一种可抑制人类免疫缺陷病毒1型与CD4结合的小分子

除了最近证实的融合抑制物enfuvirtide(T-20)外，所有已确认的人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)药物都以病毒的两个酶作为作用靶：反转录酶和蛋白酶。尽管抗反转录病毒联合疗法已取得令人瞩目的成就，但由于病毒抗药性的出现和由于药物强烈的不良反应和复杂的服药方案造成患者不配合现象，

HIV gp41七肽重复区五螺旋蛋白的高效表达及对病毒融合的抑制

人工构建的五螺旋蛋白(5-helix)能抑制人类免疫缺陷综合症病毒(HIV)介导的膜融合过程中发卡三聚体的形成,从而抑制病毒感染靶细胞。但5-helix基因在原核细胞中直接表达时易形成包涵体,复性困难,给研究带来不便。本研究探讨了将蛋白结构模拟用于寻找合适的表达载体的方式:通过同源建模,模拟了5-helix在pGEX-6P-1载体及pET44b载体上的融合蛋白形成的最有可能的2种构象。通过对比发现其在pET44b载体中与NusA的融合蛋白的溶剂化能远大于其在pGEX-6P-1中与GST融合蛋白的溶剂化能,且酶切位点位于蛋白表面。应用PCR将5-helix基因从pGEX-6P-1-5H克隆出来,鉴定正确后连接到pET44b载体上,构建成重组载体pET44b-PSP-5Helix。将重组载体转化入大肠杆菌BL21(DE3),于不同温度诱导表达。用镍柱及GST柱纯化蛋白,SDS-PAGE证实成功得到了目的蛋白。用纯化蛋白验证抑制HIV假病毒感染GHOST-CXCR4的活性。结果显示:与NusA融合的5-helix蛋白能够实现高效的可溶表达,且酶切容易;纯化蛋白抑制HIV假病毒感染GHOST-CXCR4的半数抑制浓度为(22.77±5.64)nmol/L,为进一步探讨其在HIV-1病毒感染中的应用奠定了基础。