枸杞子、淫羊藿对衰老-年轻2BS融合细胞DNA合成的影响

目的 :研究枸杞子、淫羊藿水提液对衰老 -年轻 2BS融合细胞DNA合成的影响。方法 :以人胚肺二倍体成纤维细胞国内标准株 2BS为衰老模型 ,用细胞脱核和细胞融合技术 ,观察枸杞子、淫羊藿对衰老-年轻 2BS融合细胞的DNA合成的影响。结果 :2BS细胞分别在含 0 0 2 5 (V/V)枸杞子、淫羊藿水提液的DMEM培养液中 ,可连续培养至 6 1 0± 2 9、5 6 0± 2 6代 ,对照组为 4 9 0± 2 6代 (P <0 0 1) ;衰老的 2BS细胞分别用枸杞子、淫羊藿水提液处理 2h后 ,进行细胞脱核并与年轻 2BS细胞融合 ,其〔3H〕TdR掺入百分率明显高于对照组 (P <0 0 1)。结论 :枸杞子、淫羊藿均能促进衰老 -年轻 2BS融合细胞的DNA的合成速率 ,延长 2BS细胞寿命。

肺癌DC融合细胞诱导的抗肿瘤免疫应答

目的研究肺癌 DC融合细胞 FL D- A11体内外诱导免疫应答的能力。方法用 MTT法测定 FL D- A11细胞诱导淋巴细胞增殖的能力 ;EL ISA法检测其诱导淋巴细胞分泌 IL- 2的水平 ;L DH释放法测定 FL D- A11细胞免疫后小鼠脾淋巴细胞的特异性 CTL 活性。结果 FL D- A11细胞能有效刺激淋巴细胞的增殖反应 ( SC∶ RC=1∶ 5 0时 ,SI=2 .3 8) ,诱导淋巴细胞分泌 IL- 2。 FL D- A11细胞免疫后 ,小鼠的胸腺和脾脏重量均高于对照组 ( P<0 .0 5 ) ,脾淋巴细胞对 L ewis肺癌细胞的杀伤活性显著高于对照组。结论 FL D- A11细胞具有诱导初次抗肿瘤免疫应答的能力 ,不仅能在体外诱导淋巴细胞的增殖和 IL- 2的分泌 ,而且体内免疫接种也能引起小鼠免疫器官的增生反应 ,产生针对 L ewis肺癌的特异性 CTL 杀伤作用。

人外周血树突状细胞-乳腺癌细胞融合细胞

目的:探讨树突状细胞-肿瘤细胞融合细胞的形态特性,为研制融合细胞疫苗提供形态学依据。方法:将免疫磁珠法分离的人外周血树突状细胞与人乳腺癌细胞株MCF7融合,瑞氏-姬姆萨染色观察;扫描电镜观察树突状细胞、融合细胞的表面超微结构。结果:树突状细胞与MCF7细胞接10:1比例融合后,一个乳腺癌细胞可以与一个或多个树突状细胞相融合;扫描电镜下可见分离的树突状细胞表面有突起,树突状细胞/MCF7融合细胞具两种亲代细胞的表面超微结构特点。结论:树突状细胞与人乳腺癌细胞融合后无明显的形态改变。

胃癌-树突状细胞融合细胞疫苗制备及其形态学观察

目的利用细胞融合技术,获取胃癌细胞-树突状细胞融合细胞疫苗,并对其形态学特点进行观察,为基于树突状细胞(DC)的融合疫苗研究及应用提供实验基础。方法利用聚乙二醇(PEG)诱导胃癌细胞、DC融合,HAT、HT筛选培养系统对融合细胞进行筛选培养,获取纯净融合疫苗;利用光镜、电镜对其形态学特点进行观察。结果胃癌-DC细胞融合后,体积明显增大,悬浮生长,细胞表面树枝状突起较亲代DC明显短小、稀少。结论胃癌-DC融合细胞保持类似于亲代DC的悬浮生长特性,但数量减少、体积明显增大,具备与两种亲代细胞均不相同的形态学特性。

人细胞融合肝癌疫苗的制备及其融合细胞百分率的检测

手术取病人新鲜肝癌组织及部分脾脏 ,分离纯化、激活B细胞 ,应用PEG融合肝癌细胞与激活B细胞 ,经培养灭活制得肿瘤疫苗。同时测定了融合肝癌疫苗的融合率、冻存后复苏活细胞百分率。结果显示 ,3例融合细胞的融合率分别为 6 6 84 %、74 4 3%、76 5 5 % ,融合细胞经DMSO和甘油冻存后复苏活细胞百分率分别为 95 %、97%。研究表明 ,人细胞融合肝癌疫苗具有很高的融合率和冻存后复苏活细胞百分率 ,便于制备及储存 ,适合临床应用。

小鼠肺癌B_(7)融合细胞的制备及生物学性质

目的 改善肿瘤细胞共刺激分子B7的表达。方法 将ALA970 2 肺癌细胞与活化的B淋巴细胞用聚乙二醇进行细胞融合 ,经ELISA及免疫细胞化学筛选后 ,用S P免疫细胞化学染色观察融合细胞的肺癌抗原及B7分子的表达 ,并观察融合细胞的体内外生长情况。结果 经筛选获得一株融合细胞FLB2C。融合细胞既表达肺癌抗原 ,又表达B7分子。体外培养显示其贴壁性较ALA970 2 肺癌细胞减弱 ,生长明显变缓 ,细胞倍增时间延长 ,不能在软琼脂中形成集落。接种融合细胞亦不能在小鼠体内成瘤 ,而接种ALA970 2 细胞的 10只小鼠中 6例腋下出现肿瘤生长 ,3例还发生肺转移。结论 通过细胞融合方法可以有效改善肿瘤细胞的B7分子表达 ,从而提高肿瘤细胞的抗原性。融合细胞FLB2C的致瘤性明显减弱 ,为制备更有效的肺癌疫苗奠定了基础。

人树突状融合细胞诱导体外抗脑胶质瘤活性的研究

背景与目的:树突状融合细胞疫苗作为一种有效的抗原提呈细胞在癌症治疗上很有前景,但应用于人脑胶质瘤治疗的尝试仍不多,在国内仍是空白。本实验使用人脑胶质瘤细胞 T98G 和胶质瘤患者的外周血PBMC 诱导的 DC 融合制备 DC-肿瘤融合细胞(FC),并研究其体外诱导的抗胶质瘤活性。方法:采用 PEG 法进行细胞融合,采用混合淋巴细胞反应和乳酸脱氢酶法(LDH)释放法来分别评价 FC 刺激 T 淋巴细胞增殖能力和FC 致敏的 T 淋巴细胞对 T98G 的杀伤能力。结果:建立了 DC-人脑胶质瘤融合细胞(FC)的制备方法,经过1.5Gy 照射的 FC 致敏患者外周血 T 细胞,对 T98G 的杀伤明显高于仅用单纯 DC 或 T98G致敏的 T 细胞(P<0.01),而且杀伤 T98G 的能力随 E/T 比率的增加而由20%上升到88%,但对 MCF-7的杀伤仅在10%左右,显著低于对 T98G 的杀伤(P<0.01)。同时致敏的 T 细胞在负载 T98G 裂解物(1yaate)的自体 DC 的刺激下引起的增殖高于仅用单纯 DC 或 T98G 致敏的 T 细胞,具有显著性差异(P<0.05);对于已经致敏的 T 淋巴细胞,负载lysate 的自体 DC 所引起的 T 细胞增殖明显高于自体 DC 或 lysate 的作用(P<0.01)。结论:本实验所制备的 FC经过1.5 Gy 照射后可以有效致敏患者外周血 T 细胞.并在负载抗原的 DC 的刺激下可以在体外扩增。致敏的患者外周血 T 淋巴细胞是可以进行特异性杀伤的 CTL,杀伤能力随效靶比增高而上升。本实验结果为将 FC 应用于人脑胶质瘤临床治疗提供了实验依据。

肾综合征出血热患者尿融合细胞内病毒G区基因及其蛋白表达

目的：研究肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）患者尿融合细胞内汉坦病毒（ＨＶ）Ｇ区靶基因（膜蛋白基因）ＲＮＡ、ｍＲＮＡ的定位和ＨＶ膜蛋白在尿融合细胞中的表达定位。方法：设计针对病毒Ｍ片段Ｇ基因区的探针，地高辛素标记，运用核酸原位杂交技术检测靶基因ＲＮＡ 和ｍＲＮＡ在尿融合细胞中的定位。同时用ＳＡＢＣ免疫组化法检测病毒膜蛋白在尿融合细胞中的表达定位。结果：病毒靶ＲＮＡ和ｍＲＮＡ检出于细胞核和细胞浆。２１例中，１４例阳性，阳性率６６．６％（１４／２１），其中核型９例，核浆混合型５例。病毒膜蛋白检测，２１例中１６例阳性，阳性率７６．２％（１６／２１），病毒膜蛋白表达见于细胞膜。两者阳性率相比较差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论： ＨＦＲＳ病毒膜蛋白的表达与病毒编码该蛋白的Ｇ基因区ＲＮＡ、ｍＲＮＡ均可在患者尿融合细胞内检出。

诱导多能干细胞/原代心肌细胞的融合细胞表现出双向重建

目的体外构建诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSc)与原代心肌细胞的融合细胞,初步探讨融合细胞体外生物学特性。方法绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转染八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor-4,Oct-4)小鼠来源的iPSc与小鼠乳鼠心肌细胞通过聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG-4000)诱导融合,建立细胞融合模型。动态观察融合细胞生长形态变化情况,融合细胞碱性磷酸酶(alkali phosphatase,AKP)染色,免疫荧光鉴定融合细胞表达干细胞与心肌细胞特异性蛋白情况,以及染色体核型分析,确定融合细胞是否发生细胞核的融合及程度。结果聚乙二醇(PEG-4000)能够介导iPSc与心肌细胞融合,融合后第4天开始出现成集落状生长的细胞团;第2、3、4、5天的iPSc和融合细胞AKP阳性率分别为(0.935±0.039)、(0.939±0.022)、(0.954±0.017)、(0.944±0.027)和(0.761±0.044)、(0.740±0.023)、(0.681±0.034)、(0.748±0.045),同时间点的iPSc和融合细胞AKP阳性率比较有明显差异(P<0.05);融合细胞初期主要表现为iPSc的特点,Oct-4表达阳性,cTnT表达阴性,融合7 d后,逐渐表现出两种细胞的特点,Oct-4与cTnT均表达阳性;超过80%的杂交细胞染色体数目在76～80条之间。结论二倍体iPSc与二倍体心肌细胞的融合细胞,具有两亲本细胞的特性,表现出双向重建。

融合细胞株Eahy926与亲本人肺腺癌细胞株A549差异表达蛋白的蛋白质组学分析

融合细胞株Eahy926是人肺腺癌细胞株A549和人脐静脉内皮细胞杂交而成的永生化细胞株,具有血管内皮细胞的特性,已广泛用于内皮细胞相关研究.本研究应用蛋白质组学技术分析融合细胞株Eahy926与亲本人肺腺癌细胞株A549的蛋白质差异表达,探讨融合细胞生物学特性变化及其机制.对Eahy926和亲本A549的细胞总蛋白质进行双向凝胶电泳,在PDQuest软件辅助下找出差异表达蛋白质点,经肽质量指纹图谱(peptide mass fingerprinting,PMF)和串级质谱(tandem massspectrometry,TMS)分析,SWISS-PROT数据库检索,成功鉴定出28个差异蛋白,如CATB、CK8、CK18、annexin A2、GRP78、HSP90、HSP60、vimentin等一些与分子伴侣、氧化应激、能量代谢、信号转导等有关,并与肿瘤细胞分裂增殖、分化凋亡、侵袭转移、免疫逃逸以及肿瘤血管生长密切关联的蛋白质.研究发现,融合细胞株Eahy926和人肺腺癌细胞株A549的蛋白质组表达谱存在明显差异,这将有助于今后进一步探讨肿瘤细胞与内皮细胞的相互作用机制及其融合细胞的特性,筛选肿瘤增殖和转移相关蛋白质及分子标志物,亦可为肿瘤的抗血管生成治疗提供新思路.

树突状细胞-肝癌细胞株HepG2融合细胞来源的exosome抗肝癌效应的实验研究

目的:以肝癌(HCC)患者树突状细胞(DC)与肝癌细胞HepG2之融合细胞为来源制备exosome,检测其体外诱导同源T细胞产生特异性抗HepG2的免疫效应。方法:以HCC患者外周血单个核细胞(PBMC)为来源,应用重组人粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、白细胞介素-4(rhlL-4)体外诱导培养DC;聚乙二醇融合DC与肝癌细胞HepG2,免疫磁珠分选DC-HepG2融合细胞,以纯化的融合细胞上清为来源,超滤及超高速密度梯度离心法制备exosome;透射电镜观察exosome形态,流式细胞术、ELISA等方法检测exo-some蛋白分子表达;以融合细胞来源的exosome直接刺激效应淋巴细胞,MTT法检测效应淋巴细胞对靶细胞HepG2的杀伤活性;ELISA法检测该效应淋巴细胞分泌IFN-γ水平。结果:DC-HepG2融合细胞可分泌ex-osome,该exosome同时含有DC的特征分子CD86(94.6%)和肝癌细胞HepG2的AFP抗原(40.7%),ELISA法亦证实exosome提取物中含有AFP蛋白;DC-HepG2来源的exosome活化的淋巴细胞(Exo-L)对靶细胞HepG2的杀伤率明显高于单纯淋巴细胞组(L)(P<0.05),Exo-L组对HepG2的杀伤率亦显著高于对其他两种靶细胞(肝癌细胞SMMC7721、白血病细胞K562)的杀伤率(P<0.05)。靶细胞为HepG2时,Exo-L组IFN-γ分泌量明显高于L组(P<0.05)。结论:以肝癌患者DC与肝癌细胞HepG2之融合细胞为来源可制备获得exosome瘤苗,该瘤苗无须DC存在,可直接激活自体淋巴细胞,产生HepG2抗原特异CTL,显示了比传统制备的exosome更强的功能,有望成为HCC免疫治疗的有效途径。

DC与胶质瘤融合细胞的制备及其抗肿瘤活性

目的制备树突状细胞(dendritic cells,DC)与胶质瘤融合细胞,探讨其特异性抗肿瘤活性。方法诱导正常人外周血来源DC,在PEG作用下将其与胶质瘤细胞BT325融合,通过双荧光标记法检测融合率、MTT法测定CTL活性。结果融合细胞在培养体系中占较高比例;DC/胶质瘤融合细胞激活的CTLs对胶质瘤的杀伤作用显著高于DC与胶质瘤细胞联合培养DC组(P<0.05)及其他对照组,而且杀伤活性随着效靶比的增加而增加。结论DC与胶质瘤细胞融合是一种更为有效的以DC为基础的抗肿瘤策略。

辐照剂量对肿瘤细胞活性及肿瘤融合细胞疫苗效果的影响

目的探讨制备融合细胞疫苗过程中,肿瘤细胞的最佳辐照剂量,并研究不同辐照剂量下融合细胞疫苗的抗肿瘤效果。方法利用RS2000生物学X射线辐照仪产生不同剂量的X射线,以鼠肝癌细胞系BNL 1ME a.7R.1(MEAR)细胞为材料,研究辐照剂量与肿瘤细胞增殖活性之间的关系;采用流式细胞术检测不同辐照剂量下融合细胞疫苗的抗肿瘤效果。结果高剂量辐照所致的肿瘤细胞增殖活性比低剂量辐照所致的肿瘤细胞增殖活性低,肿瘤融合细胞疫苗抗肿瘤效果具有辐照剂量依赖性。结论制备融合细胞疫苗时,对肿瘤细胞进行辐照应适当考虑辐照剂量对细胞增殖活性的影响,以得到最佳辐照效果,从而确保融合细胞疫苗的安全高效。

细胞融合只能产生三种类型的融合细胞吗

高三生物(选修本)“细胞工程简介”一节中，介绍了植物体细胞杂交技术和动物细胞融合技术，在课后习题中问道：“植物细胞杂交中能形成多少种融合细胞?”答案是：“三种，分别是AA型、BB型、AB型。”此时，总会有一部分学生提出疑问：“有没有三个甚至三个以上的细胞融合在一起的情况?”

诱导多能性干细胞与心肌细胞的融合细胞遗传表型特征研究

目的体外构建诱导多能性干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs)与心肌细胞(cardiomyocytes,CMs)的融合细胞,探讨其细胞遗传学以及定向分化等生物学特点。方法 i PSCs与原代心肌细胞通过聚乙二醇(PEG-4000)诱导融合,检测融合细胞染色体数分布情况,融合细胞碱性磷酸酶染色,鉴定亲本细胞特异性基因和蛋白在融合细胞中的表达情况,以及当融合细胞失去亲本心肌细胞表型时,其向心肌细胞分化的能力。结果融合细胞表现为i PSCs样的特点;融合细胞主要表现为四倍体或者近似四倍体的核型(超过75%的融合细胞染色体数目在76~80条之间);碱性磷酸酶的阳性率低于同时间点的i PSCs;干细胞特异性基因Oct-4和Nanog的表达量在融合细胞与i PSCs中没有差异,而心肌细胞特异性基因α-MHC和β-MHC在融合细胞中的表达量明显低于心肌细胞;Oct-4蛋白在不同代数的融合细胞中均有表达,而随着时间的延长,c Tn T蛋白逐渐呈阴性表达;失去亲本心肌细胞表型的融合细胞能够向心肌细胞分化,且分化率高于同时间点的i PSCs。结论 i PSCs与原代心肌细胞的融合细胞,初期表现出双向重建,P5代后完全表现出干细胞显型,并且能向心肌细胞分化。

融合细胞质膜内化与过剩的估算

细胞相融合时,一部分质膜内化,一部分质膜过剩。我们在电镜观察的基础上,提出了细胞融合时质膜变化的数学模型,估算了质膜的内化率与过剩率,并对电镜下见到的质膜形态变化做出了适当的解释。一、材料与方法 1.

胰腺癌细胞总RNA转染树突细胞与胰腺癌-树突融合细胞激发特异性细胞毒T淋巴细胞能力的比较研究

目的比较人胰腺癌MiaPaCa-2细胞总RNA电转染树突细胞(Dendritic Cell,DC)与DCMiaPaCa-2融合细胞体外激发抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(Cytotoxic T Lymphocyte,CTL)能力的差异。方法自6例胰腺癌患者外周血单核细胞中分离、培养DC。使用电穿孔法将MiaPaCa-2细胞总RNA转染DC,使用细胞融合方法将胰腺癌MiaPaCa-2细胞抗原负载DC,以未负载抗原的DC为对照。使用流式细胞术(FCM)检测PE-MUC/FITC-CD86抗体双标细胞评估融合效率;四甲基偶氮唑盐(MTT)检测转染各组DC存活率;混合细胞培养法评价各组DC体外刺激自体T淋巴细胞增殖能力;ELISA法检测各组DC体外激发抗原特异性CTL因子释放量。结果采用PEG-DMSO诱导的DC与MiaPaCa-2的融合细胞同时表达DC表型和MUC1分子,CD86与MUC1双阳性表达率为(42.3±7.30)%;融合细胞组DC存活率呈时间依赖性下降,转染后96h的存活率降低至62.81%,而MiaPaCa-2总RNA转染组DC细胞存活率稳定在85%左右,两组间差异有统计学意义(P<0.05);转染MiaPaCa-2总RNA DC刺激自体T细胞增殖指数(DC:T=1:10)为8432±611.25,显著高于DC-MiaPaCa-2融合细胞(DC:T=1:10)5672±107.51(P<0.05);且MiaPaCa-2总RNA转染DC激发特异性CTL分泌IL-12p70、IL-10和IFN-γ细胞水平亦显著异于DC-MiaPaCa-2融合细胞(P<0.05)。结论胰腺癌细胞总RNA转染DC较胰腺癌-树突融合细胞有更强的体外抗原特异性CTL激发能力。

电融合法制备骨肉瘤融合细胞瘤苗的特性分析

目的本研究旨在制备骨肉瘤融合细胞瘤苗并检测其体外生物学特性。方法应用电融合技术制备UMR-106细胞与大鼠巨噬细胞的融合细胞,经过磁性分选后,流式细胞仪检测融合细胞的DNA含量和表面抗原的表达。细胞培养检测融合细胞的克隆形成能力,并体外测定其诱导CTL的杀伤活性。结果电融合与磁性分选技术相结合可获得95%的融合细胞纯度。流式细胞仪测定表明,融合细胞可表达较高的MHC-Ⅰ、Ⅱ类抗原。其软琼脂克隆形成能力明显降低(UMR-106,29.2±7.2,融合细胞,17.6±5.1,P<0.05),而诱导CTL细胞杀伤的能力则显著提高(100∶1时UMR-10613.4±3.2,融合细胞42.9±7.5,P<0.05)。结论骨肉瘤融合细胞可稳定生长,在体内诱导CTL细胞产生较强的抗肿瘤活性,可用于动物模型以检测其所诱导的抗骨肉瘤效果。