融合液浓度梯度融合法不同融合条件对延边黄牛体细胞克隆效率的影响

采用延边黄牛耳皮肤成纤维细胞作供核细胞,0.28 mol/L蔗糖融合液,融合液浓度梯度融合法对重组卵母细胞进行融合操作,探讨不同融合电场强度、脉冲次数、脉冲时程对延边黄牛体细胞克隆胚胎融合率及重组胚体外发育率的影响。结果表明,适宜延边黄牛体细胞克隆、融合液浓度梯度融合法的融合电场强度为1200 v/cm;融合脉冲次数为2次;融合脉冲时程为40μs。

融合液浓度梯度融合法提高延边黄牛体细胞克隆效率

延边黄牛耳皮肤成纤维细胞作供核细胞,采用0.28mol/L蔗糖、甘露醇融合液。比较融合液浓度梯度融合法与普通融合法对延边黄牛体细胞克隆效率的影响。实验1,探讨0.28mol/L蔗糖融合液对体细胞克隆胚胎融合率及重组胚体外发育的影响。结果表明:融合液浓度梯度融合法的融合率(92.98%vs88.55%)、卵裂率(91.07%vs80.96%)、囊胚发育率(40.06%vs30.19%)均显著高于普通融合法。实验2,探讨0.28mol/L甘露醇融合液对体细胞克隆胚胎融合率及重组胚体外发育的影响。结果表明:融合液浓度梯度融合法的融合率(91.22%vs84.89%)、卵裂率(88.02%vs80.42%)、囊胚发育率(39.51%vs29.19%)均显著高于普通融合法。结果表明无论蔗糖还是甘露醇融合液,融合液浓度梯度融合法均能有效提高延边黄牛体细胞克隆效率。

用精子载体法向鲤鱼导入基因在日本首次成功

东京水产大学教授隆岛史夫等将精子用作载体,成功地开发了将基因导入鱼卵的技术,于4月在东京召开的日本水产学会上发表了研究结果。鱼类的精子载体的基因导入,在匈牙利Agricultural Biotechnology Center用鲤鱼和非洲鲶鱼、已获成功。在日本成功还是首次。一次能处理大量精子是精子载体法的优点。隆岛等首先将含有SV40启动子(结合了作为标记的CAT基因)的质粒溶解于淡水鱼用的林格氏液中(浓度2μg/ml)。接着,在电解强度3.5kv/cm,脉冲幅500μsec条件下。

分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗菌株的筛选

目的筛选获得分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗(BCG)菌株。方法采用多聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌毒株H37Rv中扩增出热休克蛋白60(Hsp60)基因及其信号肽序列αss,将测序正确的hsp60和αss基因分别克隆入大肠杆菌(E.coli.)BCG穿梭载体pOLYG中,构建分枝杆菌分泌表达载体pDE22,按相应的酶切位点将ag85b和esat6按照不同的连接方式联合克隆入pDE22载体,分别命名为pDE22Ag85B ESAT6和pDE22ESAT6Ag85B,将纯化的重组质粒电穿入BCG,经潮霉素抗性筛选和PCR的方法鉴定出含目的基因的重组BCG阳性克隆。收集重组BCG的培养上清液,经浓缩和透析后,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和固相化蛋白质免疫学测定(Western blot法)分析。结果两株重组BCG菌株的培养上清液分泌表达相对分子质量约37000的蛋白,且分别可与抗Ag85B和抗ESAT6蛋白免疫小鼠的血清有相应的结合条带。结论分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组BCG菌株构建成功,有望为结核病的预防提供有效的疫苗。

临床医学

S854.43 20022481高效液相色谱法测定洛克沙胂预混剂含量方法的研究/杨永嘉（中国兽医药品监察所 100081）,王国忠,王雷//中国兽药杂志.-2001,35（6）.-23～26采用高效液相色谱法测定洛克沙胂预混剂的含量,色谱柱为 C18（250×4.6mm,5μm）,流动相为0.05mol/L 磷酸二氢钾-甲醇-醋酸（90:9:1）,检测波长254nm,流速1ml/min,进样量20μl。

空气入水射流的非均相多尺寸组法数值研究

该文将欧拉-欧拉两流体模型和非均相多尺寸组方法耦合,对空气垂直向上喷入水中的射流进行了数值研究。由于气相以气泡的形式存在,模型将气相和液相分别作为分散相和连续相,分散气相进一步分为两个速度组,每个速度组又分为三个尺寸组,每个速度组具有一组动量方程,每个尺寸组具有一个连续方程;采用融合破裂模型以考虑不同尺寸组间气泡的相互转换;采用气泡拽力模型、升力模型和湍流分散力模型来考虑气液两相间的相互作用。计算结果与文献中已有的实验结果对比表明,在该文考察的模型参数范围内,气泡破裂系数取1,气泡融合系数取4时,非均相多尺寸组方法可以准确预测含气率在轴向和径向的分布,并可以给出合理的气泡大小分布。

人Leptin基因的cDNA的克隆和表达

克隆人Leptin基因的cDNA并获取表达的Leptin蛋白，为进一步研究新的Leptin相关蛋白打下基础。以人基因组DNA为模板，用引物悬挂延伸PCR法，克隆与6个组氨酸(6×His)密码子相连的人Leptin基因的cDNA，并将其克隆到体外表达载体pIVEX2．3MCS上，通过体外快速翻译系统(Roche公司的RTS500环状模板试剂盒和TRS500ProteoMaster仪器)在体外表达了带有6×His的Leptin融合蛋白。经SDS—PAGE及Westem blot方法鉴定，融合蛋白大小正确，有172个氨基酸，分子量为19．46kD．具有特异的抗原性，且主要以可溶形式存在于反应液上清中。