螺甾皂苷类化合物的体外抗人肝癌细胞增殖作用

目的通过体外实验初步探讨从茄科植物龙葵中提取的螺甾皂苷类化合物对人肝癌细胞株FHCC-98的细胞增殖抑制作用。方法采用MTT筛选由龙葵中提取分离的29种单体化合物,测定其在体外对人肝癌细胞株FHCC-98的生长抑制作用,以人正常肝细胞QSG7701为阴性对照。结果首先利用单浓度(100μmol/L)、单时间点(48h)对化合物进行初筛,其中有3个化合物符合要求,可以进行复筛,分别为solamar-gine;degalactotigonin;solasonine。复筛采用多浓度点(100,50,25,12.5,6.25μmol/L)、单时间点(48h)对化合物检测细胞毒性(IC50)。IC50值>100表示无细胞毒性。结论从龙葵中分离提取的螺甾皂苷类化合物solas-onine对人肝癌高侵袭细胞株的增殖具有一定抑制作用。

利用重组F26G酶实现呋甾皂苷向螺甾皂苷的体外生物转化

用BamHⅠ和XbaⅠ两种限制酶酶切质粒 pKG2 7,获得了编码F2 6G(F2 6G :furostanolgly coside 2 6 O β glucosidase)的cDNA ,然后将其重组到表达载体 pET 2 2b上而得到pET 2 2b CSF2 6G ,利用大肠杆菌E .coliBL2 1进行表达 ,用胞内可溶蛋白进行酶反应 ,通过TLC、HPLC分析证明重组菌表达出高活性的F2 6G酶 。

蒺藜总螺甾皂苷对人卵巢透明细胞癌荷瘤裸鼠肿瘤抑制作用的实验研究

目的研究蒺藜总螺甾皂苷对人卵巢透明细胞癌荷瘤裸鼠肿瘤的抑制作用。方法采用人卵巢透明细胞癌接种裸鼠待长出实体瘤后,用第二代实体瘤按每鼠约1 mm3瘤组织块移植裸鼠皮下建立人卵巢透明细胞癌裸鼠模型;用蒺藜总螺甾皂苷(高剂量0.42 mg/m L、中剂量0.21 mg/m L)分别给实验组裸鼠灌胃0.3 m L/10 g,对照组只给饮用水,每日1次,连续30 d。每周测量体质量和肿瘤大小2次,给药30 d后处死小鼠,解剖称肿瘤重量,计算抑瘤率,评价蒺藜总螺甾皂苷(高剂量、中剂量)对裸鼠荷瘤的抑制作用;结果蒺藜总螺甾皂苷高剂量和蒺藜总螺甾皂苷中剂量对人卵巢透明细胞癌荷瘤裸鼠有抑制肿瘤作用,抑瘤率分别87.61%和95.26%,其中中剂量抑制肿瘤与对照组比较有显著性差异(P<0.01),高剂量组有统计学意义(P<0.05);结论蒺藜总螺甾皂苷(高剂量、中剂量)均能抑制人卵巢透明细胞癌荷瘤裸鼠肿瘤作用。

小桃儿七螺甾烷皂苷及其抗肿瘤细胞活性

利用层析法从小桃儿七中分离得到单体螺甾烷皂苷,利用核磁共振波谱技术鉴定其结构,采用MTT法测试其体外乳腺癌MCF-7细胞株、人宫颈癌Hela细胞株和人肝癌Hep G2细胞株的细胞毒活性,检测其对正常929细胞株的细胞毒活性。结果表明,该单体对人宫颈癌Hela细胞株具有抑制作用(IC50=71.23μmol/L),对正常929细胞株无明显抑制作用。

知母、麦冬和薯蓣中螺甾体皂苷的质谱裂解规律研究

目的:运用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法研究知母、麦冬和薯蓣中螺甾烷醇型甾体皂苷的[M+NH_4]^+离子质谱裂解行为。方法:采用电喷雾离子源,在阳离子模式下运用低、中、高不同碰撞能,研究5种螺甾烷醇型甾体皂苷质谱裂解规律。结果:总结了5种螺甾烷醇型甾体皂苷氨化离子的质谱裂解行为,其特征为螺甾烷醇型甾体皂苷首先失去17 Da,然后由外端至内端依次中性失去C-3上的各个糖基,生成特征性的[苷元+H]^+离子,最后[苷元+H]^+离子E环断裂脱去相应侧链和水分子。结论:阐明了螺甾烷醇型甾体皂苷质谱裂解行为,该研究将有助于知母、麦冬和薯蓣相关甾体皂苷类化合物的结构解析。

胡芦巴来源的甾体皂苷研究进展

中药胡芦巴是豆科一年生草本植物胡芦巴(Trigonella foenum-graecum L.)的干燥种子,富含甾体皂苷。本实验室对胡芦巴中甾体皂苷进行了系统研究,包括原生呋甾皂苷及其酶解产物的分离鉴定、利用液质联用技术对甾体皂苷类成分的快速表征与结构分析,以及利用超临界流体色谱技术对螺甾皂苷C-25R/S异构体的分析、制备分离等。本文对本实验室相关研究进行总结,以期有助于胡芦巴的开发与利用,也为今后中药的化学成分研究工作提供借鉴。

蒺藜中螺甾总皂苷和呋甾总皂苷抑制肺癌细胞活性对比

为研究蒺藜中螺甾总皂苷和呋甾总皂苷对肺癌A549细胞株抑制作用的相对强弱,将蒺藜皂苷分为螺甾总皂苷和呋甾总皂苷并配成不同浓度的样品溶液,再将不同种类、不同浓度的样品溶液加入到细胞悬液中,以PBS缓冲液为阴性对照组,细胞培养箱中孵育。反应结束后,每孔中加入CCK-8检测试剂培养,反应1.5 h。最后用酶标仪检测各孔在450 nm处的光密度值OD450nm,计算细胞存活率。结果表明,浓度相同的蒺藜螺甾总皂苷和呋甾总皂苷在相同条件下,螺甾总皂苷对肺癌A549细胞的抑制率明显比蒺藜呋甾总皂苷效果好,在蒺藜总甾体皂苷中抑制肺癌细胞活性的主要成分是蒺藜螺甾总皂苷。

蒺藜中螺甾总皂苷和呋甾总皂苷清除羟基自由基活性对比研究

为研究蒺藜中螺甾总皂苷和呋甾总皂苷清除羟基自由基能力的相对强弱,在玻璃试管中加入FeSO4和水杨酸溶液,再加入不同浓度的蒺藜呋甾总皂苷和蒺藜螺甾总皂苷水溶液,将此溶液摇匀加入H2O2溶液,再摇匀后置于37℃恒温水浴锅中反应后取出;以等量的水溶液作为空白对照,用紫外-可见分光光度计在510 nm处测量其吸光度,计算样品对羟基自由基的清除率。结果表明,浓度相同的蒺藜螺甾总皂苷和呋甾总皂苷在相同条件下,螺甾总皂苷清除羟基自由基率比呋甾总皂苷效果好,在蒺藜总甾体皂苷中起抗氧化活性的主要成分是蒺藜螺甾总皂苷。

蒺藜中螺甾总皂苷和呋甾总皂苷抑制酪氨酸酶活性对比研究

为研究蒺藜中螺甾总皂苷和呋甾总皂苷抑制酪氨酸酶能力的相对强弱,在玻璃试管中加入5.0 mL的pH=6.8的磷酸缓冲溶液、5.0 mL的L-酪氨酸溶液,再加入不同浓度的蒺藜呋甾总皂苷和蒺藜螺甾总皂苷水溶液,加入酪氨酸酶后置于37℃恒温水浴锅中反应30 min后取出;以等量的水溶液作为空白对照,用紫外-可见分光光度计在475 nm处测量其吸光度,计算样品对酪氨酸酶的抑制率。结果表明,浓度相同的蒺藜螺甾总皂苷和呋甾总皂苷在相同条件下,螺甾总皂苷抑制酪氨酸酶的能力比蒺藜呋甾总皂苷效果好,在蒺藜总甾体皂苷中起抑制酪氨酸酶活性的主要成分是蒺藜螺甾总皂苷。

知母皂苷类化合物的质谱裂解规律研究进展

目的总结归纳知母皂苷类化合物的质谱裂解规律。方法通过查阅分析近年来国内外文献,结合本实验室研究工作,整理出46种知母皂苷类成分化学结构信息,并比较它们在正负离子模式下的质谱裂解途径及碎片离子。结果螺甾烷醇类皂苷首先丢失C-3位糖链上的各单糖,然后E环断裂脱去侧链(如144u和114u),最后生成苷元的特征碎片离子m/z255或253或251、m/z285或283或281;而呋甾烷醇类皂苷首先脱去C-22位的—OH/—OMe后出现[M+H-H2O]+/[M+H-MeOH]+的分子离子峰,然后丢失C-26位糖链,其进一步的裂解规律与螺甾烷醇类皂苷类似。结论正负离子模式下的质谱裂解规律及其它们的特征碎片离子将有助于知母皂苷类化合物的结构解析。

基于转录组挖掘球药隔重楼螺甾烷型重楼皂苷生物合成相关基因

目的以球药隔重楼Paris fargesii根茎、茎和叶为材料,探究螺甾烷型重楼皂苷的生物合成基因。方法采用HPLC分析6个螺甾烷型重楼皂苷含量,进一步利用Illumina HiSeq X Ten平台进行转录组测序,结合定量和转录组数据进行生信分析。结果6个螺甾烷型重楼皂苷在球药隔重楼根茎、茎和叶中的含量具有显著差异。Illumina转录组测序共获得61755条非冗余unigenes,其中30263条(49.0%)被成功注释。催化生成薯蓣皂苷元的31个关键基因均被成功鉴定,且基因表达模式与皂苷的积累水平总体一致,其中IDI、8,7SI-4、CYP90G4、SMO2-2、C5-SD1、CYP51G、C14-R-2、HMGCR、CPI-5、CYP94D108、CAS、HMGCS、SMO1-3、SSR1-3、SQS、ispH和DXR等基因与重楼皂苷的积累呈显著正相关。共获得了61条尿苷二磷酸糖基转移酶(UGT)基因,其中30条潜在参与重楼皂苷的糖基化修饰。结论球药隔重楼根茎、茎和叶中皂苷合成基因表达模式与皂苷积累规律存在一致性,鉴定的基因可指导该类活性产物的生物合成途径解析。

UPLC-Q-TOF-MS^E结合相对保留时间在线快速鉴定麦冬中甾体皂苷类成分

目的:采用超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MSE)表征并快速在线鉴定麦冬中甾体皂苷类成分;结合呋甾皂苷在反向色谱上的保留规律,鉴别同分异构体。方法:运用2种反相色谱柱(ACQUITY UPLC HSS T3和Agela Venusil XBP C18-2),在2种溶剂系统(0.1%甲酸/水-0.1%甲酸/乙腈,丙酮-水)和3个洗脱条件下对系列呋甾皂苷的色谱保留规律进行总结。利用UPLC-Q-TOF-MSE对麦冬成分进行分析,获得质谱数据。结果:3种色谱条件下呋甾皂苷的相对保留时间一致,呈现如下保留规律:甾体皂苷中糖链结构相同,苷元上羟基的数目越多保留时间越短;仅羟基位置不同时,保留时间为1位羟基<17位羟基<14位羟基;仅C-26位糖链糖基连接位置不同时,葡萄糖-(1→6)-葡萄糖<葡萄糖-(1→2)-葡萄糖;从麦冬表征的图谱中共鉴定了21个色谱峰,其中14个呋甾皂苷,7个为螺甾皂苷。结论:色谱保留时间能为呋甾皂苷同分异构体的液质联用在线鉴定提供有益的数据支持。

知母中皂苷类成分研究进展

以化学结构进行归类,对知母中皂苷类化学成分的研究现状进行阐述,并对其药理作用加以简要介绍。全面详尽的介绍了知母中40种甾体皂苷成分的结构相关信息及部分皂苷成分的药理作用,为知母的进一步药效研究及成分分析等提供重要依据。

基于UPLC-Q-TOF/MS技术的玉竹化学成分分析

目的应用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF/MS)对玉竹甲醇提取物进行了化学成分分析。方法色谱采用waters C18色谱柱(2.1×100 mm,1.7μm),0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈梯度洗脱,质谱负离子模式扫描。结果共表征或鉴定30个化合物,包括15个高异黄酮类成分,8个酰胺生物碱类成分、4个螺甾皂苷类成分及3个其他成分,其中8个化合物为玉竹质谱分析的首次报道。结论 UPLC-QTOF/MS技术能够提供丰富稳定的裂解碎片离子,为进一步研究玉竹体内药效物质基础提供科学基础数据。

蒺藜对卵巢癌裸鼠生长的实验研究

目的:观察蒺藜螺甾皂苷对卵巢癌动物模型肿瘤生长的抑制影响。方法:采用BALB/c小鼠接种人卵巢癌实体瘤方法建立卵巢癌模型,用蒺藜螺甾皂苷灌胃0.5ml/只,每日1次,连续30天。每周连续测量体重和肿瘤大小2次,计算瘤体的体积,观察裸鼠的生存时间,观察蒺藜螺甾皂苷对肿瘤生长的影响。结果:蒺藜螺甾皂苷对裸鼠荷瘤有明显的抑制作用;蒺藜螺甾皂苷能延长荷瘤裸鼠的生存期。结论:经初步研究,蒺藜螺甾皂苷有抑制人卵巢癌肿瘤生长作用,可延长生存期,值得进一步探讨。

七叶一枝花和滇重楼提取物的制备、表征及其体外溶血作用分析

目的:比较七叶一枝花和滇重楼提取物体外溶血作用强弱,探讨不同结构类型重楼皂苷的溶血作用特点。方法:采用75%乙醇对七叶一枝花和滇重楼根茎进行提取,采用大孔吸附树脂对各类物质进行富集,采用快速制备色谱技术对目标组分群进行定向制备,基于对照品对照和在线紫外吸收光谱对总取物、部位和组分进行化学信息表征,采用分光光度法测定各样品的溶血率。结果:根据质量浓度-溶血率曲线计算七叶一枝花和滇重楼总提物的50%溶血浓度分别为34.97,46.52 mg·L^(-1)。在2.5~10 mg·L^(-1)时,七叶一枝花部位中仅有70%乙醇洗脱部位(PPC-D)显示了较强溶血作用,滇重楼部位中70%乙醇和95%乙醇洗脱部位(PPY-D和PPY-E)均显示溶血作用。5.0,10 mg·L^(-1)时PPC-D的溶血率分别为78.00%和95.68%,PPY-D(PPY-E)的溶血率分别为31.86%和63.29%(15.82%和55.25%)。在2.5~5.0 mg·L^(-1)时,七叶一枝花的组分呋甾皂苷和薯蓣皂苷未显示溶血作用,偏诺皂苷组分在质量浓度为2.5,5.0 mg·L^(-1)的溶血率分别为5.89%和90.33%;滇重楼的呋甾皂苷组分同样未显示溶血作用,偏诺皂苷(薯蓣皂苷)组分在质量浓度为2.5,5.0 mg·L^(-1)的溶血率分别为0.51%和57.75%(4.29%和49.39%)。结论:七叶一枝花和滇重楼均具有溶血作用,其中七叶一枝花强于滇重楼;七叶一枝花溶血成分群主要为偏诺皂苷类,滇重楼溶血成分群为偏诺皂苷和薯蓣皂苷;两者呋甾皂苷均无溶血作用;总提物溶血作用强弱主要由其中所含偏诺皂苷和薯蓣皂苷类成分的绝对含量和相对比例来决定。