Id2通过非HLH结构域促进MCF-7细胞的侵袭性

目的:观察Id2基因转染乳腺癌细胞MCF-7后对细胞生长、侵袭能力的变化,探讨Id2基因缺失HLH结构域后对细胞的影响。方法:以携带Id2-DBM和Id2-DBM-δHLH基因的质粒(pCDNA3.1-Id2-DBM和pCDNA3.1-Id2-DBM-δHLH)经脂质体介导转染MCF-7细胞。RT-PCR法检测转染后Id2、Id2-DBM和Id2-DBM-δHLH mRNA表达水平;MTT法检测MCF-7细胞增殖曲线;划痕实验、transwell小室检测细胞的迁移能力;Western Blot分析Id2对MCF-7细胞E-cad表达的影响。结果:mRNA水平显示质粒均成功转入;细胞生长曲线显示增殖无显著差异;与空载组比较,转染pCDNA3.1-Id2-DBM和pCD-NA3.1-Id2-DBM-δHLH后侵袭能力增强,且E-cad表达降低。结论:Id2蛋白的过表达可以促进乳腺癌细胞MCF-7的侵袭能力,与E-cad的降低有关,且该作用在缺失HLH结构域后仍然存在。

果蝇Tap蛋白结构与功能的生物信息学分析

目的利用生物信息学方法分析果蝇Tap蛋白的结构和功能。方法基于NCBI数据库中果蝇Tap蛋白的氨基酸序列,从蛋白质理化性质、跨膜区、信号肽、亚细胞定位、结构域、三维结构及物种间同源蛋白进化关系等方面进行分析。结果Tap蛋白为不稳定亲水性蛋白,无跨膜区和信号肽,在细胞核中发挥生物学效应,具有碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)结构域。Tap蛋白与来源于NeuroD1的模板2ql2.1.B有61.02%的氨基酸序列一致,Tap蛋白与人类和啮齿动物的编码产物高度同源,在系统发生树中距离最近。结论果蝇Tap蛋白具有bHLH蛋白家族的典型结构,可能在果蝇胚胎发育早期的神经发生、分化等过程中发挥作用。

HLH缺失型Id2候选相互作用蛋白

目的:筛选可以与螺旋-环-螺旋(HLH)结构域缺失的Id2相互作用的蛋白。方法:用重叠延伸PCR方法将Id2中的HLH结构域缺失,并插入到pGBKT7载体,构建BD:Id2-DBM-δHLH融合诱饵质粒;构建MCF-7细胞的dscDNA文库;采用共转化方法进行1d2-DBM-δHLH相互作用蛋白的酵母双杂交筛选,采用PCR方法扩增阳性克隆中的AD:cDNA序列并测序;将获得的AD:cDNA质粒分别与BD:Id2-DBM-δHLH诱饵质粒共转化酵母进行配对验证。结果:酵母双杂交方法共筛选到19个阳性克隆,PCR方法在这19个克隆中共扩增到28条片段,序列测定证实含18个不同的基因,对其中的13个进行配对验证后证实了其中8个与HLH缺失型Id2相互作用,这8个基因分别是:UXT、VIM、KRT7、FHL2、SEI1、PCBP1、SIVA和LSM2。结论:本研究首次利用HLH缺失型Id2作为诱饵,利用酵母双杂交技术筛选识别了一族新的Id2相互作用蛋白,为进一步研究Id2的功能调控以及非HI.H依赖的功能活性奠定基础。