蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉对小鼠免疫调节作用的研究

目的探讨蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉对小鼠的免疫调节作用。方法分别以200、400、800mg/kg BW剂量的蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉经口给予小鼠连续灌胃30d后,进行各项免疫指标的测定。结果蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉剂量组与对照组比较能促进小鼠脾淋巴细胞增值、转化作用(P<0.05),促进小鼠的迟发型变态反应(P<0.05),增强小鼠的单核-腹腔巨噬细胞吞噬能力(P<0.05),促进小鼠的抗体生成细胞增加及提高小鼠的血清溶血素水平(P<0.01和P<0.05),提高小鼠的NK细胞活性(P<0.01和P<0.05)。结论蝙蝠蛾被毛孢虫草菌丝体粉具有增强免疫力的功能。

HPLC-ELSD法测定蝙蝠蛾被毛孢菌丝体粉末胶囊中甘露醇的含量

目的 建立一种快速简便的蝙蝠蛾被毛孢菌丝体粉末胶囊中甘露醇的含量测定方法.方法 样品用水超声振荡提取过柱后再过膜进样,采用Hypersil NH2柱（4.6mm×300mm,5μm）为色谱柱,以乙腈：水=85：15为流动相,流速为1.0mL·min-1,蒸发光散射检测器测定虫草中甘露醇的含量.结果 甘露醇在0.250～1.500mg·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9992,n=5）,回收率为99.2%,RSD为3.51%（n=3）.结论 该方法选择性高、重现性好,可用于保健食品中甘露醇的含量测定.

蝙蝠蛾被毛孢菌丝体通过激活TLR2、TLR4和Dectin-1诱导Th1型免疫反应

目的:研究蝙蝠蛾被毛孢菌丝体(MHCS)对抗原呈递细胞树突状细胞(Dendritic cells,DCs)成熟和功能的调节作用。方法:利用流式细胞术、实时荧光定量PCR、Western blot和混合淋巴细胞培养等实验方法,检测了MHCS对DCs成熟和功能相关表面分子、细胞因子表达以及Toll样受体(TLR)2、TLR4和Dectin-1相关信号转导通路蛋白活性的调节作用。结果:MHCS显著上调DCs表面分子CD11c、MHCⅠ和MHCⅡ、辅助刺激分子CD40、CD80和CD86以及模式识别受体TLR2、TLR4和Dectin-1的表达;促进Th1型细胞因子IL-12产生,抑制Th2型细胞因子IL-10、IL-13和TGF-β1产生;诱导TAK1和IRF3磷酸化活性增加。MHCS也显著刺激幼稚型Th细胞增殖,诱导幼稚型Th细胞向Th1方向分化。利用中和性抗体,分别阻断DCs细胞TLR2、TLR4或Dectin-1活性,可部分抑制MHCS诱导的DCs成熟。结论:MHCS能促进DCs成熟,诱导Th1型免疫反应。MHCS的这些作用与其激活模式识别受体TLR2、TLR4或Dectin-1有关。

蝙蝠蛾被毛孢菌丝体改善小鼠睡眠的作用

目的:了解以人工发酵工艺生产的蝙蝠蛾被毛孢菌丝体对小鼠的改善睡眠作用。方法:小鼠每天经口灌胃给予蝙蝠蛾被毛孢菌丝体粉(42,83,250mg.kg-1.d-1),观察直接睡眠作用,连续给予受试物30d后进行延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、巴比妥钠阈下剂量催眠实验和巴比妥钠睡眠潜伏期实验。结果:蝙蝠蛾被毛孢菌丝体剂量达250mg.kg-1.d-1可显著增强巴比妥钠阈下剂量的催眠作用(P<0.01),各剂量组(42,83,250mg.kg-1.d-1)小鼠由巴比妥钠诱导的睡眠潜伏期也明显缩短(P<0.05,P<0.01),但未见蝙蝠蛾被毛孢菌丝体的直接睡眠作用和对戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间的影响。结论:蝙蝠蛾被毛孢菌丝体对小鼠具有一定的改善睡眠作用。

蝙蝠蛾被毛孢菌丝体发酵液口服制剂的研发

以青海地区蝙蝠蛾被毛孢菌丝体发酵液(HSFL)为研究对象,采用浓缩、澄清、调配、灭菌等工艺将HSFL配制成口服液制剂,并对其抗氧化性及稳定性进行考察。结果表明,HSFL制剂的最佳工艺条件为60℃浓缩,4℃冷沉,双层滤纸抽滤,再4℃冷沉,2%的复配甜味剂(蔗糖∶纽甜=20∶1(g∶g)),p H 4.8,辐照灭菌(^(60)Co、10 kGy)。HSFL制剂对DPPH·的清除率可达96.32%,总还原力为0.76,具有一定的抗氧化活性,且通过稳定性试验确定在棕色玻璃瓶密封包装和阴凉、干燥处贮存条件下,HSFL原液和制剂的保质期为2年以上。

蝙蝠蛾被毛孢菌丝粉中腺苷的HPLC-PDA测定

目的建立蝙蝠蛾被毛孢菌丝粉中腺苷含量的高效液相色谱(HPLC)初步定性,PDA进一步定性。方法以UltimateTM AQ-C18色谱柱(4.6×250mm,5μm),甲醇:0.01mol.L-1磷酸二氢钾溶液为流动相(10:90,V/V),检测波长260nm。结果线性回归方程和相关系数为:腺苷在1.0～100.0μg.mL-1范围内线性良好,腺苷回收率为93.6%,相对标准偏差分别为3.8%。结论本方法简便,重现性好,灵敏度高,定性准确,定量精确。

蝙蝠蛾被毛孢发酵专用菌株筛选

为筛选适用于液体发酵的高活性菌株。通过观察5个菌株菌落形态,比较5个菌株菌丝体的收率及腺苷、甘露醇、总氨基酸和粗多糖含量。结果发现:T_(1)菌株菌丝体收率和甘露醇含量最高,T_(5)菌株腺苷、总氨基酸和粗多糖含量最高。灰色关联度法分析表明,T_(5)菌株综合表现最优,可作为发酵优选菌株。

冬虫夏草与人工虫草菌丝体无机元素含量的比较

[目的 ]分析比较冬虫夏草及人工虫草菌丝体无机元素含量。 [方法 ]PS 6电感耦合等离子体发射光谱仪测定无机元素含量。 [结果 ]冬虫夏草、蝙蝠蛾拟青霉、虫草头孢菌、蝙蝠蛾被孢霉 4种样品中共测得 2 8种无机元素。 4种样品中P、K、Mg、Fe、Ca的含量均较高 ( >180mg/kg) ;As、Cd、Sb、Hg的含量均较低 ( <1.9mg/kg) ,且在蝙蝠蛾拟青霉和虫草头孢菌中未检出Hg元素。 [结论

虫草发酵菌粉的活性成分分析

[目的]比较虫草头孢和蝙蝠蛾被孢霉2种发酵菌粉中活性组分的差异,为虫草发酵菌种的开发提供数据参考。[方法]采用重量法测定多糖含量,采用离子色谱法检测粗多糖的单糖组成,采用高效液相色谱法测定核苷类物质含量,采用Folin-Ciocalteu法测定总多酚含量,采用香草醛-高氯酸法测定总三萜含量。[结果]2种菌粉中粗多糖含量在7%左右,均由6种单糖构成;发酵菌粉中均检测到含量较高的胞苷、鸟苷和腺苷等核苷类化合物;2种虫草发酵菌粉中总多酚的含量约5 mg/g,三萜物质含量约8 mg/g。[结论]虫草头孢和蝙蝠蛾被孢霉2种发酵菌粉在多糖、核苷、多酚和三萜类物质的含量上无显著差异,均具有较高的药用活性和良好的开发前景。

蝙蝠蛾被毛孢菌丝粉的亚急性毒性研究

目的了解蝙蝠蛾被毛孢菌丝粉的亚急性毒性。方法将经过检疫适应后的SD大鼠按亚急性毒性分为3个剂量组[0.83 g/(kg·BW)、1.67 g/(kg·BW)、3.30 g/(kg·BW)]及阴性对照组(基础饲料)。试验期间每周称重并计算进食量,连续给药30天后采血作血细胞计数、分类及血液生化指标检测,处死并解剖动物取肝、肾、脾、睾丸称重计算脏体比,并对肝、肾、脾、胃肠、睾丸、卵巢作组织病理学检查。结果各剂量组动物体重(F=0.5,2.2)及体重增重(F=0.6,2.3)、进食量(F=0.6,0.1)、食物利用率(F=0.4,1.6)与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。部分试验组血红蛋白(F=2.0)、嗜碱性粒细胞(F=4.8)、中性粒细胞(F=0.7)、淋巴细胞(F=0.5)、单核细胞(F=0.1)、谷草转氨酶(F=0.6)、尿素(F=1.3)、肌酐(F=0.6)、总胆固醇(F=2.6)、血糖(F=13.2,24.9)与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但均在实验室历史对照值范围内,故认为无生物学意义。结论根据试验结果,提示蝙蝠蛾被毛孢菌丝粉对大鼠是安全的,对机体无潜在的亚急性毒性作用。

高效液相色谱-串联质谱测定蝙蝠蛾被毛孢菌丝体中的褪黑素含量

目的建立测定蝙蝠蛾被毛孢菌丝体中褪黑素含量的高效液相色谱-串联质谱方法。方法样品中褪黑素以甲醇为提取溶剂,以超声波为提取方式进行提取。采用色谱柱Thermo Beta Basic-18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水(60∶40),流速0.6 ml/min,柱温40℃。用串联离子阱质谱在电喷雾电离正离子(ESI+)-二级质谱(MS/MS)模式进行质谱测定。结果方法的线性范围为10～200μg/kg,基质加标工作曲线线性方程为y=10204.8x-8575.85,相关系数r=0.999 2。方法的检出限为0.5μg/kg,定量限为2.0μg/kg,平均回收率为81.92%,相对标准偏差<10%。结论本方法选择性高、快速,可以应用于蝙蝠蛾被毛孢菌丝体粉末中褪黑素检测,也可为其他复杂体系中褪黑素的测定提供依据。

蝙蝠蛾被毛孢菌丝体的活性成分分析及对小鼠免疫功能的调节作用

目的:探讨蝙蝠蛾被毛孢菌丝体对小鼠的免疫调节作用,并分析其可能的功效成分。方法:采用高效液相色谱法测定菌丝体中的腺苷含量;分别经口连续给予小鼠0.08、0.17、0.50 g/kg bw·d剂量的30 d后,进行各项免疫指标的测定。结果:蝙蝠蛾被毛孢菌丝体中腺苷含量达275 mg/100 g;在免疫调节方面,0.50 g/kg bw·d剂量组加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值、耳壳增重、小鼠溶血空斑数、NK细胞活性均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);0.17 g/kg bw·d和0.50 g/kg bw·d组小鼠血清半数溶血值(HC50)显著高于对照组(P<0.05)。结论:蝙蝠蛾被毛孢菌丝体具有调节小鼠免疫功能作用,此作用与其主要功效成分腺苷有关。

蝙蝠蛾被毛孢菌丝体激活自噬、改善高脂饮食诱导的小鼠代谢综合征

探讨蝙蝠蛾被毛孢菌丝体(Mycelium of Hirsutella hepiali Chen et Shen,MHCS)对代谢综合征的影响及作用机制。首先采用游离脂肪酸与MHCS处理肝细胞,检测自噬相关的LC3、p62水平与脂滴堆积。其次高脂喂养小鼠建立代谢综合征模型,将50周龄小鼠随机分为:对照组、模型组、给药组。干预至80周龄后每组随机抽取15只小鼠,测量口服葡萄糖耐量、空腹血糖、胰岛素、胰岛素样生长因子(IGF-1)水平,计算胰岛素抵抗指数(IRI);检测肝脏组织中LC3、p62与炎症相关p-NF-κB p65、NF-κB p65、IL-6与CXCL-8水平;观察肝脏内空泡面积、脂滴堆积与纤维化病理改变;其余小鼠继续饲养至110周龄,统计死亡率。结果表明,MHCS显著上调游离脂肪酸处理的肝细胞自噬水平,给药组小鼠口服葡萄糖耐量、胰岛素抵抗显著改善,自噬水平显著增加,炎症显著缓解,肝脏病理改善且生存率显著增高。提示MHCS可能通过激活肝脏自噬,改善小鼠代谢综合征。

蝙蝠蛾被毛孢液态发酵青稞工艺优化

为探索影响蝙蝠蛾被毛孢液态发酵青稞的工艺因素,并优化发酵工艺,以青稞为原料,进行液体发酵,以发酵后菌丝体生物量及蛋白含量为优化指标,采用单因素试验和响应面试验对发酵时间和温度、接种量、转速、装液量进行优化。优化的发酵工艺为发酵温度22℃、发酵时间6 d、接种量3%、转速135 r/min,装液量为发酵容器体积的40%。在此发酵条件下,菌丝体生物量为0.0178±0.0008 g/mL,发酵液中蛋白含量为2.02%±0.16%,菌丝体生物量和蛋白含量较未发酵前分别提高1.63倍和2.15倍(P<0.05)。青稞可作为蝙蝠蛾被毛孢液态发酵的培养剂,发酵后菌丝体的生物量及蛋白含量较高,可有效实现对青稞营养物质的转化。试验结果为青稞生物转化技术及新产品开发奠定基础。

4种虫草真菌生长适宜碳、氮源的研究

通过平皿筛选的方法,比较分析了4种虫草真菌在不同碳、氮源培养基上的生长面积和生长情况,从而筛选出它们生长适宜的碳、氮源。结果表明:蛹虫草菌种生长的最适碳源为大米粉,最适氮源为脱脂奶粉和蚕蛹粉;蝙蝠蛾拟青霉菌种生长的最适碳源为大米粉和葡萄糖,最适氮源为花生粉、脱脂奶粉和蛋白胨;虫草被孢霉菌种生长的最适碳源为葡萄糖,最适氮源为蛋白胨;中国被毛孢菌种生长的最适碳源为葡萄糖和蔗糖,最适氮源为蛋白胨、酵母膏和脱脂奶粉。

虫草菌粉中2种菌丝体的化学成分和药理活性研究进展

虫草菌粉是从新鲜冬虫夏草中分离得到菌丝体经发酵培养而得,近年来因其显著的药理活性而受到广泛关注。虫草菌粉中中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉2种菌丝体的化学成分和药理活性具有明显差异,通过对二者的研究进展进行较为全面客观的文献整理分析,以期为虫草菌粉的进一步研究和开发利用提供参考。

三种替代冬虫夏草发酵菌粉的营养成分和活性成分的比较研究

为评价三种替代冬虫夏草发酵菌粉的应用价值,对虫草头孢菌粉、蝙蝠蛾拟青霉菌粉及虫草被孢菌粉的主要活性成分和营养成分进行了比较分析.结果表明:蝙蝠蛾拟青霉菌粉总蛋白和粗纤维含量最高,虫草被孢菌粉碳水化合物含量最高;虫草头孢菌粉胞苷含量最高,3个发酵菌粉中均未检出虫草素和肌苷;虫草被孢菌粉多糖中葡萄糖含量明显低于其他菌粉,虫草头孢菌粉多糖分子量最高,虫草被孢菌粉和蝙蝠蛾拟青霉菌粉多糖的分子量差异不大.与文献报道的天然冬虫夏草的活性成分和营养成分进行比较,发现三种替代冬虫夏草发酵菌粉在腺苷、胞苷含量上均高于天然冬虫夏草.这些结果揭示三种替代冬虫夏草发酵菌粉在功效上有差异,并且三种菌粉在某些功效上要高于天然冬虫夏草.

高效液相色谱与液相色谱-质谱分析冬虫夏草相关产品之麦角固醇与其衍生物

采用HPLC与LC-MS分析西藏冬虫夏草(Cordyceps sinensis,Cs)子实体、Cs分离的无性世代中国被毛孢(Hirsutella sinensis)菌丝体(Hsm)RS6-3、市售蛹虫草(Cordyceps militaris,Cm)和蝙蝠蛾拟青霉(Paecilo-myces hepiali,Cs-4)中所含的麦角固醇与其衍生物。结果表明:Cs子实体子座的麦角固醇比菌核高约3倍,含量约为0.92 g/L,且该子座含2种H1-A衍生物;本实验室所分离的Hsm RS6-3含有5种H1-A衍生物;但Cs子实体菌核、Cm和Cs-4均不含有H1-A衍生物。本研究为虫草相关产品的质量检测提供了技术支持。

冬虫夏草性状鉴别与含量标准存在的问题

目的:提供和完善冬虫夏草的性状鉴别特征与资料,探讨含量标准存在的问题。方法:系统查阅相关文献,结合市场情况,全面论述冬虫夏草的同属真菌入药、无性型、寄主基原鉴定、药材的性状鉴别、质量标准等方面的问题。结果:只有冬虫夏草菌Cordyceps sienesis是《中国药典》法定的正品,其他同属真菌均系伪劣品;冬虫夏草药材的性状鉴别要特别注意虫与"草"的长度比和粗细比,以及"草"从虫的什么部位长出与是否分枝等;冬虫夏草及发酵产物质量标准仅根据腺苷(虫草素)、甘露醇(虫草酸)和多糖等非特异性成分的定性定量结果就声称代用冬虫夏草是欠妥当的。结论:应加强特异性化学成分质量标准的研究,并加强有关冬虫夏草和各种发酵产物作为食品、保健品和药品的质量监管。