螺旋藻激酶对内皮损伤大鼠纤溶酶原和抗凝血酶Ⅲ的影响

目的研究螺旋藻激酶(SPK)对活体内皮损伤大鼠血管内皮细胞抗凝和溶栓相关因子的影响,探讨SPK对心血管系统的保护作用。方法建立体内大鼠内皮损伤血栓模型。将大鼠随机分为正常对照组、损伤模型组、SPK低、中、高剂量组。不同剂量SPK干预后麻醉动物,Fe Cl3诱导大鼠颈总动脉内皮损伤形成血栓,从大鼠腹主动脉取血,抗凝后用酶联免疫吸附法(ELISA)检测纤溶酶原(PLG)和抗凝血酶(AT)-Ⅲ的含量。结果动物模型构建成功后损伤模型组与正常对照组相比,大鼠血液中PLG和AT-Ⅲ的含量显著升高(P<0.01),SPK各剂量组PLG和AT-Ⅲ含量明显升高(P<0.01),在中、高剂量组最为显著。结论 SPK在抗凝溶栓效应上,促进PLG和AT-Ⅲ释放,提高内皮细胞抗凝溶栓酶活性,从而发挥抗血栓作用。

螺旋藻激酶提取物对血栓形成的影响

目的探索螺旋藻激酶(SPK)提取物对血栓形成的影响。方法体外采用试管法测定家兔全血凝固时间;体内采用结扎老年大鼠下腔静脉法复制静脉血栓模型,称取血栓重量,采用毛细管法、剪尾法测定老年小鼠凝血时间(CT)和出血时间(BT)的变化,观察SPK提取物对静脉血栓形成的影响。结果SPK使体外试管法CT显著延长,使血栓形成实验的静脉血栓重量减轻,同时SPK也可以使老年小鼠的CT和BT显著延长,且各结果均具有明显的剂量-效应依赖关系。结论SPK提取物具有明显的抗凝作用。

螺旋藻激酶分离提纯方法初探

目的研究螺旋藻激酶的分离纯化方法,为工业化放大生产螺旋藻激酶药物提供一定的实验依据,为后续的酶学性质研究打下基础。方法配制螺旋藻激酶粗酶液,通过离心沉淀,饱和硫酸铵分级盐析,透析,凝胶层析来分离提纯螺旋藻激酶,最后用SDS-PAGE电泳法验证螺旋藻激酶纯度,测定分子量。结果通过一系列的分离提纯得到了较纯的蛋白,酶回收率达到42.3%,纯化倍数达到6.1。所得螺旋藻激酶的分子量为40 KD。结论初步探索出较为优化的螺旋藻激酶的分离纯化方法。

螺旋藻蛋白激酶溶栓作用的研究

目的探索螺旋藻蛋白激酶(SPK)的溶栓作用。方法体外用试管法,通过测定血栓溶解率来研究SPK的溶栓作用;用琼脂糖-纤维蛋白平板法检测SPK的纤溶作用;体内采用结扎大鼠下腔静脉的方法复制静脉血栓模型,通过称取血栓重量来研究SPK对静脉血栓的溶解作用。结果 SPK使体外试管法的血栓溶解率显著增加;SPK可以溶解琼脂糖-纤维蛋白平板;使体内实验的静脉血栓重量减轻,各结果均具有明显的剂量-效应依赖关系。结论螺旋藻蛋白激酶具有明显的溶栓作用。

螺旋藻激酶对大鼠动静脉环路血栓的溶栓作用研究

目的探索螺旋藻激酶(SPK)对大鼠动静脉环路血栓的溶栓作用及其机制。方法采用大鼠颈动-静脉环路血栓模型,通过称取血栓重量来测定螺旋藻激酶的溶栓作用;腹主动脉取血分离血浆,测定螺旋藻激酶对血浆D二聚体、TPA含量的影响。结果螺旋藻激酶使动静脉环路血栓干、湿重明显减轻,高、低剂量螺旋藻激酶使血浆D-二聚体含量明显升高(P均<0.05),高剂量螺旋藻激酶使TPA含量明显升高(P<0.05)。结论螺旋藻蛋白激酶能抑制血栓形成,激活纤溶活性,具有较好溶栓效力。

螺旋藻激酶对人脐静脉内皮细胞抗氧化能力的影响

内皮细胞损伤是动脉粥样硬化发生的起始步骤,氧化应激则被认为是血管内皮损伤最重要的致病因子之一[1-2].研制抗氧化内皮细胞保护剂已成为国内外研究的热点.我们前期的研究证明螺旋藻激酶（SPK）具有抗凝溶栓、保护细胞的能力[3].本研究建立脐静脉内皮细胞氧化损伤模型,探讨螺旋藻激酶的抗氧化能力和保护细胞的作用.

螺旋藻激酶对动脉粥样硬化模型大鼠血管内皮功能的影响

目的:研究螺旋藻激酶(SPK)对动脉粥样硬化模型大鼠血管内皮功能的影响。方法:将60只大鼠随机分为正常对照组(蒸馏水)、模型组(蒸馏水)、阳性对照组(辛伐他汀,0.005 g/kg)和SPK低、中、高剂量组(80、160、320 U/kg)。除正常对照组外,其余各组大鼠均复制动脉粥样硬化模型;同时,各组大鼠ig相应药物,每天1次,连续给药12周。测定大鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;苏木精-伊红染色观察大鼠胸主动脉血管内膜的形态改变。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠血清中TC、TG、LDL-C、IL-6和TNF-α含量增加(P<0.01),HDL-C含量降低(P<0.01);血管内皮细胞脱落,内膜增生、向管腔内突起,平滑肌细胞增殖且排列紊乱,中膜弹力纤维崩解断裂。与模型组比较,各给药组大鼠血清中TC、TG、LDL-C、IL-6和TNF-α含量下降(P<0.05或P<0.01),阳性对照组和SPK中、高剂量组大鼠血清中HDL-C含量增加(P<0.05);给药组大鼠血管内皮细胞形态较模型组明显改善,其中SPK中、高剂量组大鼠血管内皮细胞各层结构完整、内膜基本光滑,SPK中剂量组大鼠血管中膜平滑肌细胞排列稍紊乱,与正常对照组比较无明显变化。结论:SPK有明显的降脂和抗炎作用,可保护血管内皮功能;其作用机制可能与降低血清中TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α含量和升高血清中HDL-C含量有关。

螺旋藻激酶的酶学性质研究

目的研究螺旋藻激酶的酶学性质。方法螺旋藻激酶通过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-75凝胶过滤层析、冷冻干燥法从螺旋藻激酶发酵粗提物中纯化而来,用纤维蛋白平板法测定其纤溶活性,研究螺旋藻激酶的作用方式及温度、pH和抑制剂对其纤溶活性的影响。结果螺旋藻激酶能直接溶解纤维蛋白;它在45℃时活性最高,最适反应温度范围为45～55℃;最适反应pH为8,pH6～10内稳定性较强;EDTA和DTT对螺旋藻激酶活力无明显影响,而PMSF能完全抑制其活性。结论螺旋藻激酶热稳定性强,适宜碱性的环境。螺旋藻激酶是一种丝氨酸蛋白酶,结构中不含二硫键。

螺旋藻激酶对人脐静脉内皮细胞通透性及动脉粥样硬化大鼠血清黏附因子的影响

目的研究螺旋藻激酶(SPK)对人脐静脉血管内皮细胞通透性及动脉粥样硬化大鼠血清黏附因子的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,采用H2O2建立氧化损伤内皮细胞模型。测定单层细胞透过率、细胞外乳酸脱氢酶(LDH)渗出量、细胞分泌的细胞间黏附分子1(ICAM-1)量;采用高脂饲料喂养法建立大鼠动脉粥样硬化(AS)模型,同时给予SPK干预,连续饲养12周。末次给药后取血,分离血清,ELISA法测定细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)。结果体外实验:SPK可显著降低氧化损伤造成的单层细胞通透性,减少细胞外溢出的LDH和细胞分泌的ICAM-1(P均<0.05);体内实验:SPK显著降低AS模型大鼠血清ICAM-1、VCAM-1水平(P均<0.05)。结论 SPK可降低血管内皮细胞通透性,减少其释放黏附因子;降低AS大鼠血清黏附因子,预防AS。

螺旋藻激酶对人脐静脉内皮细胞t-PAmRNA、PAI-1mRNA表达的影响

目的研究螺旋藻激酶(Spirulina kinase,SPK)对人脐静脉内皮细胞t-PAmRNA、PAI-1mRNA表达的影响,探讨其抗血栓作用机制,为开发新型溶栓药物提供理论依据。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),建立肾上腺素(Adr)损伤模型加入不同浓度的SPK,并以肝素(Hep)为阳性对照,与空白组对照,经过12,24,48 h后,逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR),扩增产物经凝胶电泳分离后,凝胶图像分析仪照相和扫描,测定各组t-PAmRNA、PAI-1mRNA与内参基因三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA的相对表达量。结果在Adr损伤模型中,2 mg/ml SPK可以上调t-PAmRNA表达,超大剂量SPK降低t-PAmRNA表达。SPK还可以随着剂量的增加明显的抑制PAI-1mRNA的表达,效果强于大剂量的肝素。结论 SPK可能通过小部分活化t-PAmRNA的表达,抑制PAI-1mRNA的表达,从而达到抗血栓的作用。

螺旋藻激酶抗血管内皮细胞氧化损伤与一氧化氮的相关性

目的 探讨螺旋藻激酶(SPK)对过氧化损伤内皮细胞的保护作用.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HU-VEC),采用过氧化氢(H2 O2)诱导细胞损伤模型,实验分为正常组、模型组、阳性对照组(维生素E 10 mg/L)、SPK低、中、高剂量组(1、2、3 g/L),测定内皮细胞活力、细胞培养液中三磷酸腺苷(ATP)含量、一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性.结果 与对照组比较,模型组细胞活力明显下降(P<0.05),ATP、NO含量降低,NOS活性降低(P<0.05).与模型组比较,SPK中、高剂量组可显著降低氧化损伤造成的细胞损伤,使细胞活力明显上升(P<0.05);SPK低、中、高剂量组能使ATP分泌量显著增加(P<0.05);SPK中、高剂量组能使NO分泌量显著增加(P<0.05);SPK高剂量组使NOS活性显著增加(P<0.05).结论 SPK可减轻H2O2诱导下的内皮细胞损伤,提高HUVEC细胞活力,其机制可能与增加ATP,增强内皮细胞NOS的活性,进一步增加NO含量有关.

螺旋藻激酶对内皮细胞分泌vWF的影响

目的:探讨螺旋藻激酶(SPK)对肾上腺素损伤人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌人血管性假血友病因子(vWF)的影响,推测SPK抗血栓作用机制。方法:用不同浓度SPK对HUVEC预孵育后进行肾上腺素损伤,取细胞培养上清液,用酶联免疫吸附法检测vWF的含量。结果:与空白对照组相比,肾上腺素刺激的HUVEC分泌vWF明显增加,与肾上腺素模型组相比,SPK可剂量依赖性抑制损伤细胞分泌vWF,并随时间延长而逐渐明显。结论:SPK可以减少肾上腺素刺激下HUVEC分泌vWF,增强抗血栓作用。

螺旋藻激酶对大鼠动脉粥样硬化的影响

本研究旨在观察螺旋藻激酶(SPK)对大鼠动脉粥样硬化(AS)的影响并探讨其可能的作用机制。取SD大鼠60只随机均分为正常对照组、模型组、阳性对照组(辛伐他汀,0.005 g/kg)和SPK低、中、高剂量组(80、160、320 U/kg)。除正常对照组外,其余各组通过高脂饲料建立大鼠AS模型,同时给予相应药物,每天1次,试验期12周。末次给药60 min后股动脉取血,分离血清,测定总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量并计算动脉粥样硬化指数(AI);测定大鼠血清丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;通过苏木精-伊红(HE)染色法在光镜下观察腹主动脉血管内膜形态改变。结果显示,与正常对照组相比,模型组大鼠AI及血清MDA含量显著升高(P<0.05),血清NO含量和SOD活性显著下降(P<0.05);与模型组比较,SPK高剂量大鼠AI和血清MDA含量显著降低(P<0.05),NO含量和SOD活性显著升高(P<0.05);病理结果显示:模型组有明显粥样斑块形成,SPK各剂量组粥样斑块形成明显减少,尤其中、高剂量组与正常对照组无明显差异。综上所述:SPK有明显的预防AS的作用,其作用机制可能与降低MDA、提高NO含量和SOD活性有关。

螺旋藻激酶的体外抗氧化作用研究

目的:研究螺旋藻激酶(SPK)的体外抗氧化作用。方法:采用邻二氮菲-Fe2+氧化法、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法和邻苯三酚自氧化法,分别测定不同浓度SPK对羟基(OH^-)自由基、DPPH自由基和对超氧阴离子(O_2^-)自由基的清除能力,并计算半数抑制浓度(IC_(50));采用普鲁士蓝反应法测定不同浓度SPK对Fe3+的还原能力(以吸光度值反映)。以上试验均以维生素C(VC)为阳性对照。结果:SPK对OH^-自由基、DPPH自由基及O_2^-自由基的清除能力均呈一定的浓度依赖性,SPK对OH^-自由基、DPPH自由基最大清除率分别86.82%、78.89%(IC_(50)分别为54.31、0.636 g/L),比VC(64.77%、73.49%)高;SPK对O_2^-自由基最大清除率为78.31%(IC_(50)为3.918 g/L),比VC(94.14%)低;在还原能力试验中,SPK使体系吸光度值增加,其最大吸光度值与VC相近,并呈明显浓度依赖性。结论:螺旋藻激酶具有明显的体外抗氧化活性。

螺旋藻蛋白激酶对老龄大鼠血液流变学影响的研究

目的研究螺旋藻蛋白激酶（SPK）对老龄大鼠血液流变学的影响。方法24-36月龄老年大鼠30只,按随机数字表法随机分为SPK高浓度组（A组）、SPK低浓度组（B组）和老龄对照组（C组）,每组10只,3-4月龄大鼠为成年对照组（D组）,10只。A、B组分别给予SPK混悬液1 g/kg、0.5 g/kg灌服C、D组灌服等量生理盐水,均连续7 d。运用全自动血液流变快速测定仪检测血液流变学各项指标。结果SPK可以降低老龄大鼠的高、中、低切变率下的全血黏度（P〈0.05）,降低红细胞压积和血沉（P〈0.05）。结论SPK可以显著降低老龄大鼠的血液黏度,改善血液流变学特性。

螺旋藻激酶对大鼠血管内皮损伤模型血浆血栓素A_(2)、前列环素I_(2)水平的影响

目的研究螺旋藻激酶(SPK)对体内血管内皮损伤模型大鼠血浆血栓素(TX)A_(2)、前列环素(PG)I_(2)的影响。方法将大鼠随机分为正常对照组、模型组、SPK低、中、高剂量组。FeCl_(3)诱导建立颈总动脉内皮损伤的大鼠模型。SPK低、中、高剂量组以FeCl_(3)损伤+不同剂量SPK干预,造模成功后从大鼠腹主动脉取血,放射免疫法检测血中TXB_(2)、6-酮-前列腺(6-Keto-PG)F1a的含量。结果与正常对照组相比,模型组血液中TXB 2、6-Keto-PGF1a的含量显著升高,TXB 2/6-Keto-PGF1a比例升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,SPK高、中、低剂量组TXB 2、6-Keto-PGF1a含量均显著下降(P<0.01),TXB_(2)/6-Keto-PGF1a比例显著下降(P<0.01)。结论SPK影响血小板的功能,通过抑制TXB 2、6-keto-PGF1a的含量释放,降低TXB 2/6-Keto-PGF1a比例增加来提高血管内皮细胞的抗凝活性,从而发挥其抗血栓作用来保护心血管系统。

螺旋藻提取物的抗氧化抗肿瘤活性作用特性

为探讨螺旋藻(Spirulina)提取物的抗氧化和抗肿瘤活性,利用二苯代苦味酰基苯肼自由基(DPPH·)的清除活性和还原力大小评价样品的抗氧化能力,通过CCK-8法测定不同浓度的螺旋藻提取物对HeL丑细胞增殖抑制率的影响,采用Protein Tyrosine Kinase Assay Kit检测蛋白酪氨酸激酶(Protein Tyrosine Kinase,PTK)的活性。结果表明,螺旋藻提取物均表现出一定的DPPH·清除活性和还原力,与阳性对照维生素C(Vitamin C,VC)和2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)相比,螺旋藻醇提物和水提物清除自由基的能力均弱于阳性对照VC和BHT,但螺旋藻水提物的还原能力表现出与阳性对照VC和BHT相当的水平,且当样品浓度为100μg/mL时,螺旋藻水提物的还原能力均大于VC和BHT。螺旋藻醇提物和水提物均表现出抑制HeLa细胞增殖的活性,细胞增殖抑制率随着螺旋藻提取物浓度的增加而提高,通过对螺旋藻提取物进行酶水平的PTK活力抑制活性测试发现,其醇提物和水提物对PTK活力均有一定的抑制活性,且随着样品浓度增加,抑制活性越强。

枯草芽孢杆菌发酵螺旋藻的溶血作用研究

用枯草芽孢杆菌对螺旋藻发酵后，使螺旋藻的内在成分发生了变化，产生了螺旋藻肽、螺旋藻蛋白酶及螺旋藻蛋白激酶，从而使螺旋藻具有了溶血作用。通过对枯草芽孢杆菌发酵螺旋藻所产生的溶血作用的研究，揭示螺旋藻成分变化与溶血作用的关系，从而提高其药用价值，以利于螺旋藻的临床合理使用。

螺旋藻多糖对急性T淋巴细胞白血病细胞的杀伤作用

目的研究螺旋藻多糖(SPP)对人急性T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat的杀伤作用。方法取对数生长期Jurkat细胞,分为对照组和1 g/L、2 g/L、5 g/L SPP组。采用MTT法检测SPP对Jurkat细胞增殖的影响,Western blot法检测凋亡蛋白caspase-3、细胞膜表面受体CD45、CD71以及细胞内部信号分子p-ERK、p-JNK、t-ERK和t-JNK蛋白表达水平。结果1 g/L、2 g/L和5 g/L SPP组细胞增殖抑制率依次升高,分别为53.286%±3.112%、80.075%±4.240%和86.430%±4.614%。2 g/L、5 g/L SPP组cleaved caspase-3蛋白表达水平高于对照组,5 g/L SPP组高于1 g/L SPP组(P<0.05)。1 g/L、2 g/L SPP组CD45蛋白表达水平高于对照组(P<0.05),CD71蛋白表达水平与对照组差异无统计学意义;5 g/L SPP组CD45蛋白表达水平均高于对照组、1 g/L和2 g/L SPP组;CD71蛋白表达水平低于对照组(P<0.05),与1 g/L和2 g/L SPP组差异无统计学意义。对照组、1 g/L SPP组、2 g/L SPP组和5 g/L SPP组p-ERK蛋白表达水平依次升高,组间多重比较差异均有统计学意义;各组间t-ERK、p-JNK和t-JNK蛋白表达水平差异均无统计学意义。结论SPP对Jurkat细胞具有杀伤作用,其机制可能是SPP通过影响细胞膜表面受体CD45和CD71的表达,将凋亡信号传递到细胞内部,通过活化ERK,最终活化caspase-3,诱导细胞凋亡。

螺旋藻蛋白激酶提取物对血栓形成抑制作用

目的研究螺旋藻激酶(SPK)对血栓形成的影响及其作用机制。方法小鼠静脉注射螺旋藻激酶提取物,用毛细管法和玻片法比较生理盐水组与螺旋藻激酶组凝血时间;大鼠取血浆体外实验加入螺旋藻激酶提取物,体内股静脉注射螺旋藻激酶提取物,然后分别测定凝血时间(CT)、血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)及血浆凝血酶时间(TT),观察螺旋藻激酶提取物对血栓形成的作用。结果体外实验结果显示,PT分别为(23.84±3.26),(23.28±4.4),(57.64±6.69)m in;APTT分别为(23.94±3.27),(24.95±2.82),(37.15±5.96)m in;TT分别为(39.08±2.46),(69.18±5.05),(88.64±11.19)m in。体内实验PT分别为(15.66±0.56),(18.33±1.81),(57.64±6.69)m in;APTT分别为(23.94±3.27),(24.95±2.82),(37.15±5.96)m in,TT分别为(39.08±2.46),(69.18±5.05),(88.64±11.19)m in。表明螺旋藻激酶使小鼠血液凝固时间延长,并具有明显的剂量-效应依赖关系。结论螺旋藻蛋白激酶提取物具有明显抑制血栓形成的作用。