红景天苷改善顺铂引起的小鼠耳蜗毛细胞和螺旋神经节神经元损伤的机制

目的探究红景天苷(SAL)改善顺铂(CIS)引起的耳蜗毛细胞(CHC)和螺旋神经节神经元(SGN)损伤的作用及其与环磷腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP效应元件结合蛋白(CREB)通路的关系。方法分离新生C57BL/6小鼠的耳蜗基底膜,分为对照组(C组)、CIS组、SAL组、SAL+SQ22536(cAMP抑制剂)组和SAL+H-89(PKA抑制剂)组,每组20条。C组仅加入无血清BME培养液;CIS组在培养液中加入15μmol/L CIS;SAL组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL;SAL+SQ22536组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL和5μmol/L SQ22536;SAL+H-89组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL和30μmol/L H-89。各组在培养箱中孵育48 h后,免疫荧光染色观察各组CHC和SGN损伤;试剂盒检测各组耳蜗基底膜中ROS和cAMP含量;Western blot检测各组PKA、p-CREB、CREB、Bcl-2、BDNF、NF-M蛋白水平。结果CIS组CHC排列混乱、体积肿大,SGN细胞核破碎、神经突缺失,SAL可减轻CHC和SGNs损伤。与C组相比,CIS组CHC、SGN数量较少(P<0.05),ROS、cAMP含量、PKA、BDNF、NF-M、Bcl-2蛋白及p-CREB/CREB水平较高(P<0.05);与CIS组相比,SAL组CHC、SGN数量较多(P<0.05),ROS含量较低(P<0.05),cAMP含量、PKA、BDNF、NF-M、Bcl-2蛋白及p-CREB/CREB水平较高(P<0.05)。SQ22536和H-89均可逆转SAL对CHC和SGN的保护作用。结论SAL可能通过激活cAMP/PKA/CREB通路,促进抗凋亡蛋白和神经保护因子表达,缓解CIS引起的CHC和SGN损伤。

Waardenburg综合征患者螺旋神经节细胞数量分布特征的分析

目的本研究旨在研究Waardenburg综合征(Waardenburg Syndrome,WS)患者的耳蜗中螺旋神经节细胞(spiral ganglion neuron,SGN)的数量与非综合征性感音神经性聋(Nonsyndromic sensorineural hearing loss,NS)患者相比是否具有差异,以及耳蜗不同位置之间的数量分布差异。方法本研究采用横断面研究,收集2000年至2020年间就诊于中国人民解放军总医院行人工耳蜗植入的WS患者,收集患者相关信息,包括植入年龄、植入侧别、植入电极型号以及人工耳蜗植入术中的电刺激复合动作电位(Electrical compound action potential,ECAP)测量数据以及其幅值增长曲线(amplitude growth function,AGF)。为控制植入年龄,植入电极类型等混杂因素带来的偏倚,制定对照组患者纳入标准,通过采用窗函数的计算方式,应用Matlab(R2016a)计算两组中不同刺激电极的slope值。依据刺激电极在耳蜗中的位置,将电极分为近蜗顶组,中间组以及近蜗底组,应用采用t检验比较两组患者中不同位置之间的slope值。结果依据纳入以及排除标准,最终纳入16名WS患者以及16名NS患者,经两独立样本t检验证实两组之间具有可比性。WS患者与NS患者的总体slope具有显著差异(P=0.007<0.05;Cohen's d=1.022>1),在不同位置中,以中间组以及近蜗底组的slope值具有显著差异(P=0.001<0.05;P=0.026<0.05,Co⁃hen's d=1.302>1;Cohen's d=0.828>0.8)。结论WS患者SGN的数量明显少于NS患者,并且在耳蜗的不同位置数量改变不同,尤其以底回以及中回的数量改变尤为显著。

α2-肾上腺素能受体在水杨酸钠诱导大鼠耳蜗螺旋神经节神经元兴奋毒性中的表达变化

目的 观察α2-肾上腺素能受体(α2-adrenergic receptor, α2-AR)在大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neuron, SGN)中的分布,以及水杨酸钠(sodium salicylate, SS)作用SGN不同时间点后α2-AR各亚型的表达改变,以探讨其在SGN兴奋毒性中的作用。方法 将新生SD大鼠随机分成:对照组、SS处理6 h组、SS处理12 h组和SS处理24 h组,每组2只。急性分离各组SGN后进行原代培养48 h,对照组用新的培养基培养,不做处理,余三组分别用5 mM水杨酸钠处理6 h、12 h、24 h,用免疫荧光染色技术检测SGN中α2-AR各亚型的表达情况;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot方法检测SS作用不同时间后α2-AR各亚型的mRNA和总蛋白表达改变情况。结果 (1)免疫荧光染色表明SGN上存在α2A-AR、α2B-AR、α2C-AR三种亚型的表达;(2)RT-qPCR结果显示在SGN中α2-AR各亚型mRNA相对表达量α2A-AR>α2B-AR(P<0.01),α2A-AR>α2C-AR(P<0.01),α2B-AR和α2C-AR之间差异无统计学意义;与对照组相比,5 mM SS作用SGN 6 h、12 h、24 h后α2A-AR表达量均明显增高(P<0.05);SS作用12 h后α2C-AR表达量开始增高(P<0.05),而α2B-AR呈升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);(3)Western blot结果显示SGN中α2-AR各亚型蛋白表达量α2A-AR>α2B-AR(P<0.01),α2A-AR>α2C-AR(P<0.05),α2B-AR和α2C-AR之间差异无统计学意义,与mRNA表达一致。与对照组相比,5 mM SS作用SGN 12 h后α2A-AR总蛋白开始下降(P<0.05),作用24 h后α2C-AR总蛋白下降(P<0.05),α2B-AR总蛋白不变。结论 α2-AR三种亚型在SGN中均有表达,其中α2A-AR、α2C-AR可能介导了SS诱导的SGN兴奋毒性且α2A-AR比α2C-AR反应更快速。

大鼠螺旋神经节干细胞体外优化培养方法的研究

目的探索贴壁法进行螺旋神经节(Spiral Ganglion,SG)干细胞培养,同时与传统悬浮培养法对比培养的SG干细胞形态、增殖效率及分化表型。方法取新生1天SD大鼠耳蜗的螺旋神经节位置,以悬浮和单层贴壁的方式进行培养,观察SG干细胞的形态学特点。通过活/死细胞染色和Annexin-V/PI双染法比较其生长状态。通过Nestin、Sox2、Ki67等免疫荧光染色及生长曲线测定等方法对其增殖能力进行比较分析。体外胎牛血清诱导SG干细胞分化,通过Tuj1免疫荧光染色鉴定分化表型并比较分化效率。结果两种培养方式均可获得状态良好的高纯度SG干细胞,免疫荧光染色和生长曲线测定结果提示贴壁培养的干细胞的增殖活性较悬浮培养的干细胞更强。诱导分化后,两种培养方式获得的SG干细胞均可分化为Tuj1染色阳性的双极神经元样细胞。结论本研究结果表明单层贴壁可培养出状态良好的SG干细胞,并且其增殖能力较悬浮培养的干细胞更强。贴壁培养的干细胞可被可成功诱导分化为神经元。提示单层贴壁方式可作为一种稳定的SG干细胞培养方法,从而为SG干细胞的相关研究提供重要技术支持。

水杨酸钠增强氧化应激介导耳蜗螺旋神经节神经元损伤作用的实验观察

目的观察水杨酸钠(SS)作用大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(SGN)后,SGN中氧化应激水平的变化。方法将6只SD大鼠随机分为对照组和SS组,每组3只。通过耳蜗器官培养48 h后,用5 mM SS处理48 h,对照组不予处理,采用免疫荧光染色技术定位耳蜗器官中活性氧自由基(ROS)的主要生成位置。将15只SD大鼠随机分成5组,即对照组、SS组、SS+N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)组、阳性对照过氧化氢(H_(2)O_(2))组、H_(2)O_(2)+NAC组,每组3只。通过急性分离SGN,原代培养48 h后分别用5 mM SS、5 mM SS联合100μM NAC、300μM H_(2)O_(2)、300μM H_(2)O_(2)联合100μM NAC处理48 h,对照组不予处理。采用荧光染色法检测并量化各组大鼠SGN中ROS荧光探针DCFH-DA的平均荧光强度;采用CCK8法检测SGN细胞存活率。结果在耳蜗器官培养中,SS作用后,免疫荧光染色显示ROS荧光增强,并且主要在SGN中表达,而在其他细胞中荧光强度无明显变化。为进一步量化荧光强度,在原代培养SGN中加入5 mM SS处理后,荧光染色法显示ROS平均荧光强度较对照组升高(P<0.001),与H 2O 2组结果一致(P<0.0001)。在加入ROS抑制剂NAC之后,ROS平均荧光强度较SS组下降(P<0.01)。CCK8法结果显示,SS作用之后细胞存活率较对照组下降41.34%(P<0.01);在加入NAC之后,细胞存活率较SS组上升36.05%(P<0.01),与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。H_(2)O_(2)组细胞存活率较对照组下降52.31%(P<0.001),在加入NAC之后,细胞存活率较H_(2)O_(2)组上升34.73%(P<0.01)。结论SS增强SGN的氧化应激,并且导致了SGN损伤。氧化应激抑制剂NAC可以降低SGN的氧化应激,并且对SS致SGN损伤具有保护作用。

多层螺旋CT联合血清糖类抗原125对腹膜后副神经节瘤的诊断价值

目的探讨多层螺旋CT联合血清糖类抗原125(CA125)对腹膜后副神经节瘤的诊断价值。方法回顾性分析2016年1月至2022年5月海安市人民医院收治的72例腹膜后副神经节瘤患者(研究组)及56例腹膜后副神经鞘瘤患者(对照组)的临床资料。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者血清糖类抗原125(CA125)水平,并行多层螺旋CT检查,比较两组多层螺旋CT影像学表现、CT值及强化率。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析多层螺旋CT联合血清CA125对腹膜后副神经节瘤的诊断价值。结果研究组血清CA125水平高于对照组[(242.37±28.29)kU/L vs.(205.71±22.18)kU/L,t=7.974,P<0.001]。在多层螺旋CT影像学表现方面,研究组周边囊变/坏死比例高于对照组(20.83%vs.3.57%,P<0.05),两组类圆形或圆形病灶、钙化、囊变/坏死、出血、边界清楚、均匀度为均匀的比例及病灶大小差异无统计学意义(P>0.05)。研究组平均CT值、动脉期CT值、静脉期CT值、动脉期强化率均高于对照组(P<0.05),两组静脉期强化率比较差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线结果显示,平均CT值、动脉期CT值、静脉期CT值、动脉期强化率及血清CA125水平五者联合诊断腹膜后副神经节瘤的曲线下面积(AUC)值、敏感度、特异度、约登指数等诊断效能均优于各指标单独诊断。结论多层螺旋CT参数联合血清CA125水平对诊断腹膜后副神经节瘤的诊断价值优于单独诊断。

腺病毒介导的NT3基因转染对噪音损伤的耳蜗螺旋神经节细胞的保护作用

神经营养素 3(neurotrophin 3,NT3)作为螺旋神经节细胞特异的营养因子 ,可有效地支持内耳传入神经元的存活 ,因此有望成为治疗因其退变而引起的感音性神经性耳聋的有效因子。实验采用腺病毒介导lacZ基因 ,检测了外源基因在豚鼠内耳中的长期表达。用噪音制备了豚鼠耳聋模型 ,在噪音损伤后第 7天 ,通过圆窗膜注入 1× 10 8重组腺病毒。注入神经营养素 3重组腺 (Ad NT3)的组为实验组 ,注入Ad lacZ的为对照组。 4周后 ,经NT3抗体免疫细胞化学染色可见 ,在注入Ad NT3病毒的实验组中 ,在内耳多种细胞中有明显的NT3蛋白的表达。HE染色显示 ,注射Ad lacZ组的豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞明显退变 ,螺旋神经节内细胞间隙拉大 ,细胞密度明显低于注射Ad NT3实验组动物 (P <0 .0 1)。这一结果说明 ,腺病毒介导的NT3基因可长期表达于内耳中 ,并且可在噪音引起毛细胞死亡后有效地抑制螺旋神经节细胞的退变。

顺铂对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡及caspase-3表达的影响

目的:建立小鼠顺铂(CDDP)耳毒性模型,研究不同剂量顺铂对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡及caspase-3表达的影响。方法:采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术检测螺旋神经节细胞的凋亡;应用免疫组织化学Envision法检测caspase-3在螺旋神经节中的表达;同时结合听脑干反应(ABR)测试,观察用药前后小鼠听力的变化。结果:不同剂量顺铂组小鼠体重和听力明显下降,与对照组比较均有显著性差异(P<0.05,P<0.01);并且随着顺铂给药剂量的增加,小鼠耳蜗螺旋神经节中TUNEL阳性细胞数增多,以及caspase-3表达明显增强。结论:应用小鼠能建立可靠的顺铂耳毒性模型;顺铂可导致耳蜗螺旋神经节细胞凋亡,而且此凋亡过程中有caspase-3的参与,进一步证实了凋亡可能是顺铂耳毒性机制之一。

耳蜗毛细胞和螺旋神经节及其神经纤维的联合定量观察

目的：将耳蜗基底膜取材技术与耳蜗切片技术相结合以观察同一耳蜗中几个主要结构在病理发展中的相互关系。方法：耳蜗铺片用于定量观察毛细胞，骨性螺旋板切片用于定量观察缰孔内的神经纤维，中轴切片用于定量观察螺旋神经节。结果：将卡铂耳中毒灰鼠的耳蜗标本与正常灰鼠进行比较，显示内毛细胞，神经纤维和螺旋神经节的损失百分比基本一致。结论：卡铂对内毛细胞，神经纤维和螺旋神经节都有破坏作用，至于在卡铂病变早期，究竟哪一部分对损伤更敏感，有待进一步研究。

强噪声暴露下豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡及Caspase-3的表达

目的探讨强噪声能否诱导豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞(sprial ganglion cell,SGC)的凋亡及SGC的凋亡是否与凋亡蛋白酶Caspase-3信号转导有关。方法选用健康雄性白色豚鼠20只,随机分为4组,每组5只,其中3组为实验组,1组为对照组。将实验组动物暴露于4kHz、120dB SPL窄带噪声中4h,分别测试噪声刺激停止后1、4、14d及对照组豚鼠听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)。通过透射电镜和脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(ternial-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeing,TUNEL),检测SGC凋亡细胞,免疫组织化学方法检查Caspase-3蛋白的表达。结果透射电镜观察发现实验组SGC出现了凋亡细胞的特征性改变。实验组SGC的TUNEL染色明显增强,Caspase-3的表达增高,与对照组比较差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论强噪声可以诱导SGC凋亡;SGC凋亡与caspase-3的激活有关。

谷氨酸受体在噪声所致豚鼠螺旋神经节细胞损伤中的作用

本文旨在研究谷氨酸及其受体在噪声致豚鼠螺旋神经节细胞损伤中的作用。实验分为在体和离体两部分。(1)在体实验:豚鼠分为生理盐水(NS,10μL)组,NS(10μL)+噪声组和犬尿喹啉酸(kynurenic acid,KYNA,5 mmol/L,10μL)+噪声组,每组15只。用微量注射器经完整圆窗膜表面给予NS或KYNA;暴露于白噪声110 dB SPL,1 h。在圆窗给药前及噪声暴露后测试听觉脑干诱发电位(auditory brainstem response,ABR)阈值及Ⅲ波幅值,听神经复合动作电位(compound action potential,CAP)阈值及N1波幅值和潜伏期,测试后取基底膜进行透射电镜观察。(2)离体实验:观察高浓度谷氨酸对急性分离的豚鼠螺旋神经节细胞的影响。结果显示,NS+噪声组豚鼠ABR及CAP阈移显著高于KYNA+噪声组,且Ⅲ波和N1波幅值明显降低,潜伏期明显延长。NS+噪声组豚鼠毛细胞及传入神经末梢急性水肿和线粒体结构破坏;KYNA +噪声组豚鼠的毛细胞和传入神经末梢无明显变化。离体胞外施加谷氨酸可引起螺旋神经节细胞逐渐出现水肿、变性,最后死亡。本实验提示,噪声暴露可引起豚鼠听功能损伤,毛细胞/传入神经突触的结构破坏和螺旋神经节细胞变性、死亡;这种损伤可能与噪声暴露引起谷氨酸的过度释放有关;谷氨酸通过其受体介导致使螺旋神经节细胞损伤,谷氨酸受体的广谱拮抗剂KYNA可减轻噪声对螺旋神经节细胞的损伤。

新生豚鼠谷氨酸钠内耳螺旋神经节损伤模型

目的 研究谷氨酸钠不同用药剂量对新生豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞及听力损伤的程度 ,以探索稳定而可靠的谷氨酸钠耳聋模型 .方法 豚鼠随机分成 4组 ,每组 (G0 ,G1,G2 ,G4 )分别按 0 ,1,2 ,4g·kg- 1 ·d- 1 ,ip给予谷氨酸钠 (Gluta mate ,G) ,连续 7d ,停药后饲养 35d .处死前测其耳廓反射以及脑干听觉诱发电位 .后取耳蜗 ,纵向石蜡切片 ,焦油紫染色 ,光镜观察 .结果 G0组死亡率为 0 10 ,听阈为 (43 5± 3 4 )dB ,平均细胞密度为 (4345 7± 2 4 1 4 )个·mm- 2 ;G1组死亡率为2 10 ,听阈为 (43 8± 9 4 )dB ,细胞密度为 (42 15 4± 2 95 2 )个·mm- 2 ;G2组死亡率为 4 10 ,听阈为 (6 7 3± 2 3 3)dB ,细胞密度为 (1997 5± 10 19 8)个·mm- 2 ;G4组死亡率为 2 0 2 0 .经方差分析 ,F检验 ,G2组与其他组比较 ,差异显著 ,P <0 0 1,GO组与G1组 ,差异无显著性 ,P >0 0 5 .结论 谷氨酸钠对新生豚鼠毒性损伤存在剂量依赖关系 ,2g·kg- 1 ·d- 1 ,ip可引起豚鼠均匀一致的耳蜗螺旋神经节细胞的消失 ,听力下降明显 ,死亡率较低 ,模型较为稳定 .

刺五加注射液对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗螺旋神经节中谷氨酸及其受体表达的影响

目的观察刺五加注射液对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞中谷氨酸及其受体表达的影响,并探讨相关机制。方法实验动物随机分成正常对照组、庆大霉素组、刺五加+庆大霉素组和刺五加注射液组。采用腹腔注射庆大霉素制作耳毒模型,刺五加注射液进行干预治疗。连续用药10 d后,观察各组实验动物听阈变化、耳蜗螺旋神经节中谷氨酸及其受体表达情况。结果与正常对照组和刺五加注射液组相比,庆大霉素组豚鼠听阈阈值和耳蜗螺旋神经节中谷氨酸及其受体的表达明显增高;刺五加注射液可显著改善庆大霉素所致的听阈改变和降低谷氨酸及其受体的表达。结论庆大霉素作用下耳蜗螺旋神经节细胞中谷氨酸和其相应受体表达增高;刺五加注射液可通过抑制谷氨酸及其受体在耳蜗螺旋神经节中的过度表达,对螺旋神经节细胞起到保护作用。

顺铂致豚鼠螺旋神经节细胞凋亡及Caspase-3活化的研究

目的 探讨顺铂的耳毒性作用与螺旋神经节细胞 (sprialglanglioncell,SGC)凋亡的关系 ,及SGC的凋亡是否与凋亡蛋白酶Caspase - 3信号转导有关。方法 取 40只听力正常的豚鼠 ,随机分为顺铂 1、2、4天组和对照组 ,每天检测听性脑干反应 (ABR)和 40Hz相关电位以观察豚鼠高、低频的听阈变化 ,并用TUNEL法检测凋亡细胞数量变化 ,免疫组化检测SGC中Caspase - 3p2 0活性片段的表达。结果 随着注射顺铂时间的延长 ,豚鼠听力逐渐下降 ,同时SGC的TUNEL染色明显增强 ,Caspase- 3p2 0活性片段的表达增高 ,与对照组比较均有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 顺铂的耳毒性损害机制与SGC的凋亡有关 ;顺铂所致的SGC凋亡过程中有Caspase -

老化豚鼠耳蜗毛细胞和螺旋神经节细胞定量研究

本文对3～3.5年老化豚鼠进行毛细胞和螺旋神经节细胞定量研究,并与1.5月龄青年豚鼠比较。结果表明:老化豚鼠外毛细胞损失率明显高于青年组（P<0.01）,而内毛细胞损失率无明显差异。外毛细胞损失率OHC3>OHC2>OHC1。顶回和底回螺旋神经节细胞分别减少15％和19.81％。耳蜗中轴PAS染色,螺旋神经节细胞内大量脂褐素Lp增加,柯替氏器不同程度退变,血管纹及螺旋韧带萎缩程度轻,耳蜗神经纤维减少,但胶质细胞增加。讨论了老化豚鼠形态变化对听功能的影响。

新生大鼠螺旋神经节细胞体外生长特点及脂质体介导的转染效率

目的探讨螺旋神经节细胞（spiral ganglion cells,SGCs）体外生长规律及特点,并观察阳离子脂质体转染SGCs的情况。方法从出生3~4 d的SD大鼠耳蜗中分离螺旋神经节组织,消化后放在含10%胎牛血清的DMEM/F12中培养,第2 d换用含2%B27及5μmol/L阿糖胞苷的Neurobasal培养基纯化SGCs,取第4 d活性良好的细胞爬片后,通过免疫荧光法用NF-200抗体鉴定SGCs;另外用质粒pEGFP-C2联合Lipofectamine 2000转染SGCs,观察其转染效率及对细胞活性的影响。结果体外培养的SGCs胞体饱满透亮,折光性好,一般能存活2周左右,第3~7 d活性最好。细胞对NF-200染色阳性;约10%的SGCs能被Lipofectamine 2000转染,但小部分细胞轴突缩短,甚至漂浮起来。结论含B27的Neurobasal培养基能培养出活性良好的SGCs;脂质体和质粒pEGFP-C2能成功地转染SGCs,但转染效率较低,并在一定程度上影响细胞的活性。

卡铂对灰鼠螺旋神经节的早期损害

实验中观察了卡铂(50mg/kg)对灰鼠耳蜗螺旋神经节细胞的急性损害.注药后6小时即可发现在Ⅰ型神经元胞体和神经纤维中有空泡形成.注药后1天可见Ⅰ型神经元内充满大空泡并开始发生坏死.其结果表明卡铂产生对螺旋神经节的毒害相当迅速.提示耳蜗传入神经系统可能是卡铂的第一个靶组织.

爆震后豚鼠耳蜗毛细胞和螺旋神经节细胞定量观察

目的 :观察爆震后耳蜗毛细胞和螺旋神经节细胞的变化。 方法 :复制强脉冲噪声致聋豚鼠模型 ,以脑干听觉诱发电位测试仪测定听神经脑干反应 (ABR)阈值 ,通过耳蜗铺片计算机图像分析行毛细胞计数 ,耳蜗病理切片螺旋神经节细胞计数。结果 :正常对照组和噪声暴露后 2 1d的实验组耳蜗钩回、第 1和第 2回毛细胞总数分别为 3 5 99± 15 9.6个 ,6 0 2 2± 98.4个 ;二下螺旋神经节细胞计数分别为 (5 1± 4.72 )个 ,(2 7± 6 .94)个 ,以上均数各组间相差显著。结论 :爆震后不仅 ABR阈值升高 ,毛细胞数减少 。

NT3重组腺病毒对耳蜗螺旋神经节的保护作用

目的 观察含有神经营养素 - 3(neurotrophin - 3,NT3)的重组腺病毒在豚鼠耳蜗中的表达及其在噪声损伤后对螺旋神经节的保护作用。方法 2 7只白色纯种豚鼠 ,暴露于 135dBSPL、4kHz的窄带噪声中 4h。 7天后 ,12只经圆窗注入ad -NT3,12只经圆窗注入腺病毒携带的Lac2基因 (adenviruslacopron ,ad -LacZ) ,3只注入人工外淋巴液。分别于 1、4、8周后取材 ,石蜡包埋中轴切片后 ,用免疫组化方法 (ABC法 )检测NT3的表达。于光镜下计数螺旋神经节细胞。结果 在耳蜗各回中NT3均有表达 ,4、8周组动物较 1周组动物染色弱。注入ad -NT3组较ad -LacZ组和人工外淋巴组螺旋神经节发生退行性病变的数目少 ,螺旋神经节细胞计数结果经t检验有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 含有NT3的重组腺病毒在耳蜗中能高效表达 。

NT3基因转染对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞生长的影响

目的 通过神经营养素 3(NT3)基因转染的方法 ,了解NT3对耳蜗螺旋神经节细胞(SGC)生长的影响。方法 建立体外培养小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的方法 ,并进行神经丝蛋白 (NF)免疫组化染色鉴定及受体酪氨酸激酶C(TrKC)免疫组化染色。利用阳离子脂质体作为载体 ,将重组质粒 pIRES2 EGFP(增强型绿色荧光蛋白 ) NT 3瞬时转染耳蜗螺旋神经节细胞 ,观察转染后耳蜗螺旋神经节细胞的形态、数量等改变。结果 成功培养了小鼠耳蜗螺旋神经节细胞。NT3基因转染 4 8h后 ,荧光显微镜下见聚合分布的、胞体及轴突发出绿色荧光的螺旋神经节细胞 ,与未转染细胞相比 ,螺旋神经节细胞形态未见明显变化。继续培养 2周后 ,各实验组细胞的数量均减少 ,但NT3转染组细胞减少的数量低于空载体组及空白对照组。