小鼠电融合胚胎发育影响因素的研究

电融合技术，是获得四倍体胚胎的主要手段．本试验研究了各种不同因素，对小鼠电融合胚发育的影响．结果表明，电刺激前后，使用不同的操作液对融合胚发育有影响．电刺激前使用Ｍ２液、电刺激后在Ｗｈｉｔｔｅｎ氏液中融合，然后转入ＣＺＢ液中培养，这一操作体系（Ｍ／Ｗ—ＣＺＢ）效果最好，融合胚的囊胚发育率为８０．５％，显著高于Ｍ／Ｗ—Ｗ，Ｗ／Ｗ—Ｗ，Ｗ／Ｗ—ＣＺＢ组，后者的囊胚发育率分别为０，０，５４．５％（Ｐ＜０．０５）．试验还发现，刺激强度为１．０ｋｖ／ｃｍ，８０μｓ；１．０ｋｖ／ｃｍ．４０μｓ和０．８ｋｙ／ｃｍ，８０μｓ时，融合囊胚的发育率分别为７９．０，８１．９和７１．１％．ＨＣＧ注射后４７ｈ、４８ｈ的２—细胞胚胎的融合胚发育率，显著高于（Ｐ＜０．０１）ＨＣＧ注射后４２ｈ、４４ｈ和４６ｈ的，囊胚发育率分别为８２．９，８０．６，０，０和２２．８％．

小鼠电融合四倍体胚胎早期发育的研究

多倍体发育现象在低等动物，尤其是在无脊椎动物中比较普遍，在哺乳动物中多倍体往往发育到胚胎早期就死亡，因而在自然界中不能存活。探讨哺乳类四倍体不能存活的原因是当今生物学研究的热点问题之一。目前，电融合技术是大量获得四倍体胚胎的主要手段。本文以8－12周龄昆明小白鼠为实验对象，取其2－细胞胚胎于Whitten氏液中进行电融合，再移入CZB液中培养。电刺激的条件分别为：1．0kv/cm,40μs，和0．8kv/cm,80μs。对融合胚发育的状态、细胞数目及染色体组成等进行观察的结果表明，融合胚培养24小时后发育到4－细胞期，并发生致密化（Tab.1)。融合胚的囊胚形成时间与体内发育的同期胚胎及体外培养的同期二倍体胚胎基本一致（Tab,2；Fig.1)。融合囊胚的细胞数平均为13．0±4．95，显著（P＜0．01）少于体外发育囊胚（37．0±5．92）和体内发育囊胚（41．6±2．4）的细胞数（Tab.3)。融合胚各个分裂相的染色体数目分布情况见Fig.2，其四倍体（4n＝80）率为42．86％，非整倍体率达57．14％。而对照组的体内发育囊胚的非整倍体率仅为11．54％；（Tab.4)，与Kaufman的结果（12．4％）很接近，说明本实验中的染色体制备技术和分析方法是可行的。融合囊胚的细胞数目减少和高发的非整倍体率可能是四倍体胚胎发育能力差的原因。