期刊导航
期刊开放获取
河南省图书馆
退出
期刊文献
+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
检索
高级检索
期刊导航
共找到
2
篇文章
<
1
>
每页显示
20
50
100
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
显示方式:
文摘
详细
列表
相关度排序
被引量排序
时效性排序
酵母双杂交技术筛选人95D细胞中肺癌转移相关蛋白1相互作用蛋白及其验证
1
作者
李彦芹
刘扬
+1 位作者
梁丽玲
许阳
《武警医学》
CAS
2018年第9期895-900,共6页
目的通过酵母双杂交实验、免疫共沉淀及GST pull down技术筛选并验证肺癌细胞系95D细胞中与肺癌转移相关蛋白1(lung cancer metastasis-related protein 1,LCMR1)相互作用蛋白,为进一步研究LCMR1在肺癌发生发展中的作用提供科学依据。...
目的通过酵母双杂交实验、免疫共沉淀及GST pull down技术筛选并验证肺癌细胞系95D细胞中与肺癌转移相关蛋白1(lung cancer metastasis-related protein 1,LCMR1)相互作用蛋白,为进一步研究LCMR1在肺癌发生发展中的作用提供科学依据。方法将诱饵质粒p GBKT7-LCMR转化AH109,应用酵母双杂交系统筛选出95D细胞中与LCMR1相互作用的候选克隆;应用反复划线法、X-α-Gal显色法和共转化回复验证法排除假阳性克隆,对真阳性克隆进行测序及生物学分析;构建含Myc标签的LCMR1融合蛋白的重组载体p CMV-Myc-LCMR1载体,以及带flag标签的目标相互作用蛋白载体,共转染细胞,利用免疫共沉淀技术验证LCMR1与相互作用蛋白之前的相互作用;融合蛋白沉降(GST pull-down)法进一步体外验证LCMR1与相互作用蛋白之间的作用。结果诱饵质粒p GBKT7-LCMR1与95D细胞c DNA文库共转化AH109,初步获得20个候选克隆;重复划线法后获得16个阳性克隆,X-α-Gal显色法获得12个蓝色阳性克隆,进一步将文库质粒与诱饵质粒共转化酵母菌回复验证,最终获得6个真阳性克隆;成功构建含标签重组载p CMV-Myc-LCMR1、pc DNA3.0-flag-RPL29及pc DNA3.0-flag-GNG5载体,经免疫共沉淀验证LCMR1与RPL29在细胞内有相互作用,与GNG5在细胞内无相互作用;GST pull-down实验验证LCMR1与RPL29在体外有相互作用,与GNG5在细胞外无相互作用。结论酵母双杂交技术筛选出95D细胞中相互作用蛋白6个,经免疫共沉淀和GST pull-down实验验证LCMR1与RPL29体内体外均有相互作用。
展开更多
关键词
肺癌转移相关
蛋白
1
酵母双杂交
免疫共沉淀
RPL29
融合蛋白沉降
下载PDF
职称材料
拟南芥CARK4与RCAR12相互作用的研究
2
作者
陈静波
李小意
+3 位作者
李晶祥
黄琪
李旭锋
杨毅
《四川大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第2期375-380,共6页
本研究采用酵母双杂交(Y2H)、GST-融合蛋白沉降技术(GST-pull-down)及双分子荧光互补实验(BiFC)实验方法研究蛋白质激酶CARK4与脱落酸受体RCAR12之间的相互作用.酵母双杂交(Y2H)试验显示,缺失氮端的CARK4(CARK4ΔN)与RCAR12具有明显的...
本研究采用酵母双杂交(Y2H)、GST-融合蛋白沉降技术(GST-pull-down)及双分子荧光互补实验(BiFC)实验方法研究蛋白质激酶CARK4与脱落酸受体RCAR12之间的相互作用.酵母双杂交(Y2H)试验显示,缺失氮端的CARK4(CARK4ΔN)与RCAR12具有明显的相互作用.体外GST-融合蛋白沉降技术试验进一步得出CARK4能拉下RCAR12,而不能结合负对照GST,这证明CARK4可以直接与RCAR12相互作用.为了确定CARK4与RCAR12在植物体内是否也存在相互作用,利用农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达来进行BiFC实验,结果表明在烟草中共注射CARK4与RCAR12能发激发荧光,而负对照却没有,这说明CARK4与RCAR12在植物体内存在相互作用.研究结果表明,CARK4与RCAR12在植物体内、体外均具有相互作用.
展开更多
关键词
酵母双杂交
GST-
融合蛋白沉降
技术
双分子莹光互补
脱落酸受体
蛋白
激酶
下载PDF
职称材料
题名
酵母双杂交技术筛选人95D细胞中肺癌转移相关蛋白1相互作用蛋白及其验证
1
作者
李彦芹
刘扬
梁丽玲
许阳
机构
解放军总医院呼吸内科
出处
《武警医学》
CAS
2018年第9期895-900,共6页
基金
解放军总医院苗圃基金资助(114KMM03)
文摘
目的通过酵母双杂交实验、免疫共沉淀及GST pull down技术筛选并验证肺癌细胞系95D细胞中与肺癌转移相关蛋白1(lung cancer metastasis-related protein 1,LCMR1)相互作用蛋白,为进一步研究LCMR1在肺癌发生发展中的作用提供科学依据。方法将诱饵质粒p GBKT7-LCMR转化AH109,应用酵母双杂交系统筛选出95D细胞中与LCMR1相互作用的候选克隆;应用反复划线法、X-α-Gal显色法和共转化回复验证法排除假阳性克隆,对真阳性克隆进行测序及生物学分析;构建含Myc标签的LCMR1融合蛋白的重组载体p CMV-Myc-LCMR1载体,以及带flag标签的目标相互作用蛋白载体,共转染细胞,利用免疫共沉淀技术验证LCMR1与相互作用蛋白之前的相互作用;融合蛋白沉降(GST pull-down)法进一步体外验证LCMR1与相互作用蛋白之间的作用。结果诱饵质粒p GBKT7-LCMR1与95D细胞c DNA文库共转化AH109,初步获得20个候选克隆;重复划线法后获得16个阳性克隆,X-α-Gal显色法获得12个蓝色阳性克隆,进一步将文库质粒与诱饵质粒共转化酵母菌回复验证,最终获得6个真阳性克隆;成功构建含标签重组载p CMV-Myc-LCMR1、pc DNA3.0-flag-RPL29及pc DNA3.0-flag-GNG5载体,经免疫共沉淀验证LCMR1与RPL29在细胞内有相互作用,与GNG5在细胞内无相互作用;GST pull-down实验验证LCMR1与RPL29在体外有相互作用,与GNG5在细胞外无相互作用。结论酵母双杂交技术筛选出95D细胞中相互作用蛋白6个,经免疫共沉淀和GST pull-down实验验证LCMR1与RPL29体内体外均有相互作用。
关键词
肺癌转移相关
蛋白
1
酵母双杂交
免疫共沉淀
RPL29
融合蛋白沉降
Keywords
lung cancer metastasis-related protein 1
yeast two hybridization
immunoprecipitation
RPL29
GST pull-down
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
拟南芥CARK4与RCAR12相互作用的研究
2
作者
陈静波
李小意
李晶祥
黄琪
李旭锋
杨毅
机构
四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室
出处
《四川大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第2期375-380,共6页
基金
国家自然科学基金(31671455)
973计划(2015CB755702)
文摘
本研究采用酵母双杂交(Y2H)、GST-融合蛋白沉降技术(GST-pull-down)及双分子荧光互补实验(BiFC)实验方法研究蛋白质激酶CARK4与脱落酸受体RCAR12之间的相互作用.酵母双杂交(Y2H)试验显示,缺失氮端的CARK4(CARK4ΔN)与RCAR12具有明显的相互作用.体外GST-融合蛋白沉降技术试验进一步得出CARK4能拉下RCAR12,而不能结合负对照GST,这证明CARK4可以直接与RCAR12相互作用.为了确定CARK4与RCAR12在植物体内是否也存在相互作用,利用农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达来进行BiFC实验,结果表明在烟草中共注射CARK4与RCAR12能发激发荧光,而负对照却没有,这说明CARK4与RCAR12在植物体内存在相互作用.研究结果表明,CARK4与RCAR12在植物体内、体外均具有相互作用.
关键词
酵母双杂交
GST-
融合蛋白沉降
技术
双分子莹光互补
脱落酸受体
蛋白
激酶
Keywords
Y2H
Pull down
BiFC
RCAR12
CARK4
分类号
Q945 [生物学—植物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
酵母双杂交技术筛选人95D细胞中肺癌转移相关蛋白1相互作用蛋白及其验证
李彦芹
刘扬
梁丽玲
许阳
《武警医学》
CAS
2018
0
下载PDF
职称材料
2
拟南芥CARK4与RCAR12相互作用的研究
陈静波
李小意
李晶祥
黄琪
李旭锋
杨毅
《四川大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2018
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
上一页
1
下一页
到第
页
确定
用户登录
登录
IP登录
使用帮助
返回顶部