幽门螺杆菌临床菌株四环素耐药性及其16S rRNA基因突变分析

目的探讨幽门螺杆菌对四环素的耐药性,对四环素耐药菌株进行耐药基因突变位点分析,为临床根除幽门螺杆菌选择敏感抗生素以及为患者个体化治疗提供参考。方法分离培养胃黏膜组织中的幽门螺杆菌,采用琼脂稀释法进行幽门螺杆菌四环素药物敏感性检测,聚合酶链反应(PCR)法扩增四环素耐药菌株的16S rRNA基因,测序并对其基因突变位点进行分析。结果成功分离幽门螺杆菌82株,四环素耐药菌株5株,耐药率为6%。本地区幽门螺杆菌的四环素耐药基因为AGA926-928CGA的单碱基突变,另外2株耐药菌株分别发生了G970A的突变及A1119G的突变。结论本地区幽门螺杆菌临床菌株四环素耐药率较低。16S rRNA基因中的A926C突变与幽门螺杆菌对四环素耐药有关。

幽门螺杆菌分离培养技术的改进

探讨自制的改良布氏活性炭巧克力培养基 ,置厌氧罐蜡烛培养环境分离临床粘膜标本幽门螺杆菌 ( Hp)的检出率。结果表明 :66例粘膜标本中分离出 Hp5 4株 ( 81.8% ) ,4 4株 Hp滤液有 2 4株 ( 5 4 .5 % )具有细胞毒活性 ,其中 2 6例消化性溃疡患者有 18例 ( 69.2 % ) ,18例慢性胃炎患者有 6例 ( 3 3 .3 % )为 Hp( Toxin+ )感染。结果提示 :通过对 Hp生物学性状和毒素的检测结果证实 ,该法可用于临床粘膜标本

贵州省幽门螺杆菌临床菌株的分离培养

目的:分离培养贵州省幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H pylori)的临床菌株,并探讨临床菌株成功分离培养患者的一般资料.方法:收集因上消化道症状就诊于我院行胃镜检查的患者98例,取胃窦黏膜经转运、接种、培养、鉴定、传代、增菌及分离培养H pylori.分析比较H pylori培养阳性患者在不同民族、取材部位、病种、性别及有无胃炎家族史等差异.结果:98例患者37例分离出H pylori临床菌株,阳性率38%.汉族标本培养阳性率为36%,少数民族标本为44%,2组无显著差异.其中苗族组培养阳性率为100%(4/4),与汉族组比较显著升高(P<0.05).慢性胃炎伴糜烂及消化性溃疡患者培养阳性率分别为39%(11/28)、46%(24/52),较单纯胃炎及胃癌患者显著增高(均P<0.05).30-60岁年龄段培养阳性率较60-80岁显著升高(45%vs21%,P<0.05).男性患者培养阳性率较女性显著提高(48%vs24%,P<0.05).有胃炎家族史患者培养阳性率与无胃炎家族史患者比较无显著差异.结论:本研究系我省首次成功分离出H pylori临床菌株,为贵州省H pylori基础及临床的研究奠定了基础.

幽门螺杆菌临床分离株的REPPCR分析

应用REP PCR对来自20例单纯性胃炎和20例消化性溃疡病人的幽门螺杆菌菌株进行基因分型,并运用SAS软件进行聚类分析。结果显示这些菌株按照基因型被分为两大类,但两种来源的菌株在两大类中的比例无明显差异(P>0.1),提示幽门螺杆菌临床分离株REP PCR基因型与致病性之间不存在明显相关性。

幽门螺杆菌临床菌株的分离培养和鉴定

目的：建立一种幽门螺杆菌（H.pylori）临床菌株的分离培养的方法。方法：取临床胃黏膜组织标本88株,接种于10%绵羊全血的哥伦比亚选择性培养基上,37℃、5%O2、10%CO2、85%N2培养3-5 d后,挑取血平板上透明细小可疑菌落进行革兰氏染色和尿素酶试验,对阳性菌落进行扩大纯培养,提取细菌DNA,PCR扩增H.pylori 16sRNA、Cag A基因,电泳并进行测序鉴定。结果：成功从临床胃黏膜组织中分离培养出H.pylori,88例胃黏膜组织标本中分离培养并鉴定出H.pylori 19株,阳性率为22%;对16sRNA及Cag A基因进行扩增,电泳可见目的条带,并对16sRNA扩增产物测序,与H.pylori国际标准菌株26695比对,同源性为95%-99%。结论：37℃、5%O2、10%CO2、85%N2条件下10%绵羊全血的哥伦比亚选择性培养基上能成功分离培养出H.pylori临床株。

烛缸法分离培养及冷冻法保存幽门螺杆菌

目的研究幽门螺杆菌(H elicobacter py lori,H py lori)简易分离培养及保存方法,构建H py lori小型菌库。方法首先采用H py lori选择培养基,以烛缸法分离培养不同来源的标本,然后以革兰染色显微镜形态检查及生化试验鉴定为H py lori,最后把鉴定为H py lori的纯培养物,分别置于布氏肉汤、50%甘油血清肉汤、50%甘油蛋清3种不同的保存液,-20°C保存,并在保存后1、6、12 d分别检测其存活率。结果培养58份临床胃镜活检标本,获13株H py lori;56名在校大学生口腔和粪便标本,获8株H py lori;共获21株H py lo i,经布氏肉汤、50%甘油血清肉汤、50%甘油蛋清3种保存液-20°C保存,21株H py lori存活率在1 d和6 d时,3者均大于90%,统计学无显著差异;12 d时,50%甘油血清肉汤存活率大于80%,布氏肉汤和50%甘油蛋清均低于50%,差异有统计学意义。结论采用烛缸法可以成功分离培养H py lori,以50%甘油血清肉汤-20°CH py lori可存活12 d以上,两者结合可以在一般实验室构建简易的过渡性H py lori小型菌库,方便H py lori菌种的使用。

幽门螺杆菌形成空泡细胞毒素的提纯与特征分析

运用水油提、盐析及凝胶过滤色谱法对幽门螺杆菌ＹＣ－１１株所分泌的形成空泡细胞毒素进行了提取。纯化的形成空泡细胞毒素在ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳中表现为单一条带，分子量约为８７０００，在ＰＨ２．４～６．４的环境中表现高细胞毒性。

贵州小型猪幽门螺杆菌的分离及其鉴定

目的对贵州小型猪幽门螺杆菌进行分离鉴定。方法采集1只生长发育异常迟缓的小型猪标本，采用细菌学分离培养、生化鉴定、药敏试验、血清学试验、PCR检测等方法进行鉴定，并对细菌的分子生物学特征进行分析。结果分离到1株细菌，经鉴定为幽门螺杆菌（HPp0812）。用螺杆菌属16SrRNA基因和幽门螺杆菌ureA基因特异引物对HPp0812细菌的PCR扩增为阳性，经核苷酸序列测定分析证实上述序列与幽门螺杆菌参考株基因序列同源性高达99％。结论首次从中国小型猪中分离到了幽门螺杆菌，为进一步研究该菌及开展流行病学调查提供了科学依据。

幽门螺杆菌分离培养和指纹分析

目的 :建立幽门螺杆菌经济实用的分离培养方法 ,并分析胃癌高发的西安地区幽门螺杆菌 ( Hp)分离株的指纹特征。方法 :随机选取 50例胃粘膜标本 ,同时接种于改良的幽门螺杆菌培养基、哥伦比亚培养基和普通羊血琼脂上 ,分析它们之间的培养阳性率差异。采用随机扩增多态性 DNA聚合酶链反应 ( RAPD-PCR)技术对所获得的 Hp进行指纹分析。结果 :分离培养阳性率比较 ,改良的幽门螺杆菌培养基和哥伦比亚培养基之间无差异 ( P>0 .0 5) ,均与羊血培养基差异显著 ( P<0 .0 5)。在所有标本中有 1 2例胃体、胃窦均分离培养出 Hp菌株 ,指纹分析发现 ,3例 6株具有相同的指纹 ( 2 5% ) ,余 9例 1 8株指纹特征不相同 ( 75% )。结论 :改良的幽门螺杆菌培养基完全可以替代哥化比亚培养基进行幽门螺杆菌分离培养。指纹分析表明西安地区人群中以胃窦、胃体感染不同菌株者多见 。

幽门螺杆菌分离培养的研究

采用细菌培养法及快速尿素酶法分别检测了１６９例消化道疾病患者幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉ－ｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ，ＨＰ）感染情况。标本经２０％葡萄糖运送培养基运送后，分别涂布于选择性培养基和本室改良的选择性培养基，３７℃微氧环境（５％Ｏ２，１０％ＣＯ２，８５％Ｎ２）培养８天。标本同时采用快速尿毒酶法进行检测。结果表明，细菌培养法与尿素酶法检测阳性率接近，分别为４６％和５５％；细菌培养第６天与第８天其阳性检出率相同；选择性培养基与本室改良选择性培养基对幽门螺杆菌的检出率差别明显，分别为３４％（１７／４９）和５１％（６１／１２０），同时其杂菌生长率分别为５４％（２９／４９）和２５％（３０／１２０）。

幽门螺杆菌分离培养研究现状

本文综述幽门螺杆菌(HP)分离培养和菌种保存等各个环节的研究现状。长期以来HP分离培养主要用含血培养基,目前各国学者已相继研制出多种无血培养基,并建立了相应的培养条件,使该菌培养简便、易行。

幽门螺杆菌尿素酶抗原的分离及纯化

本实验采用新型离子交换剂SourceQ15为分离介质 ,用氯化钠盐浓度梯度洗脱法 ,从幽门螺杆菌超声处理上清液中纯化了幽门螺杆菌尿素酶抗原 ,所得纯化物经SDS PAGE电泳分析证明具有良好的纯度 ,只含有分子量为 6 6 0 0 0及 2 95 0 0两种蛋白成分 ,与幽门螺杆菌两种亚基的大小完全相同。以此纯化尿素酶为抗原用于ELISA检测临床确诊的幽门螺杆菌感染者血清 12例及未感染幽门螺杆菌者血清 18例 ,其ELISA阳性及阴性符合率达到10 0 %。提示本法纯化的幽门螺杆菌尿素酶抗原用于ELISA检测幽门螺杆菌感染者血清抗体具有良好的前景。

Karmali和Columbia培养基初次分离幽门螺杆菌效果的比较

目的:比较两种基础培养基对幽门螺杆菌(H.pylori)感染者的胃黏膜标本初次分离率的差异.方法:将168份13C呼气试验阳性患者的胃黏膜标本研磨后,等量接种于Karmali和Columbia血琼脂培养基,置于37℃微需氧环境(50mLLO2,100mLLCO2和850mLLN2),分别培养24、48、72、96h,观察细菌的生长情况、进行菌落鉴定并比较H.pylori阳性率的差异.结果:培养24h,Karmali和Columbia培养基上H.pylori阳性检出率分别为9.5%和7.1%,两者之间没有显著差异(P=0.125);培养48、72和96h后,Karmali培养基的检出率显著高于Columbia培养基(82.1%vs45.8%,94.6%vs79.2%,97.0%vs88.7%,P<0.05).结论:Karmali培养基对H.pylori初次分离的效果明显优于Columbia培养基.Karmali培养基是一种有效的H.pylori初次分离培养的培养基.

应重视幽门螺杆菌的分离培养

目的 通过比较 3种不同幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)感染诊断方法之间的差异 ,使临床重视Hp的分离培养工作。 方法 对 2 0 0 0年我院胃镜检查者 312例同时作Hp分离培养、病理切片和快速脲酶试验 ,比较其检出率。结果 近期未用抗菌药物治疗的十二指肠溃疡患者活检材料中Hp分离培养检出率达93.75 % ,把其他 2种方法与分离培养相比 ,则快速脲酶试验存在 2 0 .72 %的假阳性和 3.98%的假阴性结果 ,病理切片存在 8.11%的假阳性和 32 .84%的假阴性结果 ;快速脲酶试验和病理切片组合后与分离培养相比 ,则存在 2 .99%的假阴性和 2 3.42 %的假阳性。结论 分离培养是Hp感染诊断的金标准 。

采用改良的克氏双糖铁琼脂培养基从漱口液中分离幽门螺杆菌的实验探索

目的探索高效、简捷、方便、低廉的方法从人群漱口液中分离幽门螺杆菌。方法被检者用生理盐水漱口,回收漱口液,离心,弃上清液,取沉淀物置脑心浸液培养基增菌培养。取菌液到改良的克氏双糖铁琼脂培养基中分离培养,挑取变红的菌落进行纯培养。对纯培养物进行染色检查和生化鉴定。结果漱口液中分离培养获得的纯培养物为幽门螺杆菌。结论用改良的克氏双糖铁琼脂培养基能比较快速准确地分离出漱口液中的幽门螺杆菌。

不同幽门螺杆菌临床分离株的菌体蛋白

目的：了解不同幽门螺杆菌的菌体蛋白构成及其免疫印迹条带与胃十二指肠疾病的关系。方法：将６株幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ，Ｈｐ）临床分离株的菌体蛋白进行十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ），以免疫印迹技术分析其免疫原性；以６株Ｈｐ菌体蛋白的等量混合物为抗原，检测了６２例胃十二指肠疾病患者血清抗ＨｐＩｇＧ的免疫印迹条带。结果：凝胶上６株Ｈｐ的菌体蛋白条带非常相似，均含６７．０ｕ、６５．０ｕ、５７．０ｕ３条主要蛋白条带，但各主要蛋白条带的含量在６株Ｈｐ中各不相同（薄层扫描法）；除共同含有６７．０ｕ、５７．０ｕ、５５．０ｕ、５２．０ｕ４条免疫反应条带外，６株Ｈｐ的其余免疫反应条带的检出率及颜色深浅有明显差异；２４．８ｕ免疫反应条带在胃癌组的检出比例（１１／１２）显著高于胃溃疡组（４／１３）、十二指肠溃疡组（７／１４）和慢性胃炎组（１／１２）。结论：不同Ｈｐ临床分离株的菌体蛋白结构相似，但其蛋白含量和免疫原性有差异；２４．８ｕ蛋白可能与胃癌有相关性。