式识别受体TLR2、TLR4和Dectin-1的表达;促进Th1型细胞因子IL-12产生,抑制Th2型细胞因子IL-10、IL-13和TGF-β1产生;诱导TAK1和IRF3磷酸化活性增加。MHCS也显著刺激幼稚型Th细胞增殖,诱导幼稚型Th细胞向Th1方向分化。利用中和性抗体,分别阻断DCs细胞TLR2、TLR4或Dectin-1活性,可部分抑制MHCS诱导的DCs成熟。结论:MHCS能促进DCs成熟,诱导Th1型免疫反应。MHCS的这些作用与其激活模式识别受体TLR2、TLR4或Dectin-1有关。

蝙蝠蛾被毛孢菌丝体改善小鼠睡眠的作用

目的:了解以人工发酵工艺生产的蝙蝠蛾被毛孢菌丝体对小鼠的改善睡眠作用。方法:小鼠每天经口灌胃给予蝙蝠蛾被毛孢菌丝体粉(42,83,250mg.kg-1.d-1),观察直接睡眠作用,连续给予受试物30d后进行延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、巴比妥钠阈下剂量催眠实验和巴比妥钠睡眠潜伏期实验。结果:蝙蝠蛾被毛孢菌丝体剂量达250mg.kg-1.d-1可显著增强巴比妥钠阈下剂量的催眠作用(P<0.01),各剂量组(42,83,250mg.kg-1.d-1)小鼠由巴比妥钠诱导的睡眠潜伏期也明显缩短(P<0.05,P<0.01),但未见蝙蝠蛾被毛孢菌丝体的直接睡眠作用和对戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间的影响。结论:蝙蝠蛾被毛孢菌丝体对小鼠具有一定的改善睡眠作用。

HPLC-ELSD法测定蝙蝠蛾被毛孢菌丝体粉末胶囊中甘露醇的含量

目的 建立一种快速简便的蝙蝠蛾被毛孢菌丝体粉末胶囊中甘露醇的含量测定方法.方法 样品用水超声振荡提取过柱后再过膜进样,采用Hypersil NH2柱（4.6mm×300mm,5μm）为色谱柱,以乙腈：水=85：15为流动相,流速为1.0mL·min-1,蒸发光散射检测器测定虫草中甘露醇的含量.结果 甘露醇在0.250～1.500mg·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9992,n=5）,回收率为99.2%,RSD为3.51%（n=3）.结论 该方法选择性高、重现性好,可用于保健食品中甘露醇的含量测定.

高效液相色谱-串联质谱测定蝙蝠蛾被毛孢菌丝体中的褪黑素含量

目的建立测定蝙蝠蛾被毛孢菌丝体中褪黑素含量的高效液相色谱-串联质谱方法。方法样品中褪黑素以甲醇为提取溶剂,以超声波为提取方式进行提取。采用色谱柱Thermo Beta Basic-18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水(60∶40),流速0.6 ml/min,柱温40℃。用串联离子阱质谱在电喷雾电离正离子(ESI+)-二级质谱(MS/MS)模式进行质谱测定。结果方法的线性范围为10～200μg/kg,基质加标工作曲线线性方程为y=10204.8x-8575.85,相关系数r=0.999 2。方法的检出限为0.5μg/kg,定量限为2.0μg/kg,平均回收率为81.92%,相对标准偏差<10%。结论本方法选择性高、快速,可以应用于蝙蝠蛾被毛孢菌丝体粉末中褪黑素检测,也可为其他复杂体系中褪黑素的测定提供依据。

蝙蝠蛾被毛孢菌丝体激活自噬、改善高脂饮食诱导的小鼠代谢综合征

探讨蝙蝠蛾被毛孢菌丝体(Mycelium of Hirsutella hepiali Chen et Shen,MHCS)对代谢综合征的影响及作用机制。首先采用游离脂肪酸与MHCS处理肝细胞,检测自噬相关的LC3、p62水平与脂滴堆积。其次高脂喂养小鼠建立代谢综合征模型,将50周龄小鼠随机分为:对照组、模型组、给药组。干预至80周龄后每组随机抽取15只小鼠,测量口服葡萄糖耐量、空腹血糖、胰岛素、胰岛素样生长因子(IGF-1)水平,计算胰岛素抵抗指数(IRI);检测肝脏组织中LC3、p62与炎症相关p-NF-κB p65、NF-κB p65、IL-6与CXCL-8水平;观察肝脏内空泡面积、脂滴堆积与纤维化病理改变;其余小鼠继续饲养至110周龄,统计死亡率。结果表明,MHCS显著上调游离脂肪酸处理的肝细胞自噬水平,给药组小鼠口服葡萄糖耐量、胰岛素抵抗显著改善,自噬水平显著增加,炎症显著缓解,肝脏病理改善且生存率显著增高。提示MHCS可能通过激活肝脏自噬,改善小鼠代谢综合征。

蝙蝠蛾被毛孢菌丝体的活性成分分析及对小鼠免疫功能的调节作用

目的:探讨蝙蝠蛾被毛孢菌丝体对小鼠的免疫调节作用,并分析其可能的功效成分。方法:采用高效液相色谱法测定菌丝体中的腺苷含量;分别经口连续给予小鼠0.08、0.17、0.50 g/kg bw·d剂量的30 d后,进行各项免疫指标的测定。结果:蝙蝠蛾被毛孢菌丝体中腺苷含量达275 mg/100 g;在免疫调节方面,0.50 g/kg bw·d剂量组加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值、耳壳增重、小鼠溶血空斑数、NK细胞活性均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);0.17 g/kg bw·d和0.50 g/kg bw·d组小鼠血清半数溶血值(HC50)显著高于对照组(P<0.05)。结论:蝙蝠蛾被毛孢菌丝体具有调节小鼠免疫功能作用,此作用与其主要功效成分腺苷有关。

蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉对小鼠免疫调节作用的研究

目的探讨蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉对小鼠的免疫调节作用。方法分别以200、400、800mg/kg BW剂量的蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉经口给予小鼠连续灌胃30d后,进行各项免疫指标的测定。结果蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉剂量组与对照组比较能促进小鼠脾淋巴细胞增值、转化作用(P<0.05),促进小鼠的迟发型变态反应(P<0.05),增强小鼠的单核-腹腔巨噬细胞吞噬能力(P<0.05),促进小鼠的抗体生成细胞增加及提高小鼠的血清溶血素水平(P<0.01和P<0.05),提高小鼠的NK细胞活性(P<0.01和P<0.05)。结论蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉具有增强免疫力的功能。